论文酒精对小白鼠肝脏的损伤及其机理研究.docx

1、论文酒精对小白鼠肝脏的损伤及其机理研究论 文作品名称： 酒精对小白鼠肝脏的损伤及其机理研究 摘 要目的:对酒精对小白鼠肝脏的损伤及其可能产生的影响机理进行研究.方法:用体重为18-22g的小白鼠40只,随机分为四组.1，2，3组分别用10%,30%和50%的酒精灌，每天一次；第4组为对照组，用0.9%的生理盐水进行灌胃，每天一次，持续5wk。每周测量和记录一次各组小白鼠的体重，观察和记录小白鼠的精神状态， 同时测量小白鼠的血清ALT、AST的含量。5wk后，处死小白鼠，取每只小白鼠相同部位的肝脏，观察其形态。结果:(1)各组小鼠平均体重均有增加，第1组增加最多，第3组增加最少;(2) 第1，4

2、组小白鼠食欲正常，精神状态好，第2，3组小白鼠有醉酒现象;(3)光镜下实验动物肝脏脂肪沉积，肝细胞病理损伤及肝组织炎症反应程度加重，纤维化不明显;(4) ALT，AST水平升高。结论:酒精可以导致肝细胞物质代谢障碍，使肝细胞变性，坏死。关键词:酒精 灌胃 肝细胞病理损伤 肝细胞变性AbstractPurpose: it is to study the damage of alcohol to baby white mice liver and its possible influence on mechanism. Method: divide 40 baby white mice, whic

3、h weigh from 18g to 22g, into 4 groups casually. To those mice belonging respectively to the first, second and third group, we pour in turn 10%, 30%, 50% volume of alcohol into their stomachs, once per day. To those belonging to the fourth group, we pour 0.9% volume of physiological saline, once per

4、 day lasting 5 weeks. Measure and record the weight of the baby mice once per week, observe and record their mental condition and concurrently measure the content of ALT and AST serum. Five weeks later, kill the bay white mice and take out their livers in the same part of the body to observe the sha

5、pe. Then we get the results: 1. the weight of baby mice in each group has increased, while those of the first group has increased most and those of the third group has increased least; 2. baby white mice of the first and fourth group have the same appetite as usual and are in good mental health, whi

6、le those of the second and third group have the phenomenon of being drunk; 3. the experimental animals liver fat deposit under the light microscope, pathological damage of liver cells and the response degree of liver tissue s inflammation has deepened and the fibrosis is not so clear. 4. The level o

7、f ALT and AST has risen.Conclusion: alcohol can cause obstruction to liver cells metabolism and denaturalize liver cells as well as make it die.Key words: alcohol; pour in stomach; pathological damage to liver cell; denaturalization of liver cell1 实验材料1.1 药物与试剂NaH2PO4 .2H2O 24g ，Na2HPO4 .12H2O 240g

8、，丙酮酸钠 176mg, 酮戊二酸 240mg，DL丙氨酸8mg，2,4二硝基苯肼160mg，NaOH，纯盐酸，DL门冬氨酸12mg，酒精。1.2仪器分光光度计，烧杯，100ml容量瓶2个，1000ml容量瓶2个水浴锅，量筒，冰箱。1.3 动物40只体重为18-22g的wister小白鼠2 实验2.1 取材从南华生命科学院购买小白鼠40只2.2 酒精灌胃处理将40只体重为18-20g的小白鼠,随机分为四组，将四组小白鼠先适应性地喂养1wk，随后将第1，2，3组分别用10%,30%和50%的酒精灌胃, 每天一次；第4组为对照组，用0.9%的生理盐水进行灌胃，每天一次，持续5wk。2.3 测体重及

9、记录精神状态每周测量和记录一次各组小白鼠的体重，观察和记录小白鼠的精神状态。2.4 赖氏法检测小鼠血清ALT，AST含量2.4.1 ALT含量测定2.4.1.1试剂配制1）0.1mol/L磷酸缓冲液（PH7.4）称取NaH2PO4 .2H2O 2.96495g ，Na2HPO4 .12H2O 29.0142g ，溶解，定容到1000ml。2） 20umol/L 丙酮酸钠标准液称取22mg丙酮酸钠溶解于0.1mol/L磷酸缓冲液（PH7.4）100ml中，现配先用。3）ALT基质液称取酮戊二酸29.2mg，DL丙氨酸1.78mg溶解于30ml 0.1mol/L磷酸缓冲液中（PH7.4），溶解后校

