试验八植物体内硝态氮含量的测定安徽建筑大学.docx
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试验八植物体内硝态氮含量的测定安徽建筑大学
《环境生物学实验》
实验指导书
洪桂云鲍立宁王莉编写
适用专业：
环境生态工程
安徽建筑大学环境与能源工程学院
2017年6月
前言
《环境生物学实验》是环境生态工程专业的必修课。
本课程是培养学生基本技能、训练实践技能的一个重要教学环节，通过实验使学生对环境生态工程中的生物学原理有一个深入的认识，从而更深刻地理解和掌握专业基本理论和基本知识，并且为日后深入研究污水监测、修复技术提供一种实践技能。
通过本课程学习使学生掌握微生物和植物学实验的基本原理、基本知识和基本实验技能；掌握显微镜的使用、保养，水质生物学检测，微生物的基本形态认识及微生物的培养、分离、染色、计数等基本技能，培养学生独立操作能力；树立理论联系实际的基本思想，养成良好的动手能力，增强创新能力。
本课程共设10个实验，其中显微镜的使用及放线菌、真菌、藻类等微生物形态的观察，水中浮游动物的观察和数量的测定，培养基的制备及灭菌，植物叶绿素提取，植物体内硝态氮含量的测定为验证性试验；空气中微生物的计数，水中细菌总数的检测及水质量评价，植物种子发芽毒性检测，植物体内过氧化物酶对污染物的测定，有机物的微生物降解为综合性实验。
实验技术课的主旨和要求
1.1实验技术的主旨
任何科学知识和理论都来源于实际的观察和科学实验，这一点对于环境科学更是如此。
实验技术课程是大多数课程的重要组成部分，在实验课上培养起来的科研素质和实验技能，不仅对学生完成学业而且对从事创新性课题研究都具有重要而深远的意义。
实验技能的培养包括：
1设计实验，在了解实验原理和目的基础上，逐渐学会自己设计实验；
2观察与测量，这是实验过程的主要内容；
3实验记录，真实准确地记录实验中每一个数据、每一个细节并且及时进行整理；
4分析和解释数据，是处理实验数据的基本功；
5写作实验报告，是对实验技术过程和实验结果的总结，同时也是提升综合科研素质和实验能力的重要一环。
1.2实验技术课的基本要求
1.2.1课前充分准备
课前务必做到如下准备
1预先仔细阅读实验讲义内容，明确实验目的和实验技术。
该实验与当前的课堂学习有关吗？
是否需要复习或预习这部分内容？
完成预习报告。
2实验时携带记录本，钢笔等必要的文具，以便记录实验中的数据和现象。
3认真了解并严格遵守实验室和野外工作的规则。
1.2.2实验过程
实验过程中认真、准确地记录每一个数据和每一个细节，不管是否对实验结果有意义，都要记录下来，不放过任何疑点。
实验过程中保持桌面整洁，实验记录本放在工作区附近，但不要放在工作区内；把清洁的器具放在实验桌的一边，使用过的放在另一边。
对于公用的实验试剂和用具，遵守“物归原处”的原则，用完后立即原样放好。
这是对自己对他人都方便的职业习惯，必须注意养成。
1.2.3按时完成实验报告或论文
在完成实验内容后或阶段性实验后，必须及时地进行总结，对实验内容和实验结果用简洁的文字表达出来，这就是实验报告，如果是阶段性课题研究就是科学论文。
写作实验报告和科学论文的过程也是提高写作水平和整理、提高科研水平的过程。
写实验报告时，从“材料和方法”开始写起，是最容易入手的方法。
把实验中所用的实验材料和实验方法用简洁的文字尽可能详细而又准确地表述出来。
“结果”、“讨论”是最难写的部分，可以先写出初稿，隔几天后再仔细斟酌每一句、每一字。
写实验报告也必须事先计划，务必安排足够时间进行修改、计论。
为了按时高质量地完成实验报告或论文，必须设置时间表，并要留有余地。
1.3实验工作记录
在进行现代化的实验室工作或课题研究项目时，需要掌握处理数据和观察结果的技能，要学会在实验记录本上记录研究情况，原因是：
