《血涂片制作和白细胞分类ABO血型鉴定5篇》.docx

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《血涂片制作和白细胞分类ABO血型鉴定5篇》

《血涂片制作和白细胞分类／ABO血型鉴定5篇》

第一篇：

血涂片制作和白细胞分类／abo血型鉴定姓名：

学号：

实验报告

说明：

1、实验报告务必独完成，对抄袭者将按不及格处理；

2、实验报告的格式请按下面的各项要求来填写，不要改动；

3、正文字体统一用“仿宋-gb2312”、，小四号，单倍行距，小标题加黑；

4、下面的“替换这里”字体底纹在完成后去除；

5、实验报告按时上传，上传时文件名统一按照网上说明来命名；实验名称：

血涂片制作和白细胞分类／abo血型鉴定

同组姓名：

实验日期：

4.13室温：

气压：

成绩：

教师：

一、实验结果

（一）观察到的红细胞、白细胞

（1）单核细胞

（2）淋巴细胞

（3）嗜中性细胞

（4）嗜酸性细胞

（二）abo血型鉴定结果

将本人血液加入到抗a凝集素和抗b凝集素中后均不发生凝集反应，加入到抗b凝集素中后颜色为血液原来的鲜红颜色；加到抗a凝集素后颜色变深但无凝血反应。

二、分析与讨论

（1）红细胞、白细胞的观察

血液由血浆和血细胞组成，而血细胞主要包括红细胞、白细胞和血小板。

其中红细胞数量最多，约占全血体积的45%，成熟红细胞没有细胞核，呈中央凹的圆盘状。

在油镜下观察红细胞，首先在数量上它占绝对优势，分布均匀，其次呈红色的圆形或椭球形。

图片中数量最多的红色圆球形细胞便是红细胞。

而白细胞和血小板所占体积不足1%。

对白细胞进行瑞氏染色后根据细胞的染色特征，可将其分为两大类：

1.颗粒白细胞：

嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞；

2.无颗粒细胞。

淋巴细胞核单核细胞。

其中嗜中性粒细胞细胞大小约10-12μm，核多分叶2-5叶或不分叶为杆状，颗粒细小，紫红色，约占白细胞的50%-70%；嗜酸性粒细胞细胞大小约10-15μm，核常分为2叶，颗粒粗大，分布均匀，桔红色，约占白细胞的0.5%-3%；嗜碱性粒细胞10-12μm核常呈s形（十分肥大）或不规则颗粒大小不等，分布不匀，紫蓝色，约占白细胞的0%-1%，数量极少，因此找到它需要运气、知识和眼力；淋巴细胞分大中小6-12μm以6-8μm居多，核圆或随圆形，很少，天蓝色，约占白细胞的20%-30%；单核细胞染色质致密，深紫色，大小约14-20μm，肾形或马蹄形，胞质多常染成浅灰蓝色，染色质疏松，着色较浅约占白细胞的3%-8%。

白细胞的数量随不同的生理状态会有较大的波动，在实验观察中，以嗜中性粒细胞数最多，其次为淋巴细胞，单核细胞和嗜酸性细胞均只发现一个而嗜碱性细胞没发现。

在观察白细胞类型时，首先观察是否存在颗粒，若无颗粒主要根据核质比，大的为淋巴细胞和核的形状马蹄型为单核细胞；若有颗粒则根据核的分叶数、形状；颗粒大小、颜色、以及颜色深浅综合来判断嗜中性粒细胞（核分多叶、细小的紫色颗粒、颜色深）、嗜酸性粒细胞（核分两叶、颗粒明显较嗜中性粒细胞粗大且颗粒呈桔红色，显微镜下看上去亮晶晶的）和嗜碱性粒细胞（没观察到）。

（2）abo血型鉴定

人类红细胞膜上存在不同的特异糖蛋白抗原—凝集原，也存在于其它血细胞和一般组织细胞上，而血浆中存在着不与自身凝集原发生反应的凝集素，凝集原会与相应的凝集素发生凝集反应，使红细胞凝集成团，不能分开，红细胞破裂产生溶血。

