论文酒精对小白鼠肝脏的损伤及其机理研究.docx
《论文酒精对小白鼠肝脏的损伤及其机理研究.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《论文酒精对小白鼠肝脏的损伤及其机理研究.docx（9页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。
论文酒精对小白鼠肝脏的损伤及其机理研究
论文
作品名称：
酒精对小白鼠肝脏的损伤及其机理研究
摘要
目的:
对酒精对小白鼠肝脏的损伤及其可能产生的影响机理进行研究.方法:
用体重为18-22g的小白鼠40只,随机分为四组.1，2，3组分别用10%,30%和50%的酒精灌，每天一次；第4组为对照组，用0.9%的生理盐水进行灌胃，每天一次，持续5wk。
每周测量和记录一次各组小白鼠的体重，观察和记录小白鼠的精神状态，同时测量小白鼠的血清ALT、AST的含量。
5wk后，处死小白鼠，取每只小白鼠相同部位的肝脏，观察其形态。
结果:
（1）各组小鼠平均体重均有增加，第1组增加最多，第3组增加最少;
（2）第1，4组小白鼠食欲正常，精神状态好，第2，3组小白鼠有醉酒现象;（3）光镜下实验动物肝脏脂肪沉积，肝细胞病理损伤及肝组织炎症反应程度加重，纤维化不明显;（4）ALT，AST水平升高。
结论:
酒精可以导致肝细胞物质代谢障碍，使肝细胞变性，坏死。
关键词:
酒精灌胃肝细胞病理损伤肝细胞变性
Abstract
Purpose:
itistostudythedamageofalcoholtobabywhitemice’liveranditspossibleinfluenceonmechanism.
Method:
divide40babywhitemice,whichweighfrom18gto22g,into4groupscasually.Tothosemicebelongingrespectivelytothefirst,secondandthirdgroup,wepourinturn10%,30%,50%volumeofalcoholintotheirstomachs,onceperday.Tothosebelongingtothefourthgroup,wepour0.9%volumeofphysiologicalsaline,onceperdaylasting5weeks.Measureandrecordtheweightofthebabymiceonceperweek,observeandrecordtheirmentalconditionandconcurrentlymeasurethecontentofALTandASTserum.Fiveweekslater,killthebaywhitemiceandtakeouttheirliversinthesamepartofthebodytoobservetheshape.Thenwegettheresults:
1.theweightofbabymiceineachgrouphasincreased,whilethoseofthefirstgrouphasincreasedmostandthoseofthethirdgrouphasincreasedleast;2.babywhitemiceofthefirstandfourthgrouphavethesameappetiteasusualandareingoodmentalhealth,whilethoseofthesecondandthirdgrouphavethephenomenonofbeingdrunk;3.theexperimentalanimals’liverfatdepositunderthelightmicroscope,pathologicaldamageoflivercellsandtheresponsedegreeoflivertissue’sinflammationhasdeepenedandthefibrosisisnotsoclear.4.ThelevelofALTandASThasrisen.
Conclusion:
alcoholcancauseobstructiontolivercell’smetabolismanddenaturalizelivercellsaswellasmakeitdie.
Keywords:
alcohol;pourinstomach;pathologicaldamagetolivercell;denaturalizationoflivercell
1实验材料
1.1药物与试剂
NaH2PO4.2H2O24g，Na2HPO4.12H2O240g，丙酮酸钠176mg,α—酮戊二酸240mg，DL—丙氨酸8mg，2,4—二硝基苯肼160mg，NaOH，纯盐酸，DL—门冬氨酸12mg，酒精。