准确和有条理的记录有助于以后使用，如写实验报告或写论文；进行重要的技能锻炼，如科学写作、绘图、制表或解释结论等；在研究过程中分析和处理数据，避免研究结束时积压起来。
1.4实验报告与论文写作
在每项实验完成后都必须尽快写出实验报告，这是培养和提高科学研究素质的重要方法，也是与他人进行科学成果交流的重要方式。
虽然实验报告与课题报告、学位论文在内容的深度、广度及篇幅上有很大区别，但是他们的基本结构是相同的，实验报告或论文的结构（格式）如下：
实验工作报告的结构（格式）几乎适用于所有毕业论文和论文，一般来讲大学生的实验报告和课题研究报告均以这种结构作为模式。
普通目录的格式有“结果和讨论”部分，便于分析结果，并指出经研究得到的一些观点。
在科技论文中，摘要之后紧跟着关键词。
目录
实验一显微镜的使用及微生物形态观察1
实验二水中浮游动物的观察和计数6
实验三培养基的制备及灭菌8
实验四不同类型水体中细菌总数的检测及水质量评价11
实验五空气中微生物的计数15
实验六植物种子发芽毒性检测18
实验七植物体内过氧化物酶活性的测定（比色法）20
实验八植物体内硝态氮含量的测定22
实验九植物叶绿素含量的测定24
实验十有机物的微生物降解26
实验一显微镜的使用及微生物形态观察
实验学时：
2学时
实验类型：
验证性
实验要求：
必修
一、实验目的
1．学习普通光学显微镜的使用方法（本实验学习低倍镜和高倍镜的使用）。
2．观察藻类，酵母菌、霉菌、放线菌和细菌的形态。
二、实验器材
显微镜、各类型微生物样片。
三、实验步骤
（一）显微镜的结构和各部分的作用
如图所示，是微生物检验常用的显微镜，其构造分机械和光学两部分。
机械部分主要包括：
1．镜筒镜筒长度一般是160mm。
它的上端装有接目镜，下端有回转板。
回转板上一般装有3个接物镜。
2．载物台载物台是放置标本的平台，中央有一圆孔。
使下面的光线可以通过。
两旁有弹簧夹，用以固定标本或载玻片。
有的载物台上装有自动推物器。
3．调节器镜筒内旁有两个螺旋，大的叫粗调节器，小的叫细调节器，用以升降镜筒。
调节接物镜与所需观察的物体之间的距离。
光学部分主要包括：
1．接目镜一般使用的显微镜具有2～3个接目镜，其上常刻有“5×”、“l0×”或“15×”等数字及符号，意即使用时可放大5倍、l0倍或15倍。
观察微生物时常用放大l0倍或15倍的接目镜。
2．接物镜接物镜装在回转板上，可分低倍镜、高倍镜和油镜3种，其相应的放大倍数常是10、40、l00。
通常显微镜的放大倍数等于接物镜与接目镜放大倍数的乘积。
例如，用放大40倍的接物镜（高倍镜）与放大10倍的接目镜时所得的物象的放大倍数为40×10＝400，如果用放大15倍的接目镜则放大倍数为40×15＝600。
接目镜装在镜筒上端，在使用过程中并不经常变动，所以通常所谓的低倍镜、高倍镜或油镜的观察主要是指使用不同的接物镜而言的。
油镜的放大倍数最大（100倍）。
放大倍数这样大的镜头，焦距就很短，直径就很小，所以自标本玻片透过的光线，因介质密度（从玻片至空气，再进入油镜）不同，有些光线因折射或全反射，就不能进入境头，致使射入的光线较少，物象显现不清。
所以为了不使通过的光线有所损失，须在油镜与玻片中间加入和玻璃折射率（n=1.52）相仿的镜油（香柏油，n=1.515）。
因为这种接物镜使用时须加镜油，所以我们称它为油镜（图8—2）。
一般的低倍镜或高倍镜使用时不加油，所以也称干镜。
使用低倍镜和高倍镜时，一般作活体的观察，不进行染色。
在观察细小动物时，低倍镜主要用来区别动物的种类和看出它们的活动状态，而高倍镜则可看清动物的结构待征，低倍镜容易看到标本的全貌，油镜在大多数情况下是用来观察细菌染色的涂片。
3．集光器集光器在载物台的下面，用来集合由反光镜反射来的光线。
集光器可以上下调整，中央装有光圈，用以调节光线的强弱。
当光线过强时，应缩小光圈或把集光器向下移动。
4．反光镜反光镜装在显微镜的最下方至集光器。
（二）显微镜使用和保护的方法
