输血前传染病因子检测项目操作规程.docx
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输血前传染病因子检测项目操作规程
第十节输血前传染病因子检测项目操作规程
乙肝病毒表面抗原诊断操作规程
一、操作步骤:
1、将试剂盒从冰箱中取出至室温中平衡30分钟后使用。
2、将标本对应微孔按顺序编号。
3、每孔加入待测标本50微升,设阴、阳性对照各两孔,每孔加入阴性对照(或阳性对照)各1滴,并设空白对照1孔。
4、每孔加入酶结合物1滴,(空白对照孔除外)充分混匀,封板,置37度孵育30分钟。
5、手工洗板:
弃去孔内液体,洗涤液注满各孔,静置5秒,甩干,重复5次后拍干。
洗板机洗板:
选择洗涤5次程序后拍干。
6、每孔加显色剂A液、B液各1滴,充分混匀,封板,置37度孵育15分钟。
7、每孔加终止液1滴,混匀。
8、用酶标仪读数,取波长450nm(建议使用双波长的酶标仪比色,参考波长630nm),先用空白孔校零,然后读取各孔OD值。
二、结果判断:
样品OD值/阴性对照平均OD值大于等于2.1判断为阳性,否则为阴性。
阴性对照OD值低于0.05作0.05计算,高于0.05按实际OD值计算。
三、注意事项:
1、使用前试剂应摇匀,并弃去1~2滴后垂直滴加。
2、封片不能重复使用。
3、结果判断须在反映终止后10分钟内完成。
4、不同批号的试剂不可混用。
5、待测标本不可用NaN3防腐,如需稀释标本,请用小牛血清稀释。
6、试剂盒应视为有传染性物质,请按传染病实验室检查规程处理。
乙肝病毒表面抗体诊断操作规程
一、操作步骤:
1、将试剂盒从冰箱中取出至室温中平衡30分钟后使用。
2、将标本对应微孔按顺序编号。
3、每孔加入待测标本50微升,设阴、阳性对照各两孔,每孔加入阴性对照(或阳性对照)各1滴,并设空白对照1孔。
4、每孔加入酶结合物1滴,(空白对照孔除外)充分混匀,封板,置37度孵育30分钟。
5、手工洗板:
弃去孔内液体,洗涤液注满各孔,静置5秒,甩干,重复5次后拍干。
洗板机洗板:
选择洗涤5次程序后拍干。
6、每孔加显色剂A液、B液各1滴,充分混匀,封板,置37度孵育15分钟。
7、每孔加终止液1滴,混匀。
8、用酶标仪读数,取波长450nm(建议使用双波长的酶标仪比色,参考波长630nm),先用空白孔校零,然后读取各孔OD值。
二、结果判断:
样品OD值/阴性对照平均OD值大于等于2.1判断为阳性,否则为阴性。
阴性对照OD值低于0.05作0.05计算,高于0.05按实际OD值计算。
三、注意事项:
1、使用前试剂应摇匀,并弃去1~2滴后垂直滴加。
2、封片不能重复使用。
3、结果判断须在反映终止后10分钟内完成。
4、不同批号的试剂不可混用。
5、待测标本不可用NaN3防腐,如需稀释标本,请用小牛血清稀释。
6、试剂盒应视为有传染性物质,请按传染病实验室检查规程处理。
乙肝病毒e抗原诊断操作规程
一、操作步骤:
1、将试剂盒从冰箱中取出至室温中平衡30分钟后使用。
2、将标本对应微孔按顺序编号。
3、每孔加入待测标本50微升,设阴、阳性对照各两孔,每孔加入阴性对照(或阳性对照)各1滴,并设空白对照1孔。
4、每孔加入酶结合物1滴,(空白对照孔除外)充分混匀,封板,置37度孵育30分钟。
5、手工洗板:
弃去孔内液体,洗涤液注满各孔,静置5秒,甩干,重复5次后拍干。
洗板机洗板:
选择洗涤5次程序后拍干。
6、每孔加显色剂A液、B液各1滴,充分混匀,封板,置37度孵育15分钟。
7、每孔加终止液1滴,混匀。
8、用酶标仪读数,取波长450nm(建议使用双波长的酶标仪比色,参考波长630nm),先用空白孔校零,然后读取各孔OD值。
二、结果判断:
样品OD值/阴性对照平均OD值大于等于2.1判断为阳性,否则为阴性。
阴性对照OD值低于0.05作0.05计算,高于0.05按实际OD值计算。
三、注意事项:
1、使用前试剂应摇匀,并弃去1~2滴后垂直滴加。
2、封片不能重复使用。
3、结果判断须在反映终止后10分钟内完成。
4、不同批号的试剂不可混用。
5、待测标本不可用NaN3防腐,如需稀释标本,请用小牛血清稀释。
6、试剂盒应视为有传染性物质,请按传染病实验室检查规程处理。
乙肝病毒e抗体诊断操作规程
一、操作步骤:
1、将试剂盒从冰箱中取出至室温中平衡30分钟后使用。
2、将标本对应微孔按顺序编号。
3、每孔加入待测标本50微升,设阴、阳性对照各两孔,每孔加入阴性对照(或阳性对照)各1滴,并设空白对照1孔。
4、每孔加入酶结合物1滴,(空白对照孔除外)充分混匀,封板,置37度孵育30分钟。
5、手工洗板:
