蔬菜中叶绿素的提取和检测_精品文档.pdf

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1994-2010ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreserved.http:

/河北农业科学,2009,13

（1）:

166-168JournalofHebeiAgriculturalSciences编辑李布青蔬菜中叶绿素的提取和检测王宁芳（青海师范大学,青海西宁810008）摘要:

采用薄层层析法提取新鲜蔬菜中的叶绿素,测定其吸收光谱。

结果表明,薄层层析法是一种简单、高效、快速的提取蔬菜中叶绿素的微量分析方法。

关键词:

薄层层析法;蔬菜;叶绿素;吸收光谱中图分类号:

Q2331文献标识码:

A文章编号:

100821631（2009）0120166203ExtractionandDetectionofChlorophyllfromVegetablesWANGNing2fang（QinghaiNormalUniversity,Xining810008,China）Abstract:

Chlorophyllinfreshvegetableswereextractedbythinlayerchromatography（TLC）method,andtheabsorptionspectrawasmeasured1TheresultsshowedthatTLCwasaeasy,higheffectiveandrapidmicroanalysismethodinextractingthechlorophyllfromvegetables1Keywords:

Thinlayerchromatography;Vegetables;Chlorophyll;Absorptionspectra收稿日期:

2008210228作者简介:

王宁芳（1964-）,女,陕西华县人,副教授,主要从事有机合成与分析教学与科研工作。

叶绿素广泛存在于果蔬等绿色植物组织中,并在植物细胞中与蛋白质结合成叶绿体。

它的存在确保了植物能够进行光合作用,即在太阳光的作用下,植物将吸收的二氧化碳和水变成糖类并释放出氧气的过程。

6CO2+6H2OC6H12O6+6O2绿色植物的叶片是进行光合作用的主体,而叶绿体是光合作用的重要细胞器,在进行光合作用时,叶绿体的光合色素将光能转变成化学能,提供了植物生长所必需的养分。

作者采用薄层层析法提取新鲜蔬菜中的叶绿素,并测定了其吸收光谱。

1材料与方法111试验材料试验蔬菜为新鲜的菠菜。

试验仪器有岛津UV23000型双波长分光光度计、研钵和层析缸。

试剂有碳酸钙（分析纯）、丙酮（分析纯）、乙醇（分析纯）和硅胶G。

112试验方法11211薄层层析板的制备称取5g硅胶G粉,置烧杯（100mL）中,加适量去离子水,搅拌均匀后,平铺在玻璃板（5cm30cm）上,尽量使薄层厚度均匀,然后平放晾干。

11212叶绿素的提取取新鲜菠菜依次用自来水和去离子水洗净,晾干。

称取去梗叶片4g,剪碎,放入研钵。

加少量碳酸钙和干净的石英砂及10mL去离子水,研成细浆。

取5mL细浆置于大试管（50mL）中,加丙酮20mL,搅拌使色素溶解。

放置片刻使残渣沉于试管底部,滤去残渣,得到深绿色叶绿素丙酮溶液。

11213叶绿体色素的分离取叶绿素丙酮溶液5mL于分液漏斗中,加入乙醚3mL进行萃取,得到叶绿素乙醚提取液。

取制备好的薄层层析板,在暗处于距离薄板一端2cm处以画线作为起点,用毛细管点样,将试样点成1条线。

待第1次点样干后再点1次,重复35次。

色素的展开剂采用乙醚2石油醚2丙酮2丙醇（体积比为157152150112）。

将展开剂注入层析缸中,摇匀,然后将薄层直立于缸中,将层析缸盖好放在暗处,展开3040min,待展开剂的前沿距薄板顶部12cm时,取出薄板。

11214吸收光谱测定将展开后的层析板从层析缸中取出,分别将各个展开的色带从玻璃板上刮下来,置于4个离心试管中,各加入适量乙醚,进行离心分离。

取上清液,用分光光度计测定其在360700nm波长范围的吸收光谱。

2结果与分析211叶绿体色素的分离在展开后的层析板上（图1）可清晰地看出,叶绿体色素在薄板上被分离形成4条色带,从上到下依次为胡萝卜素（橙黄色）、叶黄素（黄色）、叶绿素a（蓝绿图1叶绿体色素的薄层层析图谱Fig11TheTLCdiagramofchloroplastpigment1994-2010ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreserved.http:

/第1期王宁芳:

蔬菜中叶绿素的提取和检测色）和叶绿素b（黄绿色）。

212叶绿体色素的吸收光谱经薄层层析分别分离后,得到叶绿体色素在360700nm波长范围的吸收光谱（图2）。

图2叶绿体色素的吸收光谱Fig12Theabsorptionspectraofchloroplastpigment3小结311叶绿体色素的组成叶绿体色素的组成见图3,叶绿素a和叶绿素b的结构式见图4。