因此可用标准血清鉴定未知血型。

在白瓷板上滴加抗a和抗b凝集素，然后加入本人血液，若与抗a凝集素反应产生沉淀而与抗b凝集素不反应则血型为a型；若与抗b凝集素反应产生沉淀而与抗a凝集素不反应则血型为b型；若均与抗a、抗b凝集素发生反应产生沉淀则血型为ab型；若均不与抗a、抗b凝集素反应则血型为o型。

实际实验中，在加入本人血液后，血液与抗a、抗b凝集素反应均无沉淀，但加入到抗a凝集素中后呈深色，而加到抗b凝集素中呈鲜红色。

理论上不发生反应应呈鲜红色，颜色变深可能与ph值有关。

三、结论

（1）本人找到了红细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞。

（2）本人的血型为o型，是万能供血者，可以帮助更多的人。

第二篇：

实验六abo血型鉴定、血涂片的制作与血细胞显微观察（精）实验六：

abo血型鉴定、血涂片的制作与血细胞显微观察

一、实验目的

1.了解abo和rh血型分类系统的背景知识和遗传学原理2.掌握微量采血及血涂片的制作方法

3.学习使用光学显微镜观察和区分红细胞与各种白细胞

二、实验材料

1.实验材料：

医用采血针、酒精棉球、载玻片、血推片、消毒牙签2.实验试剂：

瑞氏染液、抗b血清、抗a血清、生理盐水、蒸馏水3.仪器设备：

motic光学显微镜

三、实验内容和方法

1abo血型鉴定

1.1取一块清洁玻片，用记号笔标上记号。

1.2用小滴管吸a型标准血清（抗b）一滴加入左侧，用另一小滴管吸b型标准血清（抗a）一滴加入右侧

1.3以穿刺法自左手无名指指尖取血，在玻片的每侧各放入一小滴血，用牙签搅拌，使每侧抗血清和血液混和。

每边用一支牙签，切勿混用。

1.4静置室温下10—15min后，观察有无凝集现象，并据此判断血型。

2血涂片的制作及血细胞观察

2.1取末捎血一滴置于玻片的一端，左手持载玻片，右手以边缘平滑的推片的一端从血滴前方后移接触血滴，血滴即沿推片散开。

然后便推片与载片夹角保持30-45度平稳地向前移动，载片上保留下一薄层血膜

2.2血涂片制成后可手持玻片在空气中挥动，使血膜迅速干燥，以免血细胞皱缩.2.3用蜡笔在血膜两侧划线，以防染液溢出，然后将血膜平放在染色架上.加瑞氏

染液2-3滴，使覆盖整个血膜，固定0.5-1.0分钟.滴加等量或稍多的新鲜蒸馏水，与染料混匀染色5-10分钟.2.4用清水冲去染液，待自然干燥后或用吸水纸吸干，即可置血涂片于显微镜下进行镜检。

2.5白细胞分类计数。

选择涂片的体尾交界处染色良好的区域，在油镜下计数100个红细胞，按其形态特征进行分类计数，求出各类细胞所占比值。

注：

1.瑞氏染液：

瑞氏染料1g加甲醇（ar）600ml。

将瑞氏染料放在清洁干燥乳钵中，加少量甲醇，充分研磨使染料溶解.将已完全溶解的部分倒入棕色试剂瓶中，未溶解部分再加少量甲醇研磨，直至染料完全溶解于甲醇为止.新配制的染料偏碱，须在室温和37℃下一定时间待染料成熟，主要美蓝逐渐增多为天青b后才能使用.贮存时间越久染色效果越好，因此，deamgilliland等采用吸光度比值（ra）作为瑞氏染料的质量规格.ra测定方法如下：