1．低倍镜的使用法
（1）置显微镜于固定的桌几上，窗外不宜有障碍视线之物。
（2）拨动回转板，把低倍镜移到镜筒正下方，和镜筒连接而对直。
（3）拨动反光镜向着光线的来源处，同时用眼对准接目镜（选用适当放大倍数的接目镜）仔细观察，使视野完全成为白色，这是光线已经通到镜里的表示。
（4）把载玻片放到载物台上，要观察的标本放到圆孔的正中央。
（5）将粗调节器向下旋转，同时眼睛注视接物镜，以防接物镜和载玻片相碰。
当接目镜的尖端距载玻片约0.5cm时停止旋转。
（6）把粗调节器向上旋转，同时左眼向接目镜里观察。
如标本显出，但不十分清楚，可用细调节器调节，至标本完全清晰为止。
（7）假如因旋转粗调节器太快，致使超过焦点，标本不能出现时，不应在眼睛注视接目镜的同时向下旋转粗调节器，必须从第（5）步做起，以防因没有把握的旋转，使接目镜与载玻片碰触。
（8）在观察时，最好两眼都能同时睁开一面看一面画出所看到的物象。
2．高倍镜的使用法
（1）使用高倍镜以前，先用低倍镜检查，把要观察的标本放到视野正中。
（2）拨动回转板使高倍和低倍两镜头互相对换。
当高倍镜移动到载玻片时，往往镜头十分靠近载玻片。
这时必须注意是否因高倍镜靠近的缘故而使载玻片也随着移动。
如果载玻片有移动的现象，则应立刻停止推动回转板，把高倍镜退回原处，再按照使用低倍镜的方法，校正标本的位置，然后旋动调节器，使镜筒稍微向上，再对换高倍镜头。
（3）当高倍镜已被推到镜筒下面时，向镜内观察所显现的标本，往往不很清楚，这时可旋转细调节器，上下移动，但不要过分移动。
3．油镜的使用法
（1）如用高倍镜放大，倍数还不够，则须采用油镜。
用油镜以前，先用高倍镜检查，把要观察的标本放到视野正中。
（2）用油镜时，在载玻片上加一滴镜油，然后拨动回转板对换高倍镜和油镜，使油镜头尖端和油接触，而后向接目镜观察。
假如不清晰，可稍微转动调节器，但切记不要用粗调节器。
（3）用过油镜后，必须用擦镜纸或软绸将载玻片和油镜所粘着的油拭净。
必要时，可略蘸二甲苯少许，揩拭镜头，最后用擦镜纸或软绸擦干。
4．显微镜的保护法
（1）显微镜应放置在干燥的地方，使用时须避免强烈的日光照射。
（2）接物镜或接目镜不清洁时，应当用擦镜纸或软绸揩擦。
（3）用完显微镜后，应当立即放到镜匣中。
（三）目测微尺和物测微尺及其使用的方法
1．目测微尺目测微尺是一圆形玻片，其中央刻有精确的刻度（图8-3）。
刻度的大小，随使用的接目镜和接物镜放大的倍数以及镜筒长度而改变。
使用前，应先利用物测微尺进行标定。
2．物测微尺物测微尺系一厚玻片，中央有一圆形盖破片（图8—4）。
上有100等分刻度．每等分的长度为1/100mm，即10µm。
使用时，先将目测微尺装入接目镜的隔板上，使刻度朝下；把物测微尺放在载物台上，使刻度朝上，用平常观察标本的方法，先找到物测微尺的刻度，再移动物测微尺与目测微尺使两者的第一线相合，然后计算物测微尺的每一小格内有目测微尺的小格若干个，于是计算后者刻度所表示的长度。
如物测微尺的一小格相当于5个目测微尺的小格，则目测微尺在此种条件下，其每格的长度即等于10/5或2µm。
如在同样条件下测量物体，而物体之长适为目测微尺的两小格，宽为半小格，则可知此物体的大小为1µm×4µm。
（四）活性污泥和生物膜的观察
活性污泥法曝气池中的活性污泥和生物膜法构筑物中的生物膜是生物法处理废水的工作主体。
它们是由细菌、霉菌、酵母菌、放线菌、原生动物等微生物，以及后生动物如轮虫、线虫等与废水中的固体物质所组成。
本实验主要是观察活性污泥和生物膜的结构及菌胶团的形状和辨认活性污泥与生物膜的组成之一—原生动物的形态特征和运动方式等。
1．标本的制备
（1）活性污泥
1）取活性污泥法曝气池混合液一小滴，放在洁净的载玻片的中央（如混合液中污泥较少，可待其沉淀后，取沉淀污泥一小滴加到载玻片上；如混合液中污泥较多，则应稀释后进行观察）。
2）小心地用洗净的盖玻片覆盖。
