形态分析测定方法手册.docx
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形态分析测定方法手册
北京吉天仪器有限公司
形
态
分
析
方
法
目录
1As形态分析方法测定1
1.1无机砷或溶液中砷形态的测定方法1
1.1.1等度法1
1.1.2梯度法2
1.2紫菜或者海带等海植物产品中砷形态的测定3
1.3海动物产品中AsB的测定方法4
1.4饲料中砷形态的测定方法5
1.4.1等度法5
1.4.2梯度法6
1.4.2.16
1.4.2.27
1.4.2.38
1.4.2.49
2Hg形态分析方法测定10
2.1氢化物发生汞形态测定方法10
2.2光化学气相发生汞形态测定方法11
3Se形态分析方法测定12
3.112
3.213
3.314
4锑形态分析方法测定15
4.1固体样品中锑形态的测定方法15
4.2水样中锑形态的测定方法16
5样品中砷、汞、锑形态测定的前处理方法17
5.1砷形态测定的前处理方法17
5.1.1水提的方法17
5.1.2酸提的方法17
5.2汞形态测定的前处理方法17
5.3锑形态测定的前处理方法17
5.4水样中砷、硒、汞和锑形态测定的前处理方法17
附录18
形态分析测定方法
1As形态分析方法测定
1.1无机砷或溶液中砷形态的测定方法
1.1.1等度法
色谱参数
阴离子交换柱
HamiltonPRP-X100（250mm×4.1mmi.d.,10μm）
流动相
15mmolL-1（NH4）2HPO4（用甲酸调节pH=6.0）
流速
1.0mLmin-1
进样体积
100μL
氢化物发生参数
还原剂
1.5%KBH4/0.5%KOH
载流
7%HCl
元素灯
As（100mA/45mA）
AFS参数
负高压
285V
灯电流
100mA
载气
400mLmin–1
屏蔽气
600mLmin–1
上述色谱图中，其色谱峰从左至右依次为：
As（III）,100µg/L;DMA,100µg/L;MMA,100µg/L;As（V）,100µg/L.
1.1.2梯度法
色谱参数（IC）
氢化物发生原子荧光（HG-AFS）
色谱柱
DionexIonPacAS10
（250mm×4mmi.d.,5μm）
KBH4
2%KBH4/0.5%KOH
保护柱
DionexIonPacAG10
（250mm×4mmi.d.,5μm）
HCl
7%
进样体积
100μL
负高压
300V
流动相
（A泵）50mmol/LNaOH
（B泵）150mmol/LNaOH
灯电流
100/45mA
0~3min，100%A；流速1.0mlmin–1
3~8min，100%B；流速1.0mlmin–1
8~20min，100%A；流速1.0mlmin–1
载气
氩气，400mLmin–1
屏蔽气
氩气，600mLmin–1
上述色谱图中，其色谱峰从左至右依次为：
DMA,100µg/L;As（III）,100µg/L;MMA,100µg/L;As（V）,100µg/L.
1.2紫菜或者海带等海植物产品中砷形态的测定
色谱参数
阴离子交换柱
HamiltonPRP-X100（250mm×4.1mmi.d.,10μm）
流动相
A1mmolL-1K2HPO4+5%CH3OH（pH9.0）
B15mmolL-1K2HPO4+5%CH3OH（pH5.6）
流速
1.0mLmin-1
进样体积
100μL
梯度条件
0-5min100%A
5-15min100%B
15-40min100%A
氢化物发生参数
还原剂
1.5%KBH4/0.5%KOH
载流
7%HCl
元素灯
As（100mA/45mA）
AFS参数
负高压
300V
灯电流
100mA
载气
400mLmin–1
屏蔽气
600mLmin–1
上述色谱图中，其色谱峰从左至右依次为：
As（III）,50µg/L;DMA,50µg/L;MMA,50µg/L;As（V）,50µg/L.
1.3海动物产品中AsB的测定方法
色谱参数
阴离子交换柱
HamiltonPRP-X100（250mm×4.1mmi.d.,10μm）
流动相
5mmolL-1（NH4）2HPO4（用氨水调节pH=8.45）
流速
1.0mLmin-1
进样体积
100μL
氢化物发生参数
还原剂
1.5%KBH4/0.5%KOH
载流
7%HCl
元素灯
As（100mA/45mA）
AFS参数
负高压
300V
灯电流
100mA
载气
400mLmin–1
屏蔽气
600mLmin–1
上述色谱图中，其色谱峰从左至右依次为：
AsB,50µg/L;As（III）,50µg/L;DMA,50µg/L;MMA,50µg/L;As（V）,50µg/L.