1.2仪器
分光光度计，烧杯，100ml容量瓶2个，1000ml容量瓶2个水浴锅，量筒，冰箱。
1.3动物
40只体重为18-22g的wister小白鼠
2实验
2.1取材
从南华生命科学院购买小白鼠40只
2.2酒精灌胃处理
将40只体重为18-20g的小白鼠,随机分为四组，将四组小白鼠先适应性地喂养1wk，随后将第1，2，3组分别用10%,30%和50%的酒精灌胃,每天一次；第4组为对照组，用0.9%的生理盐水进行灌胃，每天一次，持续5wk。
2.3测体重及记录精神状态
每周测量和记录一次各组小白鼠的体重，观察和记录小白鼠的精神状态。
2.4赖氏法检测小鼠血清ALT，AST含量
2.4.1ALT含量测定
2.4.1.1试剂配制
1）0.1mol/L磷酸缓冲液（PH7.4）
称取NaH2PO4.2H2O2.96495g，Na2HPO4.12H2O29.0142g，溶解，定容到1000ml。
2）20umol/L丙酮酸钠标准液
称取22mg丙酮酸钠溶解于0.1mol/L磷酸缓冲液（PH7.4）100ml中，现配先用。
3）ALT基质液
称取α—酮戊二酸29.2mg，DL—丙氨酸1.78mg溶解于30ml0.1mol/L磷酸缓冲液中（PH7.4），溶解后校正PH至7.4，再用PH7.4的磷酸缓冲液定容至100ml。
置冰箱中保存备用（可保存一周）。
4）0.02%2,4—二硝基苯肼溶液
称取20mg2,4—二硝基苯肼先溶解于10ml纯盐酸中，电炉加热助溶，待全部溶解后，稀释至100ml，过滤后盛于棕色瓶中，置冰箱中备用。
5）1mol/LNaOH溶液
称取4gNaOH溶解于蒸馏瓶后，定容到100ml。
6）0.4mol/LNaOH溶液
称取16gNaOH溶解，定容到1000ml。
2.4.1.2实验方法
1）ALT曲线的制作
（1）将测定所用试剂除NaOH溶液外全部置于水浴箱中，预温37℃然后使用，取6支试管按表1进行配制。
表1ALT标准曲线的制作
试管号
试剂（ml）
0
1
2
3
4
5
20umol/L丙酮
酸钠标准液
0.00
0.05
0.10
0.15
0.20
0.25
ALT基质液
0.50
0.45
0.40
0.35
0.30
0.25
0.1mol/L磷酸缓冲液
0.01
0.01
0.01
0.01
0.01
0.01
混匀，将各管置37℃水浴中保温60min
2,4—二硝基苯肼
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
混匀，将各管置37℃水浴中保温20min
0.4mol/LNaOH溶液
5
5
5
5
5
5
混匀，将各管置37℃水浴中保温10min
（2）冷却后以0为对照用分光光度计比色测定吸光值OD520nm。
（3）以丙酮酸含量为纵坐标，吸光值OD520nm为横坐标绘制标准曲线。
2）小鼠肝组织ALT含量的测定
（1）将测定所用试剂除NaOH溶液外全部置于水浴箱中，预温至然后使用，取2支试管按表2进行配制。
表2ALT含量测定
试管号
试剂（ml）
0
1
样品
0.10
0.10
ALT基质液
——
0.50
混匀，将各管置37℃水浴中保温60min
ALT基质液
0.50
——
2,4—二硝基苯肼
0.5
0.5
混匀，将各管置37℃水浴中保温20min
0.4mol/LNaOH溶液
5
5
混匀，将各管置37℃水浴中保温10min
（2）冷却后以0为对照用分光光度计比色测定吸光值OD520nm。
（3）在标准曲线中读出样品丙酮酸的生成量。
2.4.2AST含量测定
2.4.2.1试剂配制
1）0.1mol/L磷酸缓冲液（PH7.4）
称取NaH2PO4.2H2O2.96495g，Na2HPO4.12H2O29.0142g，溶解，定容到100ml。
2）20umol/L丙酮酸钠标准液
称取22mg丙酮酸钠溶解于0.1mol/L磷酸缓冲液（PH7.4）100ml中，现配先用。
3）AST基质液
称取α—酮戊二酸29.2mg，DL—门冬氨酸2.66g，置于小烧杯中，加入NaOH溶解，后校正PH至7.4，再用PH7.4的磷酸缓冲液定容至100ml。
置冰箱中保存备用（可保存一周）。
4）0.02%2,4—二硝基苯肼溶液
称取20mg2,4—二硝基苯肼先溶解于10ml纯盐酸中，电炉加热助溶，待全部溶解后，稀释至100ml，过滤后盛于棕色瓶中，置冰箱中备用。
5）1mol/LNaOH溶液
称取4gNaOH溶解于蒸馏瓶后，定容到100ml。
6）0.4mol/LNaOH溶液
称取16gNaOH溶解，定容到1000ml。
2.4.2.2实验方法
1）ALT曲线的制作
（1）将测定所用试剂除NaOH溶液外全部置于水浴箱中，预温37℃然后使用，取6支试管按表3进行配制。