10、正PH至7.4，再用PH7.4的磷酸缓冲液定容至100ml。置冰箱中保存备用（可保存一周）。4）0.02% 2,4二硝基苯肼溶液称取20mg 2,4二硝基苯肼先溶解于10ml纯盐酸中，电炉加热助溶，待全部溶解后，稀释至100ml，过滤后盛于棕色瓶中，置冰箱中备用。5）1mol/L NaOH溶液称取4g NaOH溶解于蒸馏瓶后，定容到100ml。6）0.4 mol/L NaOH溶液称取16g NaOH溶解，定容到1000ml。2.4.1.2 实验方法1） ALT曲线的制作（1）将测定所用试剂除NaOH溶液外全部置于水浴箱中，预温37然后使用，取6支试管按表1进行配制。表1 ALT标准曲线的制作

11、试管号 试剂（ml） 01234520umol/L 丙酮酸钠标准液0.000.050.100.150.200.25ALT基质液0.500.450.400.350.300.250.1mol/L磷酸缓冲液0.010.010.010.010.010.01混匀，将各管置37水浴中保温60min2,4二硝基苯肼0.50.50.50.50.50.5混匀，将各管置37水浴中保温20min0.4 mol/L NaOH溶液555555混匀，将各管置37水浴中保温10min（2）冷却后以0为对照用分光光度计比色测定吸光值OD520nm。（3）以丙酮酸含量为纵坐标，吸光值OD520nm为横坐标绘制标准曲线。2）小鼠

12、肝组织ALT含量的测定（1）将测定所用试剂除NaOH溶液外全部置于水浴箱中，预温至然后使用，取2支试管按表2进行配制。表2 ALT含量测定 试管号试剂（ml）01样品0.100.10ALT基质液0.50混匀，将各管置37水浴中保温60minALT基质液0.502,4二硝基苯肼0.50.5混匀，将各管置37水浴中保温20min0.4 mol/L NaOH溶液55混匀，将各管置37水浴中保温10min（2） 冷却后以0为对照用分光光度计比色测定吸光值OD520nm。 （3）在标准曲线中读出样品丙酮酸的生成量。2.4.2 AST含量测定 2.4.2.1试剂配制1）0.1mol/L磷酸缓冲液（PH7.

13、4）称取NaH2PO4 .2H2O 2.96495g ，Na2HPO4.12H2O 29.0142g ，溶解，定容到100ml。2） 20umol/L 丙酮酸钠标准液称取22mg丙酮酸钠溶解于0.1mol/L磷酸缓冲液（PH7.4）100ml中，现配先用。3）AST基质液称取酮戊二酸29.2mg，DL门冬氨酸2.66g，置于小烧杯中，加入NaOH溶解，后校正PH至7.4，再用PH7.4的磷酸缓冲液定容至100ml。置冰箱中保存备用（可保存一周）。4）0.02% 2,4二硝基苯肼溶液称取20mg2,4二硝基苯肼先溶解于10ml纯盐酸中，电炉加热助溶，待全部溶解后，稀释至100ml，过滤后盛于棕色

14、瓶中，置冰箱中备用。5）1mol/L NaOH溶液称取4g NaOH溶解于蒸馏瓶后，定容到100ml。6）0.4 mol/L NaOH溶液称取16g NaOH溶解，定容到1000ml。2.4.2.2实验方法1）ALT曲线的制作（1）将测定所用试剂除NaOH溶液外全部置于水浴箱中，预温37然后使用，取6支试管按表3进行配制。表3 ALT标准曲线的制作 试管号 试剂（ml） 01234520umol/L 丙酮酸钠标准液0.000.050.100.150.200.25AST基质液0.500.450.400.350.300.250.1mol/L磷酸缓冲液0.010.010.010.010.010.01