1.4饲料中砷形态的测定方法
1.4.1等度法
色谱参数
反相C18柱
AgelaMP-C18（250mm×4.6mmi.d.,5μm）
流动相
50mmolL-1KH2PO4+0.1%CH3COOH+5%CH3OH（v/v）
流速
1.0mLmin-1
进样体积
100μL
氢化物发生参数
还原剂
2%KBH4/0.5%KOH
载流
7%HCl
氧化剂
1%K2S2O8/0.5%KOH
元素灯
As
AFS参数
负高压
300V
灯电流
100mA/45mA
载气
300mLmin–1
屏蔽气
600mLmin–1
1.4.2梯度法
1.4.2.1
色谱参数
阴离子交换柱
HamiltonPRP-X100（250mm×4.1mmi.d.,10μm）
流动相
A15mmolL-1（NH4）2HPO4（pH6.0）
B10mmolL-1邻苯二甲酸氢钾（pH6.0）
流速
1.0mLmin-1
进样体积
100μL
梯度条件
0-3min100%A
3-7min100-0%A;0-100%B
7-18min100%B
18-35min100%A
氢化物发生参数
还原剂
1.5%KBH4/0.5%KOH
载流
7%HCl
氧化剂
2%K2S2O8/0.5%KOH
元素灯
As
AFS参数
负高压
285V
灯电流
100mA/45mA
载气
400mLmin–1
屏蔽气
600mLmin–1
上述色谱图中，其色谱峰从左至右依次为：
As（III）,100µg/L;DMA,100µg/L;MMA,100µg/L;As（V）,100µg/L;p-ASA,100µg/L;Rox,100µg/L.
1.4.2.2
色谱参数（IC）
氢化物发生原子荧光（HG-AFS）
色谱柱
PhenomenexprodigyC18
（250mm×4.1mmi.d.,10μm）
K2S2O8
2.0%K2S2O8/0.5%KOH
保护柱
PhenomenexprodigyC18
（25mm×2.3mmi.d.,12-20μm）
KBH4
2%KBH4/0.5%KOH
进样体积
100μL
HCl
7%
流动相
（A泵）10mmol/LNaH2PO4，0.5mmol/L四丁基溴化铵（TBAB），3%甲醇，pH6.2
负高压
300V
（B泵）50mmol/LNaH2PO4，0.5mmol/L四丁基溴化铵（TBAB），5%甲醇，pH6.2
灯电流
100/45mA
0~10min，100%A；流速1.0mlmin–1
10~20min，100%B；流速1.2mlmin–1
20~30min，100%A；流速1.2mlmin–1
载气
氩气，400mLmin–1
屏蔽气
氩气，600mLmin–1
上述色谱图中，其色谱峰从左至右依次为：
As（III）,50µg/L;DMA,50µg/L;MMA,50µg/L;p-ASA,50µg/L;As（V）,50µg/L;Rox,50µg/L.
1.4.2.3
色谱参数（IC）
氢化物发生原子荧光（HG-AFS）
色谱柱
PhenomenexprodigyC18
（250mm×4.1mmi.d.,10μm）
K2S2O8
2.0%K2S2O8/0.5%KOH
保护柱
PhenomenexprodigyC18
（25mm×2.3mmi.d.,12-20μm）
KBH4
2%KBH4/0.5%KOH
进样体积
100μL
HCl
7%
流动相
（A泵）5mmol/LNaH2PO4，0.5mmol/L四丁基溴化铵（TBAB），5%甲醇，pH6.22
负高压
300V
（B泵）10mmol/LNaH2PO4，0.5mmol/L四丁基溴化铵（TBAB），5%甲醇，pH7.55
灯电流
100/45mA
0~8min，100%A；流速1.0mlmin–1
8~17min，100%B；流速1.0mlmin–1
17~30min，100%A；流速1.0mlmin–1
载气
氩气，400mLmin–1
屏蔽气
氩气，600mLmin–1
上述色谱图中，其色谱峰从左至右依次为：
As（III）,50µg/L;DMA,50µg/L;MMA,50µg/L;p-ASA,50µg/L;As（V）,50µg/L;Rox,50µg/L.