弃去孔内液体,洗涤液注满各孔,静置5秒,甩干,重复5次后拍干。
洗板机洗板:
选择洗涤5次程序后拍干。
6、每孔加显色剂A、B液各1滴,充分混匀,封板,置37度孵育15分钟。
7、每孔加终止液1滴,混匀。
8、用酶标仪读数,取波长450nm(建议使用双波长的酶标仪比色,参考波长630nm),先用空白孔校零,然后读取各孔OD值。
二、结果判断:
CutoffValue计算:
COV=阴性对照平均OD值+阳性对照平均OD值/2标本OD值大于等于COV为阴性,标本OD值小于COV为阳性。
三、注意事项:
1、使用前试剂应摇匀,并弃去1~2滴后垂直滴加。
2、封片不能重复使用。
3、结果判断须在反映终止后10分钟内完成。
4、不同批号的试剂不可混用。
5、待测标本不可用NaN3防腐,如需稀释标本,请用小牛血清稀释。
6、试剂盒应视为有传染性物质,请按传染病实验室检查规程处理。
乙肝病毒核心抗体诊断操作规程
一、操作步骤:
1、将试剂盒从冰箱中取出至室温中平衡30分钟后使用。
2、将标本对应微孔按顺序编号。
3、每孔加入待测标本50微升(待测标本用生理盐水1:
30稀释,检测结果为临床意义,请用户自行选择),设阴、阳性对照各两孔,每孔加入阴性对照(或阳性对照)各1滴,并设空白对照1孔。
4、每孔加入酶结合物1滴,(空白对照孔除外)充分混匀,封板,置37度孵育30分钟。
5、手工洗板:
弃去孔内液体,洗涤液注满各孔,静置5秒,甩干,重复5次后拍干。
洗板机洗板:
选择洗涤5次程序后拍干。
6、每孔加显色剂A液、B液各1滴,充分混匀,封板,置37度孵育15分钟。
7、每孔加终止液1滴,混匀。
8、用酶标仪读数,取波长450nm(建议使用双波长的酶标仪比色,参考波长630nm),先用空白孔校零,然后读取各孔OD值。
二、结果判断:
CutoffValue计算:
原倍血清COV=阴性对照平均OD值乘以0.3。
1:
30稀释血清COV=阴性对照平均OD值乘以0.5。
标本OD值大于等于COV为阴性,标本OD值小于COV为阳性。
三、注意事项:
1、使用前试剂应摇匀,并弃去1~2滴后垂直滴加。
2、封片不能重复使用。
3、结果判断须在反映终止后10分钟内完成。
4、不同批号的试剂不可混用。
5、待测标本不可用NaN3防腐,如需稀释标本,请用小牛血清稀释。
6、试剂盒应视为有传染性物质,请按传染病实验室检查规程处理。
人类免疫缺陷病毒抗体检测规程
一、操作步骤:
1、将试剂盒从冰箱中取出,至室温中平衡30分钟后使用。
2、将标本对应微孔按顺序编号。
3、配液:
将50ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释至1000ml备用。
4、编号:
将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照3孔,阳性对照一型、二型各一孔,空白对照一孔。
5、加样:
分别在相应孔中加入待测样品或阴、阳性对照100ul。
6、温育:
覆盖黏胶纸,置37度孵育30分钟。
7、取出已孵育完毕的反应板,弃去粘胶纸,吸干板内液体,将洗涤液注满各孔(约300微升/孔),吸干,反复5次,在干净纱布上将板拍干。
8、每孔加酶结合物100微升,取新粘胶纸覆盖放映板,置37度孵育30分钟。
9、取出已孵育完毕的反应板,弃去粘胶纸,吸干板内液体,将洗涤液注满各孔(约300微升/孔),吸干,反复5次,在干净纱布上将板拍干。
10、每孔加入底物缓冲液50微升,TMB50微升,混匀,置37度显色10分钟。
11、加终止液50微升震荡反应板5秒钟,使之充分混匀。
12、在酶标度数仪上,取波长450nm(建议使用双波长酶标仪比色,参考波长630nm),仪空白对照孔校零,读取每孔吸收值(加终止液后,务必在15分钟内读数完毕)
二、结果判断:
抗HIV阳性对照OD值大于0.8,抗HIV阴性对照OD值小于0.08。
CutoffValue=阳性对照值乘以10%(若阳性对照OD值大于2.5按2.5计算)
标本OD值小于等于CutoffValue为阴性。
标本OD值大于CutoffValue为阳性。
三、注意事项:
1、在试剂的使用单位必须使当地卫生行政部门标准的HIV初筛试验室。
2、整个检测工作必须符合HIV试验室管理范围和生物安全守则规定,严格防止交叉感染。
操作时必须带手套,穿工作服,严格健全和执行消毒隔离制度。
3、HIV检测结果的判定不许以酶标仪的读数为准。
4、标本和酶结合物均应用加样器加注,并经常校对其准确性。
5、所有样品、洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
