复方丹参片检验方法验证方案.docx

1、复方丹参片检验方法验证方案复方丹参片检验方法确认方案文件编号：文件审定部门签名日期起草人审核人批准人xxxxxxx 有限公司1.概述：复方丹参片质量标准为已验证的法定标准， 含量测定方法为 HPLC法，其它项 目为实验室日常测试步骤。根据 2010 年版药品质量管理规范的要求，需 要对含量测定检验方法进行确认，包括专属性、精密度、准确度三个方面。2.目的：确认复方丹参片含量测定检验方法在我公司质量控制实验室的适用性。3.适用范围：复方丹参片含量测定检验方法4.条件：4.1.检验操作规程齐全4.2.设备相关标准操作规程齐全4.3.检验、检测仪器均已校验5.确认时间计划：从 年 月 日开始至 年

2、月 日完成。6.含量测定含丹参以丹参酮 IIA 计检测方法确认6.1 确认要求及标准6.1.1.色谱条件系统适用性试验 （在专属性试验时一并进行 ）：用十八烷基硅烷 键合硅胶为填充剂；以甲醇 -水 -（7327）为流动相；检测波长为 270nm。理论 板数以丹参酮 IIA 峰计算应不低于 2000，分离度大于 1.5。6.1.2.专属性 空白样品溶液在与丹参酮 IIA 对照品溶液相同的保留时间处色 谱峰峰面积小于对照品峰面积的 3%。6.1.3.精密度 RSD应不得超过 2.0%6.1.4.准确度 丹参酮 IIA 的加样回收率 98.0%102%，回收率的 RSD小于 2.0%。6.2.材料和

3、分析方法6.2.1.试剂：对照品 ：丹参酮 IIA批号 ：来源：样品 ：复方丹参片批号 ：来源：试剂名称：甲醇批号 ：来源：空白对照物：按复方丹参片质量标准制法自制（缺丹参）6.2.2.仪器：6.2.3.1.对照品溶液配置 取丹参酮 IIA 对照品适量，精密称定，置棕色量瓶 中，加甲醇制成每 1ml 含 40 微克的溶液即得。6.2.3.2供试品溶液 取复方丹参片 20 片，除去糖衣片，精密称定，研细，取约 1g，精密称定后置具塞棕色瓶中，精密加入甲醇 25ml，密塞称定重量， 超声处理 15 分钟，放冷，再称定重量并补足，摇匀滤过取续滤液置棕色 瓶中即得。6.2.3.3. 空白物溶液 取空白

4、物 20 片，除去糖衣片，精密称定，研细， 取约 1g，精密称定后置具塞棕色瓶中，精密加入甲醇 25ml，密塞称定重量， 超声处理 15 分钟，放冷，再称定重量并补足，摇匀滤过取续滤液置棕色 瓶中即得。6.2.3.4.储备液 A 精密称取丹参酮 IIA 对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中， 加甲醇制成每 1ml 含 120 微克的溶液即得。6.2.4分析方法：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇 -水-（73 27）为流动相；检测波 长为 270nm；进样量为 10 ul 。6.3.检验方法的确认6.3.1专属性6.3.1.1色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 以 甲

5、醇-水-（7327）为流动相；检测波长为 270nm。理论丹参酮 IIA 峰计算应不 低于 2000，分离度大于 1.5。6.3.1.2.测定 分别精密吸取对照品溶液与空白样品溶液各 10，l注入液相色谱仪，测定，记录色谱图6.3.1.3.确认合格标准 空白样品溶液在与丹参酮 IIA 对照品溶液相同的保留 时间处色谱峰峰面积小于对照品峰面积的 3%。6.3.2.精密度6.3.2.1重复性6.3.2.1.1.取同一浓度的对照品溶液及供试品溶液分别连续进样 6 针（10ul）， 记录色谱图。6.3.2.1.2.确认合格标准 6 针对照品溶液、供试品溶液峰面积的 RSD应不 得超过 2.0%。6.3

6、.2.2中间精密度6.3.2.2.1.在不同的日期和不同的仪器，不同检验员（ 3 人）按 6.2.3.2 的方 法重新制备样液，分别计算含量。6.3.2.2.2.确认合格标准 每人 RSD应不得超过 2.0%，3 人 RSD应不得超过 2.0%。6.3.3准确度表1溶液编号加入储备液 A（ml）加入空白对照物（g）容量瓶（ ml）进样浓度（ ugml）16.012528.827.012533.636.00.8203648.012538.457.00.8204269.012543.2710.012548811.012552.899.00.820546.3.3.1溶液 19:将表 2中规定量的储备