这样，就制成了活性污泥的标本。
加盖玻片时应使其边缘已接触到水滴后才放下，否则会在片内形成气泡，影响观察。
（2）生物膜
1）从生物膜法的构筑物内刮取生物膜一小块，用蒸馏水稀释，制成供显微镜观察用的菌液。
对于用石子作滤料的生物滤池，也可取石子一小块，置于冲洗干净的烧杯中，加蒸馏水少许和干的玻璃珠，摇荡数分钟，使滤料上的生物膜脱落在水中，去掉滤料，再摇荡数分钟，做成菌液（如太浓、不易在显微镜下观察，可进行稀释）。
2）取菌液一小滴，置于洁净载玻片的中央，用洗净的盖玻片覆盖（注意不要有气泡）以备显微镜观察之用。
2．显微镜观察
（1）低倍镜观察
1）在选定的接目镜下，利用低倍镜，确定目测微尺一格的长度（单位以µm计）。
2）观察所制备的微生物标本玻片，画出所见原生动物、菌胶团等微生物的形态草图。
选择一个原生动物，量出其尺寸。
3）记下观察所用接目镜和接物镜的放大倍数和算出显微镜的放大倍数。
（2）高倍镜观察
1）改用高倍镜观察，画出微生物的形态草图，并与用低倍镜所看到的比较，注意其不同点。
2）记下显微镜的放大倍数。
四、实验作业
1.使用显微镜时，哪些地方需特别注意？
2.镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而不直接用高倍镜或油镜观察？
3.严格按照显微镜的使用方法，依次逐个观察藻类，酵母菌、霉菌、放线菌和细菌的形态。
分别绘制各种微生物的镜下形态图。
（各种类型至少1张，用铅笔绘图）。
实验二水中浮游动物的观察和计数
实验学时：
2学时
实验类型：
验证性
实验要求：
必修
一、实验目的
观察并测定水中浮游动物的数目。
二、实验器材
1．活性污泥法曝气池混合液。
2．显微镜、小量筒、滴管等。
3．计数板如果没有微型动物计数的计数板（微型动物，即使是原生动物，也比细菌大得多，—般的细菌或血球计数板都不适用），则可按照上海织袜四厂和上海师范大学生物系所介绍的微型动物计数板制作方法制备如下：
采用厚质玻璃割成9cm长，4cm宽的长方块，玻璃厚度以0.3～0.4cm为宜。
利用氢氟酸腐蚀法，使玻板中央刻上10×l0＝100个小方格，小方格的大小没有严格规定，只要一片大号盖玻片能盖满格子有余和便于在显微镜下计数就可以了。
用大号盖玻片切成宽约0.7cm的玻条，用阿拉伯树胶粘在计数用的小方格的四周，使呈一圈凸起的边框。
这样，就制成了一块微型动物计数板，如图8-5所示。
关于氢氟酸腐蚀法划方格的方法是先将玻璃表面涂一层薄面均匀的石蜡，然后用尖针在石蜡层上刻出所要求的方格，再以氢氟酸蒸汽进行重蒸。
三、实验步骤
1．将活性污泥法曝气池混合液轻轻搅拌均匀；如混合液较浓，则可稀释成1:
1的液体（稀释方法：
取l0mL量筒一个，加混合液5mL再加蒸馏水5mL，搅拌均匀，即成1:
1稀释液）。
2．取洗净的滴管一支（滴管每滴水的体积应预先标定，一般每一滴水的体积约为l／20mL），吸取摇匀的混合液或己稀释的混合液加一滴到计数板的中央方格内，然后加上一块洁净的大号盖玻片，使玻片的四周正好搁在计数板四周凸起的边框上，侧视如图8—6所示。
3．用低倍显微镜进行计数注意所滴加的液体不一定布满整个l00格小方格，在显微镜下计数时只要把充有液体的小方格，挨着次序一行行的计算即可。
同时记录各种动物的活动能力、形态结构等。
原生动物中有不少种类是群体，须将群体和群体上的个体分别计数。
4．计算设在一滴水中测得钟虫30只，则每mL混合液中含有钟虫30×2×20＝1200只，如测得轮虫10只，则每毫升混合液含轮虫10×2×20＝400只（如滴管每一滴体积为1/20mL，所观察的液体是1:
l稀释的曝气池混合液）。
注：
（1）如无计数板，则可用下法进行计数：
1）取洗净的滴管1支（其每一滴水的体积应预先标定）吸取混合均匀的曝气池混合液或已稀释的混合液，滴1滴在载玻片的中央，以盖玻片（以方形为好）轻轻盖上水滴，要避免盖玻片内形成气泡。