取瑞氏染液15-25ul（视染液浓度而定）加甲醇10ml稀释，混匀后以甲醇为空白管分别以波长650nm，525nm比色，ra=a650/a525。

因为美蓝吸收峰为波长650nm，伊红吸收峰波长为525nm，天青b吸收峰也为650nm，但吸光度a约为美蓝的一半.所以新配制染料的ra接近2，随着美蓝逐渐氧化为天青b，ra也相应下降，ra下降达1.3±0.1即可使用.瑞氏染料在贮存过程中必须塞严，以防甲醇挥发和氧化为甲酸.有人主张配方中加入30ml甘油，防止甲酸挥发，并可使细胞染色清晰.甲醇必须纯净，如甲醇中丙酮含量过多，染色偏酸，使细胞着色不良.2.磷酸盐缓冲液（ph6.4-6.8）：

磷酸二氢钾0.3g加磷酸氢二钠0.2g再加蒸馏水至1000ml，配制成磷酸盐缓冲液调整ph，如无缓冲液可用新鲜蒸馏水代替.3.白细胞分类计数正常参考值细胞类别成人

杆状核0.01-0.05分叶核0.50-0.70

嗜酸性粒细胞0.005-0.05嗜碱性粒细胞0-0.01淋巴细胞0.20-0.40单核细胞0.03-0.08

四、注意事项

1）玻片的清洗。

新玻片常有游离碱质，因此应用清洗液或10%盐酸浸泡24小时，然后再彻底清洗。

用过的玻片可放入适量肥皂水或合成洗涤剂的清水中煮沸20分钟，再用热水将肥皂和血膜洗去，用自来水反复冲洗，必要时再置95%乙醇中浸泡1小时，然后擦干或烤干备用。

使用玻片时只能手持玻片边缘，切勿触及玻片表面;，以保持玻片清洁，干燥，中性、无油腻。

2）细胞染色对氢离子浓度十分敏感，在染色过程中玻片必须化学清洁，配制瑞氏染液必须用优质甲醇，稀释染液必须用缓冲液，冲洗用水应近中性，否则各种细胞染色反应异常，致使细胞的识别困难，甚至造成错误。

3）一张良好的血片，要求厚薄适宜，头体尾分明，分布均匀，边缘整齐，两侧留有空隙。

血片制好后最好立即固定染色，以免细胞溶解和发生退行性变。

4）血膜未干透，细胞尚未牢固附在玻片上，在染色过程中容易脱落，因此血膜必需充分干燥.5）染色时间与染液浓度，室温高低，细胞多少有关.染液越淡，室温越低，细胞越多，所需染色时间越长或应适当增加染液量，因此染色时间应视具体情况而定.特别是更换新染料时必须经试染，摸索最佳染色条件.6）染液不可过少，以防蒸发干燥染料沉着于血片上难冲洗干净.7）冲洗时应用流水将染液冲去.不能先倒掉染液，以免染料沉着于血片上.8）染色过深可用甲醇或酒精适当脱色，最好不复染，必须复染时，可将染液先稀释好再复染.9）染色时应注意保护血膜尾部细胞，不能划掉.因为体积较大细胞常在此处出现.染色结果：

在正常情况下血膜外观为粉红色，在显微镜下红细胞呈肉红色；白细胞胞浆能显示各种细胞的特有色彩，细胞核染紫红色，染色质清楚，粗细松紧可辨。

染色结果偏酸，则红细胞和嗜酸性粒细胞颗粒偏红，白细胞核呈浅蓝色或不着色；染色结果偏碱，则所有细胞染成灰蓝色，颗粒深暗，嗜酸性颗粒可染成暗褐色，甚至紫黑色或蓝色。

嗜中性颗粒偏粗，偏碱（紫黑色）.血片原处呈绿色.