7、液 A 和空白对照物置于规定量的具 塞棕色容量瓶中， 用甲醇补足至 25ml，密塞称定重量， 超声处理 15 分钟，放冷， 再称定重量并补足，摇匀滤过取续滤液置棕色瓶中即得。6.3.3.2精密吸取 9 份样液各 10ul ，注入液相色谱仪，测定，计算回收率计算公式：测得值 100%回收率（ %）= 加入的对照品量6.3.3.3确认合格标准的 RSD小于 2.0%。丹参酮 IIA 的加样回收率收率 98.0%102%，回收率7.含量测定含丹参以丹酚酸 B 计检测方法确认7.1 确认要求及标准7.1.1.色谱条件系统适用性试验 （在专属性试验时一并进行 ）：用十八烷基硅烷 键合硅胶为填充剂；以乙腈

8、甲醇甲酸水（ 10：30：1：59）为流动相；检 测波长为 286nm。理论板数以丹酚酸 B 峰计算应不低于 4000。7.1.2.专属性 空白样品溶液在与丹酚酸 B 对照品溶液相同的保留时间处色谱 峰峰面积小于对照品峰面积的 3%。7.1.3.精密度 RSD应不得超过 2.0%7.1.4.准确度 丹参酮 IIA 的加样回收率大于收率 98.0%102%，回收率的 RSD 小于 2.0%。7.2.材料和分析方法7.2.1.试剂：对照品 ：丹参酮 IIA批号 ：来源：样品 ：复方丹参片批号 ：来源：试剂名称：乙腈批号 ：来源：空白对照物：按复方丹参片质量标准制法自制（缺丹参）7.2.2.仪器：编

9、号：编号：分析天平型号 超声处理器型号：7.2.3溶液配置：7.2.3.1.对照品溶液配置 取丹酚酸 B 对照品适量，精密称定，加水制成每 1ml 含 60 微克的溶液即得。7.2.3.2供试品溶液 取复方丹参片 20 片，除去糖衣片，精密称定，研细， 取约 0.15g，精密称定后置 50ml 具塞量瓶中，加水适量，超声处理 30 分钟，放 冷，加水至刻度，摇匀离心取上清夜即得。7.2.3.3.空白物溶液 取空白对照物 20 片，除去糖衣片， 精密称定， 研细， 取约 0.15g，精密称定后置 50ml 具塞量瓶中，加水适量，超声处理 30 分钟，放 冷，加水至刻度，摇匀离心取上清夜即得。7.

10、2.4分析方法： 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈甲醇甲酸水（ 10：30： 1： 59）为流动相；检测波长为 286nm；进样量为 10 ul 。7.3.检验方法的确认7.3.1专属性7.3.1.1色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 以 乙腈甲醇甲酸水（ 10：30：1：59）为流动相；检测波长为 286nm。理论 板数以丹酚酸 B 峰计算应不低于 4000。7.3.1.2.测定 分别精密吸取对照品溶液与空白样品溶液各 10，l注入液相色 谱仪，测定，记录色谱图。7.3.1.3.确认合格标准 空白样品溶液在与丹酚酸 B 对照品溶液相同的保留间 处色谱峰峰面积小于

11、对照品峰面积的 3%。7.3.2.精密度7.3.2.1重复性7.3.2.1.1.取同一浓度的对照品溶液及供试品溶液分别连续进样 6 针（10ul）， 记录色谱图7.3.2.1.2.确认合格标准 6 针对照品溶液、供试品溶液峰面积的 RSD应不 得超过 2.0%。7.3.2.2中间精密度7.3.2.2.1.在不同的日期和不同的仪器，不同检验员（ 2 人）按 7.2.3.2 的方 法重新制备样液，分别计算含量。7.3.2.2.2.确认合格标准 每人 RSD应不得超过 2.0%，3 人 RSD应不得超过 2.0%。7.3.3准确度7.3.3.1取丹酚酸 B对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加水制成

12、每 1ml 含 60 微克的溶液。取上述 （ 7.2.3.2）研细的复方丹参片样品 0.09g，精密称定 10 份，分别置于 50ml 具塞量瓶中，并分别加入对照品溶液 0、10、 10、10、20、 20、20、30、30、30ml，加入适量水超声处理 30 分钟，放冷后用水补足至刻度， 摇匀离心取上清夜即得。7.3.3.2精密吸取 10份样液各 10ul ，注入液相色谱仪，测定，计算回收率。7.3.3.3确认合格标准 丹酚酸 B 的加样回收率收率 98.0%102%，回收率的 RSD小于 2.0%。8.含量测定含三七以人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Rb1、人参皂苷 R1、人参皂苷 Re 计检