表3ALT标准曲线的制作
试管号
试剂（ml）
0
1
2
3
4
5
20umol/L丙酮酸钠标准液
0.00
0.05
0.10
0.15
0.20
0.25
AST基质液
0.50
0.45
0.40
0.35
0.30
0.25
0.1mol/L磷酸缓冲液
0.01
0.01
0.01
0.01
0.01
0.01
混匀，将各管置37℃水浴中保温60min
2,4—二硝基苯肼
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
混匀，将各管置37℃水浴中保温20min
0.4mol/LNaOH溶液
5
5
5
5
5
5
混匀，将各管置37℃水浴中保温10min
（2）冷却后以0为对照用分光光度计比色测定吸光值OD520nm。
（3）以丙酮酸含量为纵坐标，吸光值OD520nm为横坐标绘制标准曲线。
2）样品AST测定
测定方法同AST含量的测定。
2.5结果
2.5.1小白鼠的体重变化
体重
（g）
实验前
实验后
第一周
第二周
第三周
第四周
第1组
19.25
19.57
20.14
21.16
22.24
第2组
19.37
19.52
19.96
20.83
21.69
第3组
19.34
19.43
19.88
20.57
21.15
第4组
19.42
19.52
20.05
20.56
21.03
2.5.2精神状态
小白鼠在适应期间都比较紧张,四处躁动.实验开始后，灌酒后的实验组的小白鼠都表现的非常兴奋，四处乱蹿.第3组的小白鼠有醉酒现象，而且随着灌酒时间的增长小，鼠的醉酒时间越来越长。
2.5.3小白鼠的ALT和AST的含量
ALT的含量
ALT含量
（u/L）
实验前
实验后
第一周
第二周
第三周
第四周
第1组
52.20
57.45
58.37
59.08
59.96
第2组
50.23
56.87
58.26
59.62
60.88
第3组
52.35
62.04
65.13
67.42
69.98
第4组
54.00
53.96
54.88
55.00
54.72
AST的含量
AST含量
（u/L）
实验前
实验后
第一周
第二周
第三周
第四周
第1组
189.50
194.32
196.56
195.87
197.06
第2组
192.27
199.58
204.36
206.96
209.71
第3组
196.46
208.04
216.00
222.62
228.27
第4组
187.96
187.50
188.07
186.99
188.37
2.5.4肝组织镜检
对照组的肝脏组织正常，三组实验组的肝脏都出现不同程度的炎症。
其中第3组的炎症最严重，肝脏明显的出现脂肪沉积现象，肝细胞病理性损伤，但是肝脏纤维化不明显。
3论文结果
长期饮酒对小白鼠的体重，精神状态，血液中ALT,AST的含量和肝脏都会有一定的影响。
特别是灌酒后小白鼠的精神状态会处在一个兴奋的状态，并且灌酒时间越长，这种持续兴奋的状态也延续的越长。
随着灌酒的时间长短和酒精的浓度不同，肝脏的损伤程度及炎症程度也不一样。
时间越长，对肝脏的损伤越严重。
另外，小白鼠血液中的ALT和AST含量也随灌酒历史的增长而在不短升高。
综上所述，酒精对小白鼠的肝脏损伤机制可能ALT和AST的含量增加有关。
参考文献
[1]丁霞.酒精性肝损伤动物模型研究近况（综述），《北京中医药大学学报》1998年第05期
[2]黄娟娟李兵曹力波等.酒精对HVB转基因小鼠肝脏的损伤作用及其机制，《中国药理学通报》2010，3：
26（3）372
[3]酗酒者增多酒精性肝病ALD发病率悄然上升，《百姓健康新闻网》2010-04-26
[4]厉有名陈卫星虞朝辉等.浙江省酒精性肝病流行病学调查概况，中华肝脏病杂志2003，11：
164-166
[5]鲁小兰陶明罗金燕等.饮酒与肝病流行病调查，中华肝脏病杂志2002，10；467-468
[6]厉有名.中国酒精性肝病研究现状，《现代消化及介入诊疗》2007年04期
[7]戴水奇,黄顺玲,张雪红等. 湖南省酒精性肝病流行病学分析[J].中西医结合肝病杂志.2005（02）
[8]杜艳秋. 葛根素对大鼠急性酒精性肝损伤保护作用的实验研究[D].中国医科大学2006
[9]李爱华，赵刚.酒精性肝病发病机制的研究进展《吉林医学》2010年17期
[10]DIEHLAM.Liverdiseaseinalcoholabusers:
clinicalperspective.Alcohol.2002
[11]DiehlAM.Liverdiseaseinalcoholabusers：
clinicalperspective［J］.Alcohol，2002，27
（1）：
7211.
升级会员 