复方丹参片检验方法验证方案.docx

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复方丹参片检验方法验证方案

复方丹参片检验方法确认方案

文件编号：

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部门

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日期

起草人

审核人

批准人

xxxxxxx有限公司

1.概述：

复方丹参片质量标准为已验证的法定标准，含量测定方法为HPLC法，其它项目为实验室日常测试步骤。

根据2010年版《药品质量管理规范》的要求，需要对含量测定检验方法进行确认，包括专属性、精密度、准确度三个方面。

2.目的：

确认复方丹参片含量测定检验方法在我公司质量控制实验室的适用性。

3.适用范围：

复方丹参片含量测定检验方法

4.条件：

4.1.检验操作规程齐全

4.2.设备相关标准操作规程齐全

4.3.检验、检测仪器均已校验

5.确认时间计划：

从年月日开始至年月日完成。

6.含量测定含丹参以丹参酮IIA计检测方法确认

6.1．确认要求及标准

6.1.1.色谱条件系统适用性试验（在专属性试验时一并进行）：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-（73∶27）为流动相；检测波长为270nm。

理论板数以丹参酮IIA峰计算应不低于2000，分离度大于1.5。

6.1.2.专属性空白样品溶液在与丹参酮IIA对照品溶液相同的保留时间处色谱峰峰面积小于对照品峰面积的3%。

6.1.3.精密度RSD应不得超过2.0%

6.1.4.准确度丹参酮IIA的加样回收率98.0%～102%，回收率的RSD小于2.0%。

6.2.材料和分析方法

6.2.1.试剂：

对照品：

丹参酮IIA

批号：

来源：

样品：

复方丹参片

批号：

来源：

试剂名称：

甲醇

批号：

来源：

空白对照物：

按复方丹参片质量标准制法自制（缺丹参）

6.2.2.

仪器：

6.2.3.1.对照品溶液配置取丹参酮IIA对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含40微克的溶液即得。

6.2.3.2供试品溶液取复方丹参片20片，除去糖衣片，精密称定，研细，

取约1g，精密称定后置具塞棕色瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞称定重量，超声处理15分钟，放冷，再称定重量并补足，摇匀滤过取续滤液置棕色瓶中即得。

6.2.3.3.空白物溶液取空白物20片，除去糖衣片，精密称定，研细，取约1g，精密称定后置具塞棕色瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞称定重量，超声处理15分钟，放冷，再称定重量并补足，摇匀滤过取续滤液置棕色瓶中即得。

6.2.3.4.储备液A精密称取丹参酮IIA对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含120微克的溶液即得。

6.2.4分析方法：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-（73∶27）为流动相；检测波长为270nm；进样量为10ul。

6.3.检验方法的确认

6.3.1专属性

6.3.1.1色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-（73∶27）为流动相；检测波长为270nm。

理论丹参酮IIA峰计算应不低于2000，分离度大于1.5。

6.3.1.2.测定分别精密吸取对照品溶液与空白样品溶液各10μ，l注入液相色

谱仪，测定，记录色谱图

6.3.1.3.确认合格标准空白样品溶液在与丹参酮IIA对照品溶液相同的保留时间处色谱峰峰面积小于对照品峰面积的3%。

6.3.2.精密度

6.3.2.1重复性

6.3.2.1.1.取同一浓度的对照品溶液及供试品溶液分别连续进样6针（10ul），记录色谱图。

6.3.2.1.2.确认合格标准6针对照品溶液、供试品溶液峰面积的RSD应不得超过2.0%。

6.3.2.2中间精密度

6.3.2.2.1.在不同的日期和不同的仪器，不同检验员（3人）按6.2.3.2的方法重新制备样液，分别计算含量。

6.3.2.2.2.确认合格标准每人RSD应不得超过2.0%，3人RSD应不得超过2.0%。

6.3.3准确度

表1

溶液编号

加入储备液A

（ml）

加入空白对照

物（g）

容量瓶（ml）

进样浓度（ug

／ml）

1

6.0

1

25

28.8

2

7.0

1

25

33.6

3

6.0

0.8

20

36

4

8.0

1

25

38.4

5

7.0

0.8

20

42

6

9.0

1

25

43.2

7

10.0

1

25

48

8

11.0

1

25

52.8

9

9.0

0.8

20

54

6.3.3.1溶液1～9:

将表2中规定量的储备液A和空白对照物置于规定量的具塞棕色容量瓶中，用甲醇补足至25ml，密塞称定重量，超声处理15分钟，放冷，再称定重量并补足，摇匀滤过取续滤液置棕色瓶中即得。

6.3.3.2精密吸取9份样液各10ul，注入液相色谱仪，测定，计算回收率

计算公式：

测得值×100%

回收率（%）

=加入的对照品量

6.3.3.3．确认合格标准

的RSD小于2.0%。

丹参酮IIA的加样回收率收率98.0%～102%，回收率

7.含量测定含丹参以丹酚酸B计检测方法确认

7.1．确认要求及标准

7.1.1.色谱条件系统适用性试验（在专属性试验时一并进行）：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈－甲醇－甲酸－水（10：

30：

1：

59）为流动相；检测波长为286nm。

理论板数以丹酚酸B峰计算应不低于4000。

7.1.2.专属性空白样品溶液在与丹酚酸B对照品溶液相同的保留时间处色谱峰峰面积小于对照品峰面积的3%。

7.1.3.精密度RSD应不得超过2.0%

7.1.4.准确度丹参酮IIA的加样回收率大于收率98.0%～102%，回收率的RSD小于2.0%。

7.2.材料和分析方法

7.2.1.试剂：

对照品：

丹参酮IIA

批号：

来源：

样品：

复方丹参片

批号：

来源：

试剂名称：

乙腈

批号：

来源：

空白对照物：

按复方丹参片质量标准制法自制（缺丹参）

7.2.2.

仪器：

编号：

编号：

分析天平型号超声处理器型号：

7.2.3．溶液配置：

7.2.3.1.对照品溶液配置取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含60微克的溶液即得。

7.2.3.2供试品溶液取复方丹参片20片，除去糖衣片，精密称定，研细，取约0.15g，精密称定后置50ml具塞量瓶中，加水适量，超声处理30分钟，放冷，加水至刻度，摇匀离心取上清夜即得。

7.2.3.3.空白物溶液取空白对照物20片，除去糖衣片，精密称定，研细，取约0.15g，精密称定后置50ml具塞量瓶中，加水适量，超声处理30分钟，放冷，加水至刻度，摇匀离心取上清夜即得。

7.2.4分析方法：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈－甲醇－甲酸－水（10：

30：

1：

59）为流动相；检测波长为286nm；进样量为10ul。

7.3.检验方法的确认

7.3.1专属性

7.3.1.1色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈－甲醇－甲酸－水（10：

30：

1：

59）为流动相；检测波长为286nm。

理论板数以丹酚酸B峰计算应不低于4000。

7.3.1.2.测定分别精密吸取对照品溶液与空白样品溶液各10μ，l注入液相色谱仪，测定，记录色谱图。

7.3.1.3.确认合格标准空白样品溶液在与丹酚酸B对照品溶液相同的保留间处色谱峰峰面积小于对照品峰面积的3%。

7.3.2.精密度

7.3.2.1重复性

7.3.2.1.1.取同一浓度的对照品溶液及供试品溶液分别连续进样6针（10ul），记录色谱图

7.3.2.1.2.确认合格标准6针对照品溶液、供试品溶液峰面积的RSD应不得超过2.0%。

7.3.2.2中间精密度

7.3.2.2.1.在不同的日期和不同的仪器，不同检验员（2人）按7.2.3.2的方法重新制备样液，分别计算含量。

7.3.2.2.2.确认合格标准每人RSD应不得超过2.0%，3人RSD应不得超过2.0%。

7.3.3准确度

7.3.3.1取丹酚酸B对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加水制成每1ml含60微克的溶液。

取上述（7.2.3.2）研细的复方丹参片样品0.09g，精密称定10份，分别置于50ml具塞量瓶中，并分别加入对照品溶液0、10、10、10、20、20、20、30、30、30ml，加入适量水超声处理30分钟，放冷后用水补足至刻度，摇匀离心取上清夜即得。

7.3.3.2精密吸取10份样液各10ul，注入液相色谱仪，测定，计算回收率。

7.3.3.3．确认合格标准丹酚酸B的加样回收率收率98.0%～102%，回收率的RSD小于2.0%。

8.含量测定含三七以人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷R1、人参皂苷Re计检测方法确认

8.1．确认要求及标准

8.1.1.色谱条件系统适用性试验（在专属性试验时一并进行）：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按表1的规定进行梯度洗脱检测波长为203nm。

理论板数以人参皂苷Rg1峰计算应不低于6000，人参皂苷Rg1与人参皂苷Re的分离度应大于1.8.