13、测方法确认8.1 确认要求及标准8.1.1.色谱条件系统适用性试验 （在专属性试验时一并进行 ）：用十八烷基硅烷 键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相 A，以水为流动相 B，按表 1 的规定进行梯 度洗脱检测波长为 203nm。理论板数以人参皂苷 Rg1 峰计算应不低于 6000，人 参皂苷 Rg1 与人参皂苷 Re的分离度应大于 1.8.表2时间（分钟）流动相 A（）流动相 B（）03519813555192981715570297170100294071608.1.2.专属性 空白样品溶液在与对照品溶液相同的保留时间处色谱峰峰面积 小于对照品峰面积的 3%。8.1.3.精密度 RSD应不得超过

14、 2.0%8.1.4.准确度 参皂苷 Rg1、人参皂苷 Rb1、人参皂苷 R1、人参皂苷 Re 的加样 回收率大于收率 98.0%102%，回收率的 RSD小于 2.0%。8.2.材料和分析方法8.2.1.试剂：对照品 ：丹参酮 IIA批号 ：来源：样品 ：复方丹参片批号 ：来源：试剂名称：乙腈批号 ：来源：试剂名称：甲醇批号 ：来源：空白对照物：按复方丹参片质量标准制法自制（缺三七）8.2.3溶液配置：8.2.3.1.对照品溶液配置 精密称取人参皂苷 Rg1 对照品、人参皂苷 Rb1对照 品、人参皂苷 R1对照品、人参皂苷 Re对照品适量，加 70%甲醇制成每 1ml 含参 皂苷 Rg1及人

15、参皂苷 Rb1各 0.2mg、人参皂苷 R1及人参皂苷 Re各 0.05mg的混合 溶液即得。8.2.3.2供试品溶液 取复方丹参片 10 片，除去糖衣片，精密称定，研细，取约 1g，精密称定后置 50ml 具塞量瓶中，加 70%甲醇 50ml 并称定重量，超声 处理 30 分钟，放冷，称定重量，用 70%甲醇补足减失的重量，摇匀滤过，取续 滤液即得。8.2.3.3.空白物溶液 取空白物 10 片，除去糖衣片，精密称定，研细， 取约 1g，精密称定后置 50ml 具塞量瓶中，加 70%甲醇 50ml 并称定重量，超声 处理 30 分钟，放冷，称定重量，用 70%甲醇补足减失的重量，摇匀滤过，取

16、续 滤液即得。8.2.4分析方法：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 以乙腈 为流动项 A，以水为流动项 B，按表 1 的规定进行梯度洗脱，进样量为 20 ul 。8.3.检验方法的确认8.3.1专属性8.3.1.1色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 以 乙腈为流动相 A，以水为流动相 B，按表 2 的规定进行梯度洗脱检测波长为 203nm。理论板数以人参皂苷 Rg1 峰计算应不低于 6000，人参皂苷 Rg1与人参皂 苷 Re 的分离度应大于 1.8.8.3.1.2.测定 分别精密吸取对照品溶液与空白样品溶液各 20，l注入液相色 谱仪，测

17、定，记录色谱图。8.3.1.3.确认合格标准 空白样品溶液在与对照品溶液相同的保留间 处色谱峰峰面积小于对照品峰面积的 3%。8.3.2.精密度8.3.2.1重复性8.3.2.1.1.取同一浓度的对照品溶液及供试品溶液分别连续进样 6 针，记录 色谱图。8.3.2.1.2.确认合格标准 6 针对照品溶液、供试品溶液峰面积的 RSD应不 得超过 2.0%。8.3.2.2中间精密度8.3.2.2.1.在不同的日期和不同的仪器，不同检验员（ 3 人）按 8.2.3.2 的方 法重新制备样液，分别计算含量。8.3.2.2.2.确认合格标准 每人 RSD应不得超过 2.0%，3 人 RSD应不得超过 2

18、.0%。8.3.3准确度8.3.3.1精密称取人参皂苷 Rg1对照品、人参皂苷 Rb1对照品、人参皂苷 R1对 照品、人参皂苷 Re 对照品适量，加 70%甲醇制成每 1ml 含参皂苷 Rg1及人参皂 苷 Rb1各 0.2mg、人参皂苷 R1及人参皂苷 Re各 0.05mg 的对照品溶液。 取上述（ 8.2.3.2）研细的复方丹参片样品 0.6g，精密称定 10 份，分别置于具塞 量瓶中，并分别加入对照品溶液 0、10、10、10、20、20、20、 30、30、30ml， 超声处理 30 分钟，放冷后用 70%甲醇补足至刻度，摇匀离心取上清夜即得。8.3.3.2精密吸取 10份样液各 20ul ，注入液相色谱仪，测定，计算回收率。计算公式：测得值 - 样品中的量 100%回收率（ %） =加入的对照品量8.3.3.3确认合格标准 人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Rb1、人参皂苷 R1、人参皂苷 Re 的加样回收率收率 98.0%102%，回收率的 RSD小于 2.0%。