2）将标本放在显微镜低倍镜下计数。
计数时，先将视野放在盖玻片的右上角（可根据各人的习惯），然后移动玻片，视野即可随之从上而下、从左而右通过。
当前一个视野数完，并做好记录后，再换第二个视野，如此往复将整个盖玻片下面的动物全部计数完毕。
注意在调换视野时，不可使相邻的视野重叠或遗漏。
然后换算成1ml混合液中的动物数。
3）生物滤池和生物转盘上的生物膜形成胶状，浓度大，一般都必须稀释后计数，其适当的稀释比可在实践中摸索。
4）上述计数方法仅适用于原生动物和轮虫，对个体较大的微型动物和线虫等，则须加大计数容量，以免造成误差。
5）为了避免微生物游动而影响计数，可用接种环加一环氯化汞（HgCl2）饱和溶液以杀死微生物。
四、实验作业
按下表记录实验结果。
动物名称
每滴稀释液中的虫数
每ml混合液中的虫数
状态描述
实验三培养基的制备及灭菌
实验学时：
3学时
实验类型：
验证性
实验要求：
必修
一、实验目的
1．学会玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备工作。
2．掌握培养基配制和无菌水制备的方法。
3．学会高压蒸汽灭菌技术。
二、实验器材
1．培养皿（又称平皿，直径90mm）、试管、吸管、锥形瓶、烧杯等。
2．纱布、棉花、报纸、牛皮纸。
3．pH试纸6～8.4（或pH电位计或氢离子浓度比色计）、洗液、10％HCL、10％NaOH。
4．牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂粉、蔗糖、蒸馏水。
5．高压蒸气灭菌器、烘箱、冰箱、电炉等。
三、实验内容
（一）玻璃器皿的洗刷与包装
1．洗刷玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。
培养皿、试管、锥形瓶等可先用去污粉或肥皂洗刷，然后用自来水冲洗。
吸管则先用洗液浸泡、再用水冲洗。
洗刷干净的玻璃器皿应放在烘箱中烘干。
2．包装
（1）培养皿由一底一盖组成一套，按实验所需的套数一起用牛皮纸包装。
（2）吸管应在吸端用铁丝塞入少许棉花，构成1～1.5cm长的棉塞，以防止细菌吸入口中，并避免将口中细菌吹入管内。
棉花要塞得松紧适宜，吸时既能通气，又不致使棉花滑入管内。
将塞好棉花的吸管的尖端，放在4～5cm宽的长纸条的一端，吸管与纸条约成45°交角，折叠包装纸包住尖端，用左手将吸管压紧，在桌面上向前搓转，纸条即螺旋式地包在管子外面，余下纸头折叠打结，按照实验需要，可单支包装或多支包装，以备灭菌。
培养皿和吸管也有放在特制容器内进行灭菌的。
（3）试管和锥形瓶等的管口或瓶口均需用棉花塞堵塞。
做好的棉塞，四周应紧贴管壁和瓶口，不留缝隙，以防空气中微生物会沿棉塞皱折侵入。
棉塞不宜过松或过紧，以手提棉塞，管、瓶不掉下为准。
棉塞的2/3应在管内或瓶口内，上端露出少许，以便拔塞。
在制作培养基的过程中，如不慎将棉塞沾上培养基时，应用清洁棉花重做。
待灭菌的试管和瓶子的口都要用牛皮纸包裹，并用线绳捆扎后存放在铁丝篓内（用纸包裹是为了避免灭菌时冷凝水淋湿棉塞），以备灭菌。
（二）培养基的制备
1．步骤
（1）配制溶液按培养基的配方，称取各种原料。
取适量的烧杯盛所需水量，依次将各种原料加入、溶解。
难溶的原料如蛋白胨、牛肉膏、琼脂等需加热溶解，当原料全部溶解后应加水补充因蒸发损失的水量。
加热时应不断搅拌以防原料在杯底烧焦。
（2）调整pH值用pH试纸（或pH电位计或氢离子浓度比色计）测定培养基溶液的pH值，加酸或加碱调至适宜pH值。
（3）过滤用纱布、滤纸或棉花过滤均可。
如培养基内杂质很少，可省略过滤。
（4）分装将培养基分装在试管和锥形瓶内。
要使培养基直接流入管内或瓶内，注意防止沾污上段管壁或瓶壁，并避免浸湿棉塞。
装入试管或锥形瓶的培养基量，视试管或瓶子的大小及需要而定。
一般制备斜面培养基时，每支试管装入的量约为试管高度的1/4～1/3。