1.4.2.4
色谱参数（IC）
氢化物发生原子荧光（HG-AFS）
色谱柱
DionexIonPacAS10
（250mm×4mmi.d.,5μm）
UV灯
新型高透过率灯
保护柱
DionexIonPacAG10
（250mm×4mmi.d.,5μm）
KBH4
2%KBH4/0.5%KOH
进样体积
100μL
HCl
7%
流动相
（A泵）50mmol/LNaOH
负高压
300V
（B泵）200mmol/LNaOH
灯电流
100/45mA
0~5min，100%A；流速1.0mlmin–1
5~17min，100%B；流速1.0mlmin–1
17~30min，100%A；流速1.0mlmin–1
载气
氩气，400mLmin–1
屏蔽气
氩气，600mLmin–1
上述色谱图中，其色谱峰从左至右依次为：
As（III）,50µg/L;DMA,50µg/L;MMA,50µg/L;p-ASA,100µg/L;As（V）,50µg/L;Rox,100µg/L.
2Hg形态分析方法测定
2.1氢化物发生汞形态测定方法
色谱参数
反相C18柱
AgelaMP-C18（150mm×4.6mmi.d.,5μm）
流动相
5%乙腈+60mM乙酸胺+10mM半胱氨酸
流速
1.0mLmin-1
进样体积
100μL
氢化物发生参数
还原剂
2%KBH4/0.5%KOH（热汞）
0.05%KBH4/0.5%KOH（冷汞）
载流
7%HCl
氧化剂
1%K2S2O8/0.5%KOH
元素灯
Hg
AFS参数
负高压
270~300V
灯电流
30mA
载气
300mLmin–1
屏蔽气
600mLmin–1
上述色谱图中，其色谱峰从左至右依次为：
Hg（II）,10µg/L;MeHg,10µg/L;EtHg,10µg/L.
2.2光化学气相发生汞形态测定方法
色谱参数
反相C18柱
AgelaMP-C18（150mm×4.6mmi.d.,5μm）
流动相
5%乙腈+60mM乙酸铵+10mM半胱氨酸
流速
1.0mLmin-1
进样体积
100μL
光诱导试剂
10%HCOOH
UV灯
新型高透过率灯
元素灯
Hg
AFS参数
负高压
300V
灯电流
30mA
带出气
100mLmin–1
载气
300mLmin–1
屏蔽气
600mLmin–1
上述色谱图中，其色谱峰从左至右依次为：
Hg（II）,10µg/L;MeHg,10µg/L;EtHg,10µg/L.
3Se形态分析方法测定
3.1
色谱参数
反相C18柱
AgelaMP-C18（250mm×4.6mmi.d.,5μm）
流动相
30mM（NH4）2HPO4+0.5mM四丁基溴化铵（TBAB）+2%CH3OH，HCOOH调节pH=6.0
流速
1.0mLmin-1
进样体积
100μL
氢化物发生参数
还原剂
0.5%KOH+2%KBH4+0.1%KI
载流
10%HCl
开UV
元素灯
Se
AFS参数
负高压
300V
灯电流
100/45mA
载气
300mLmin–1
屏蔽气
600mLmin–1
上述色谱图中，其色谱峰从左至右依次为：
Se-Cys,100µg/L;Se（Ⅳ）,100µg/L;Se-Met,100µg/L;Se（Ⅵ）,100µg/L.
3.2
色谱参数
阴离子交换柱
DionexIonPacAS10（250mm×4mmi.d.,5μm）
流动相
50mM（NH4）2HPO4pH=9.8
流速
1.0mLmin-1
进样体积
100μL
氢化物发生参数
还原剂
0.5%KOH+2%KBH4+0.1%KI
载流
10%HCl
开UV
元素灯
Se
AFS参数
负高压
300V
灯电流
100/45mA
载气
300mLmin–1
屏蔽气
600mLmin–1
上述色谱图中，其色谱峰从左至右依次为：
Se-Met,100µg/L;Se（Ⅳ）,100µg/L;Se-Cys,100µg/L;Se（Ⅵ）,100µg/L.
3.3
色谱参数
阴离子交换柱
DionexIonPacAS10（250mm×4mmi.d.,5μm）
流动相
15mM（NH4）2HPO4pH=4.5
流速
1.0mLmin-1
进样体积
100μL
氢化物发生参数
还原剂
0.5%KOH+2%KBH4+0.1%KI
载流
10%HCl
开UV
元素灯
Se
AFS参数
负高压
300V
灯电流
100/45mA
载气
300mLmin–1
屏蔽气
600mLmin–1
上述色谱图中，其色谱峰从左至右依次为：
Se-Cys,100µg/L;Se-Met,100µg/L;Se（Ⅳ）,100µg/L.