6、洗涤液若出现结晶,可置37度溶解。
7、粘胶纸不能反复使用。
8、微孔条从冷藏环境中取出时,应在室温平衡至无潮气方可使用,未用完的须放入有干燥剂的密封袋中保存。
梅毒甲苯胺红不加热血清试验
本试剂采用VDRL抗原重悬于含有特制的甲苯胺红溶液中制成。
仅在白色卡片上进行实验,以检测血清或血浆中反应素用。
可作为梅毒病人的诊断和疗效之参考。
[试剂盒的组成]
1.TRUST抗原悬液2.5mlx1瓶10mlx1瓶
2.阳性对照血清1mx1支1mx1支
3.阴性对照血清1mx1支1mx1支
4.试验专用卡片120人份480人份
5.专用滴管及针头1套1套
[使用方法]
一.定性试验
1.分别吸取50微生梅毒阳性对照和阴性对照均匀铺加在纸卡的两个圆圈中。
2.取待检血清或血浆50微生(不需灭活)置于纸卡的另一圆圈中。
3.用专用滴管及针头垂直分别滴加TRUST试剂一滴于上述血清中。
4.按每分钟100转摇动8分钟,肉眼观察结果。
二.定量试验
将待检血清用生理盐水作倍比稀释,然后按上述定性方法进行试验,以呈现明显凝集反应的最高稀释度作为该血清的凝集效价。
[结果判断]
1.阳性反应(+++-++++):
可见中等或较大的红色凝聚物。
2.弱阳性反应(+-++):
可见较小的红色凝聚物。
3.阴性反应(-):
可见均匀的抗原颗粒而无凝聚物。
[注意事项]
1.本实验在23-29摄适度条件下进行。
2.TRUST试剂使用前应充分摇匀。
3.本试验系非特异性反应,需结合临床进行综合分析,必要时需作梅毒螺旋体抗体特异性试验。
[储存条件]
应保存于2-8摄氏度。
丙肝病毒抗体IgMELISA检测
试验原理 HCV-IgM试剂盒是间接法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知HCV-IgM浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将HCV-IgM和生物素标记的抗体同时温育。
洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。
再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中HCV-IgM的浓度呈比例关系。
操作步骤
1、使用前,将所有试剂充分混匀。
不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
2、根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。
每个标准品和空白孔建议做复孔。
每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
标本用标本稀释液1:
1稀释后加入50ul于反应孔内。
3、加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。
立即加入50ul的生物素标记的抗体。
盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。
重复此操作3次。
如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
4、每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。
重复此操作3次。
如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
5、每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。
避免光照。
取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
在450nm波长处测定各孔的OD值。
6、6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到精确的结果。
结果判定与分析
1、仪器值:
于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的HCV-IgM标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的HCV-IgM含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
3、检测值范围:
0-40IU/L