五、思考题

（1）如何区别血液的凝集和凝固。

其机理有何差别。

（2）根据你的血型，判断你能接受何种血型并且能够给何种血型供血。

（3）o型血人又被称为“万能供血者”，试根据abo血型分型作出你对这一说法的理解（4）试根据父母的血型，写出后代的可能血型：

第三篇：

血涂片评价和分类计数的质量控制流程血涂片评价和分类计数的质量控制流程

血涂片评价

血涂片的显微镜检查是血液细胞学检查的基本方法，临床上应用极为广泛，制备薄适宜，分布均匀，染色良好的血涂片是血液学检查的重要基本技术之一。

一、血涂片制作

取末梢血1滴，置载玻片一端，取另一边缘光滑的推片，放在血滴前面慢慢后移，接触血滴后稍停。

血液即沿推片散开，将推片与载片保持30～45°角，向前平稳均匀推动推片，载片上便留下一层薄血膜。

血涂片制成后，立即在空气中挥动，使其迅速干燥，以免血细胞变形。

血膜干燥后，用铅笔在血膜的一侧写上病人姓名或编号。

一张良好的血片，厚薄要适宜，头体尾要明显，细胞分布要均匀，膜的边缘要整齐，并留有一定的空隙。

涂片时血滴愈大，角度愈大，推片速度愈快则血膜愈厚，反之血膜愈薄。

太薄的血膜片50%的白细胞集中于边缘或尾部，

血涂片过厚，细胞重叠缩小均不利于白细胞分类计数。

如果血膜分布不匀，主要是推片不整齐，用力不均匀，载片不清洁所致。

二、血涂片的质量控制

1、血膜片的质量要求是厚薄均匀适度，低倍镜下观察全片，细胞不重叠，头尾及两侧有一定的空隙，血膜头部有明确的病人标志。

2、一些体积较大的特殊细胞常在血膜的尾部出现，因此蜡笔划线时应注意保存血膜尾部细胞，血膜必须充分干燥，否则在染色过程中容易脱落。

3、配制染料须用优质甲醇，稀释染液用缓冲液，因为缓冲液的ph对细胞染色的影响很重要。

在偏酸性环境中正电荷增多，在偏碱性环境中负电荷增多，又因为细胞着色对氢离子浓度十分敏感。

如果染色偏碱，原是紫红色的中性颗粒则染成深蓝色，造成识别困难。

冲洗须用中性水，虽亦可用自来水（但不能保持稳定）。

4、对所用染液应进行预染试验，新配制的染液放置一段时间后其中的美蓝逐渐氧化成天青b，天青b对细胞核的着色效果比美蓝好，因此，瑞氏染液放置时间越长染色效果越好，临床上称之为成熟。

判断染液成熟程度的简易方法是用正常优质血片做预染试验，先用低倍镜观察载有染液的血片，认为着色满意后，再按照染色后冲洗顺序最后用油镜镜检，这样不仅可了解染液的成熟程度，而且还可以选择合适的染色时间，供临床标本染色时参考。

5、染液与缓冲液的比例要适当，以1∶2为宜。

一般说来缓冲液稀释度愈大，染色时间愈长，细胞着色愈匀称、鲜艳。

缓冲液和染液量要充足，否则染液很快蒸发，染料沉淀于细胞上，使细胞深染而无法检查。

细胞较多较厚的涂片（如红细胞增多症）染液应多些。

细胞较少的涂片染液应少些。

6、染色时间与染液浓度、室温高低、细胞多少有关，染液愈淡，室温越低，细胞愈多，所需时间越长，应适当增加染液浓度，因此必须根据情况灵活掌握。

7、染色良好的血膜片，外观呈浅红色，红细胞呈粉红色，白细胞核呈暗紫红色，染色质结构能辨，粒细胞的颗粒呈固有种特异颜色。

四、注意：

在日常工作中遇到特殊标本，在制片时就要特殊对待。

如：

贫血病人、wbc特高疑为白血病人、腹水或胸水。

个人：

由检验师（士）完成涂片、染色、计数、分类。

两差比较：

由主管技师计数、分类。

双份技术标准差评价法。

由检验师（士）及副主管技师计数、分类后比较。

质评：

a级（优）：

90~100分。

b级（良）：

80~89分。

c级（中）：

70~79分。

d级（及格）：

60~69分。

e级（不及格）：

内容仅供参考