表2

时间（分钟）

流动相A（％）

流动相B（％）

0～35

19

81

35～55

19～29

81～71

55～70

29

71

70～100

29～40

71～60

8.1.2.专属性空白样品溶液在与对照品溶液相同的保留时间处色谱峰峰面积小于对照品峰面积的3%。

8.1.3.精密度RSD应不得超过2.0%

8.1.4.准确度参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷R1、人参皂苷Re的加样回收率大于收率98.0%～102%，回收率的RSD小于2.0%。

8.2.材料和分析方法

8.2.1.

试剂：

对照品：

丹参酮IIA

批号：

来源：

样品：

复方丹参片

批号：

来源：

试剂名称：

乙腈

批号：

来源：

试剂名称：

甲醇

批号：

来源：

空白对照物：

按复方丹参片质量标准制法自制（缺三七）

8.2.3．溶液配置：

8.2.3.1.对照品溶液配置精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷R1对照品、人参皂苷Re对照品适量，加70%甲醇制成每1ml含参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1各0.2mg、人参皂苷R1及人参皂苷Re各0.05mg的混合溶液即得。

8.2.3.2供试品溶液取复方丹参片10片，除去糖衣片，精密称定，研细，

取约1g，精密称定后置50ml具塞量瓶中，加70%甲醇50ml并称定重量，超声处理30分钟，放冷，称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀滤过，取续滤液即得。

8.2.3.3.空白物溶液取空白物10片，除去糖衣片，精密称定，研细，取约1g，精密称定后置50ml具塞量瓶中，加70%甲醇50ml并称定重量，超声处理30分钟，放冷，称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀滤过，取续滤液即得。

8.2.4分析方法：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动项A，以水为流动项B，按表1的规定进行梯度洗脱，进样量为20ul。

8.3.检验方法的确认

8.3.1专属性

8.3.1.1色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按表2的规定进行梯度洗脱检测波长为203nm。

理论板数以人参皂苷Rg1峰计算应不低于6000，人参皂苷Rg1与人参皂苷Re的分离度应大于1.8.

8.3.1.2.测定分别精密吸取对照品溶液与空白样品溶液各20μ，l注入液相色谱仪，测定，记录色谱图。

8.3.1.3.确认合格标准空白样品溶液在与对照品溶液相同的保留间处色谱峰峰面积小于对照品峰面积的3%。

8.3.2.精密度

8.3.2.1重复性

8.3.2.1.1.取同一浓度的对照品溶液及供试品溶液分别连续进样6针，记录色谱图。

8.3.2.1.2.确认合格标准6针对照品溶液、供试品溶液峰面积的RSD应不得超过2.0%。

8.3.2.2中间精密度

8.3.2.2.1.在不同的日期和不同的仪器，不同检验员（3人）按8.2.3.2的方法重新制备样液，分别计算含量。

8.3.2.2.2.确认合格标准每人RSD应不得超过2.0%，3人RSD应不得超过2.0%。

8.3.3准确度

8.3.3.1精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷R1对照品、人参皂苷Re对照品适量，加70%甲醇制成每1ml含参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1各0.2mg、人参皂苷R1及人参皂苷Re各0.05mg的对照品溶液。

取上述（8.2.3.2）研细的复方丹参片样品0.6g，精密称定10份，分别置于具塞量瓶中，并分别加入对照品溶液0、10、10、10、20、20、20、30、30、30ml，超声处理30分钟，放冷后用70%甲醇补足至刻度，摇匀离心取上清夜即得。

8.3.3.2精密吸取10份样液各20ul，注入液相色谱仪，测定，计算回收率。

计算公式：

测得值-样品中的量×100%

回收率（%）=

加入的对照品量

8.3.3.3．确认合格标准人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷R1、人参皂

苷Re的加样回收率收率98.0%～102%，回收率的RSD小于2.0%。