（5）斜面培养基的制作将装有固体培养基的试管灭菌后，趁热搁置在木条或木棒上，使试管呈适当的斜度（切勿倾斜过小，以免培养基沾污棉塞）。
待培养基凝固后，即成斜面。
2．营养琼脂培养基
营养琼脂培养基是一种固体培养基，本实验制备后可供细菌纯种分离和细菌总数测定之用。
（1）成分
蛋白胨10g牛肉膏3g（或5g）氯化钠5g琼脂粉15～20g蒸馏水1000mL
（2）制法
1）将上列成分混合后，煮沸至琼脂粉完全溶解。
2）用蒸馏水补充因蒸发而损失的水量。
3）调整溶液的pH值为7.2～7.4。
4）趁热分装于试管中，每管约装7～10mL。
如装在锥形瓶中，则250mL的锥形瓶，以装100mL左右为宜。
管口或瓶口均以棉花塞住。
5）置高压蒸汽灭菌器中，以121.3℃（1kg/cm2，0.11MPa）灭菌15～20min，然后贮存于冷暗处备用。
（三）无菌水的制备
在试管或瓶内先盛以适量的自来水（管口或瓶口用塞子塞好，并用牛皮纸扎紧），使其灭菌后，其水量恰为9mL（用管）或99mL（用瓶）。
也可以先将管或瓶灭菌，再用灭菌的吸管（所谓无菌吸管）取灭菌的自来水9mL或99mL加入管或瓶中。
无菌水常用来稀释水样。
（四）高压蒸汽灭菌
上面所准备好的一切玻璃器皿、培养基等均需进行灭菌。
本实验用高压蒸汽灭菌器灭菌，其操作和注意事项如下：
1．加水需先加水至器内底层隔板以下1/3处。
有加水口的，水由加水口加入，由玻璃管看水位至止水线即停止加水。
2．把需要灭菌的器物放入灭菌器内，关严灭菌器盖，勿使漏气。
3．打开出气口。
4．打开电源开关，开始加热。
5．器内水沸腾以后，蒸汽逐渐驱除器内原有的冷空气。
如灭菌器装有温度计，当指针指到读数100℃时，证明器内已经充满蒸汽、可以关闭出气口。
如没有温度计，则当出气口排出的蒸汽相当猛烈时，可以认为灭菌器内冷空气已经全部被蒸汽驱尽，可以关闭出气口。
这一点应持别注意，因为如果冷空气没有排尽，器内虽然达到了一定的压力，但并不会达到相应所需的温度。
6．关闭出气口后，器内蒸汽将不断增多，压力和温度随着升高。
当蒸汽压达到所需的压力时，即为灭菌开始时间，这时要调节火力大小，以维持所需的压力，灭菌时间的长短由灭菌物品决定．玻璃器皿、无菌水、营养琼脂培养基可用121.3℃（1kg/cm2,0.11MPa）的压力灭菌20min，含糖的培养基用115℃（0.7kg/cm2,0.07MPa）的压力20min。
7．灭菌时间达到后，停止加热。
8．待压力指针降到“0”时，打开出气口。
如过早打开，管内和瓶内的培养基会因压力骤降，而温度并不同时很快下降，以致培养基翻腾，沾污棉塞。
9．揭开器盖，取出灭菌的物品，将器内剩余的水放掉。
10．待已灭菌的物品冷却后，置阴凉处备用。
四、实验作业
1．培养基是根据什么原理配制的?
营养琼脂培养基中的成分各起什么作用?
2．为什么湿热灭菌比干热灭菌优越?
实验四不同类型水体中细菌总数的检测及水质量评价
实验学时：
4学时
实验类型：
综合性
实验要求：
必修
水中细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈正相关。
因此，它是评价水质污染程度的重要指标之一。
本试验采用标准平皿法对水样中细菌作计数，这是测定水中好氧和兼性厌氧异养细菌密度的方法。
由于细菌在水体中能以单独个体、成对、链状、成簇或成团的形式存在，此外没有单独的一种培养基或其一环境条件能满足—个水样中所有细菌的生理要求，所以由此法所得的菌落数实际上要低于被测水样中真正存在的活细菌的数目。
细菌总数是指1mL水样在营养琼脂培养基中，37℃24h培养后所生长的菌落数。
一般规定，1mL自来水的总菌数不得超过100个。
水污染的细菌学指标：
①饮用水卫生标准
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