4锑形态分析方法测定
4.1固体样品中锑形态的测定方法
色谱参数
阴离子交换柱
HamiltonPRP-X100（250mm×4.1mmi.d.,10μm）
流动相
1.5mM邻苯二甲酸氢钾（KHP）+10mMEDTA二钠盐
流速
1.0mLmin-1
进样体积
100μL
氢化物发生参数
还原剂
0.5%KOH+2%KBH4+0.1%KI
载流
10%HCl
开UV
元素灯
Sb
AFS参数
负高压
300V
灯电流
100/45mA
载气
400mLmin–1
屏蔽气
600mLmin–1
标准溶液
用100mM柠檬酸配制定容
上述色谱图中，其色谱峰从左至右依次为：
Sb（Ⅲ）,100µg/L;Sb（Ⅴ）,100µg/L.
4.2水样中锑形态的测定方法
色谱参数
阴离子交换柱
HamiltonPRP-X100（250mm×4.1mmi.d.,10μm）
流动相
1mM邻苯二甲酸氢钾（KHP）+10mMEDTA二钠盐
流速
1.0mLmin-1
进样体积
100μL
氢化物发生参数
还原剂
0.5%KOH+2%KBH4
载流
7%HCl
元素灯
Sb
AFS参数
负高压
300V
灯电流
100/45mA
载气
400mLmin–1
屏蔽气
600mLmin–1
标准溶液
用去离子水配制定容
上述色谱图中，其色谱峰从左至右依次为：
Sb（Ⅴ）,100µg/L;Sb（Ⅲ）,100µg/L.
5样品中砷、汞、锑形态测定的前处理方法
5.1砷形态测定的前处理方法
5.1.1水提的方法
水提主要是指称取0.5g样品置入盛有10mL超纯水的容器中，然后聚焦超声一段时间之后，离心，取上清液测定。
若只需测定样品中无机砷的含量，可以在离心之后，取2mL上清液，然后加入同样体积的20%H2O2（体积分数），同时在70℃水浴振荡器中静止20min，最终直接上机测试。
5.1.2酸提的方法
酸提主要是指称取0.5g样品至10mL比色管中，然后加入4mL10%HCl（体积分数），在70℃水浴振荡器中以100r/min振荡1.0h，接着再加入4mL超纯水并继续振荡1.0h，然后离心并取2mL上清液，最后再向2mL上清液中加入同样体积的20%H2O2（体积分数），同时在70℃水浴振荡器中静止20min，最终直接上机测试。
5.2汞形态测定的前处理方法
称取0.25g样品，加入2mL的提取液，旋涡混合5min，然后离心沉淀取上清液，再加2mL提取液提取一次，两次提取液合并，用氨水中和PH至2-8（加氨水0.7mL），再用过滤头过滤，然后过C18小柱净化处理，再用4mL流动相分两次洗脱，每次2mL，流出液和洗脱液都进行收集，最后定容至10mL测定，如有需要可再离心一次。
5.3锑形态测定的前处理方法
称取0.5g样品（液体样品取0.5mL）于10mL的塑料离心管中，加入3mL的提取液,在漩涡混合器上振荡混合5min,然后放入超声波清洗器中超声30min,离心后取上层清液;残留的样品再用同样的方法提取一次,两次得到的上清液合并，将获得的上清液先用0.45μm滤膜过滤,再定容到10mL,上机测定。
5.4水样中砷、硒、汞和锑形态测定的前处理方法
在测定水样或者溶液状态的样品时，必须用直径小于或等于0.45µm针头过滤器将样品进行过滤，然后才能上机进行测定。
附录
已发表的文章：
1.秦德元，刘霁欣，张新智.原子荧光形态分析仪在汞、锑形态分析中的应用，现代科学仪器，2009年4月，第2卷，第2期，74-77
2.秦德元，张新智，刘霁欣.化妆品中砷、锑无机形态的HPLC-HGAFS同测，生命科学仪器，2009年3月，第7卷，33-37
3.韦昌金，刘霁欣，裴晓华.离子交换色谱-氢化物发生双道原子荧光法同时测定砷和硒形态，分析化学，2008年8月，第36卷，第8期，1061-1065
4.韦昌金，徐浩，刘霁欣，韩昊.原子荧光形态分析仪测量海藻中无机砷，农业质量标准，2007年增刊，43-47.
北京吉天仪器有限公司形态分析方法组
2010-6-10
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