15、混匀，将各管置37水浴中保温60min2,4二硝基苯肼0.50.50.50.50.50.5混匀，将各管置37水浴中保温20min0.4 mol/L NaOH溶液555555混匀，将各管置37水浴中保温10min（2）冷却后以0为对照用分光光度计比色测定吸光值OD520nm。（3）以丙酮酸含量为纵坐标，吸光值OD520nm为横坐标绘制标准曲线。2）样品AST测定测定方法同AST含量的测定。2.5 结果 2.5.1 小白鼠的体重变化 体重 (g) 实验前实验后第一周第二周第三周第四周第1组19.2519.5720.1421.1622.24第2组19.3719.5219.9620.8321.69第3

16、组19.3419.4319.8820.5721.15第4组19.4219.5220.0520.5621.032.5.2 精神状态 小白鼠在适应期间都比较紧张,四处躁动.实验开始后，灌酒后的实验组的小白鼠都表现的非常兴奋，四处乱蹿.第3组的小白鼠有醉酒现象，而且随着灌酒时间的增长小，鼠的醉酒时间越来越长。2.5.3 小白鼠的ALT和AST的含量 ALT的含量 ALT含量 (u/L)实验前实验后第一周第二周第三周第四周第1组52.2057.4558.3759.0859.96第2组50.2356.8758.2659.6260.88第3组52.3562.0465.1367.4269.98第4组54.0

17、053.9654.8855.0054.72 AST的含量 AST含 量 (u/L)实验前实验后第一周第二周第三周第四周第1组189.50194.32196.56195.87197.06第2组192.27199.58204.36206.96209.71第3组196.46208.04216.00222.62228.27第4组187.96187.50188.07186.99188.372.5.4 肝组织镜检 对照组的肝脏组织正常，三组实验组的肝脏都出现不同程度的炎症。其中第3组的炎症最严重，肝脏明显的出现脂肪沉积现象，肝细胞病理性损伤，但是肝脏纤维化不明显。3 论文结果 长期饮酒对小白鼠的体重，精神

18、状态，血液中ALT,AST的含量和肝脏都会有一定的影响。特别是灌酒后小白鼠的精神状态会处在一个兴奋的状态，并且灌酒时间越长，这种持续兴奋的状态也延续的越长。随着灌酒的时间长短和酒精的浓度不同，肝脏的损伤程度及炎症程度也不一样。时间越长，对肝脏的损伤越严重。另外，小白鼠血液中的ALT和AST含量也随灌酒历史的增长而在不短升高。综上所述，酒精对小白鼠的肝脏损伤机制可能ALT和AST的含量增加有关。参考文献1 丁霞 .酒精性肝损伤动物模型研究近况(综述) ，北京中医药大学学报1998年第05期2 黄娟娟 李兵 曹力波等.酒精对HVB转基因小鼠肝脏的损伤作用及其机制，中国药理学通报2010，3：26（

19、3）3723 酗酒者增多酒精性肝病ALD发病率悄然上升 ， 百姓健康新闻网2010-04-264 厉有名 陈卫星 虞朝辉等. 浙江省酒精性肝病流行病学调查概况，中华肝脏病杂志 2003 ，11 ：164-1665 鲁小兰 陶明 罗金燕等.饮酒与肝病流行病调查，中华肝脏病杂志 2002 ，10；467-4686 厉有名 . 中国酒精性肝病研究现状，现代消化及介入诊疗2007年04期7 戴水奇,黄顺玲,张雪红等.湖南省酒精性肝病流行病学分析J. 中西医结合肝病杂志. 2005(02) 8 杜艳秋.葛根素对大鼠急性酒精性肝损伤保护作用的实验研究D. 中国医科大学 20069 李爱华， 赵刚. 酒精性肝病发病机制的研究进展吉林医学2010年17期10 DIEHL A M.Liver disease in alcohol abusers: clinical perspective. Alcohol . 200211 Diehl AM.Liver disease in alcohol abusers：clinical perspectiveJ.Alcohol，2002，27(1)：7211.