叶绿体色素叶绿素叶绿素a:

蓝绿色叶绿素b:

黄绿素主要吸收红光和蓝紫光类胡萝卜素叶黄素:

橙黄色胡萝卜素:

黄色主要吸收蓝紫光图3叶绿体的组成1Fig13Thecompositionofchloroplast图4叶绿素a和叶绿素b的结构式1Fig14Thestructuralformulaofchlorophyllaandb叶绿素a（R=CH3）;叶绿素b（R=CHO）312叶绿体色素的提取和检测原理31211叶绿体色素的提取叶绿体色素提取的原理是:

由于光合色素位于叶绿体的囊体上,要把它提取出来必须破坏叶表皮、细胞壁和细胞膜以及叶绿体的双层膜,所以要剪碎后加二氧化硅研磨,以便使色素充分被提取。

叶绿体色素不溶于水,但可溶于有机溶剂,所以要加入丙酮使色素溶解,来提取各种色素。

另外还要加入碳酸钙以保护叶绿体中的色素,原因是碳酸钙可以调节液体的pH值,防止叶绿素被破坏。

叶绿体中的色素溶解于有机溶剂,如酒精或丙酮（相似相溶）,形成色素液。

31212叶绿体中色素的分离叶绿体中色素分离的原理与4种色素在层析液中的溶解度有关。

层析液是1种脂溶性很强的有机溶剂,由于4种色素的化学组成和结构不同,因此每1种色素分子在层析液分子的作用下,克服色素分子之间的引力,向层析液中扩散的速度不同,即在层析液中的溶解度不同,因而4种色素的扩散速度就不同。

其中胡萝卜素在层析液中的溶解度最高,扩散速度最快,其次是叶黄素和叶绿素a,叶绿素b溶解度最低,扩散得最慢。

经过一段时间的展开后,样品中各物质就彼此分开,最后形成互相分离的斑点。

测定不同斑点处物质的吸收光谱即可对其进行定性、定量分析。

313吸收光谱比对经薄层层析分别分离后的叶绿体色素的光谱吸收曲线中,叶绿素a和叶绿素b有2个强吸收带,一个在波长400460nm的蓝紫光区;另一个在波长650680nm的红光区,标准图谱见图5。

菠菜叶绿体色素的吸收光谱有2个强吸收带,一个在400460nm的蓝紫光区,另一个在630680nm的红光区,结果与标准图谱基本吻合,表明采用薄层层析法可以较好地提取和分离新鲜蔬菜中的叶绿体色素。

314讨论上述结果表明,应用薄层层析法可以简单、快速、高效地提取和分离天然色素。

但由于叶绿素很不稳定,光、酸、碱、氧和氧化剂等都会使其分解。

因此,在整个实验过程中,应在中性条件和暗处（或弱光）进行,7611994-2010ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreserved.http:

/河北农业科学2009年各操作步骤应在尽可能短的时间内完成。

另外,从菠菜中提取叶绿素时还应加入碳酸钙,以防止失去镁,并中和植物细胞中的酸。

图5叶绿素a和b的标准吸收光谱图4Fig15Thestandardabsorptionspectraofchloroplastaandb参考文献:

1毛宋平,樊耀亭1综合化学实验M1郑州:

郑州大学出版社,200212南京大学无机及分析化学实验编写组1无机及分析化学实验M1北京:

高等教育出版社,200613杨善元1叶绿素的提取纯化方法J.化学通报,1979,（3）:

36-3714彭运生,刘恩1关于提取叶绿素方法的比较研究J.北京农业大学学报,1992,18（3）:

247-25015池春玉,丁国华,徐启江1“叶绿素的提取和分离”实验的一种方法J.生物学通报,2000,35

（2）:

6316黄伟,张梅1叶绿素提取和分离实验的改进J.生物学通报,2003,38

（2）:

5617白丽明,李莉1菠菜叶绿素的提取和稳定性研究J.齐齐哈尔师范学院学报（自然科学版）,1997,17（3）:

37-4018张淑兰1叶绿体色素的提取和分离实验的拓展J.生物学杂志,1996,13

（2）:

431（上接第161页）为适应学生综合能力和创新素质培养的需要,考试作为教学效果评价的1种基本方式,也要进行相应的改革。

对于植物病原细菌学的考试,避免传统教学1份考卷定优劣的做法,在突出实验、实践教学的前提下,将实验课成绩占期末总成绩的比例大大提高,使实验课成绩占学生期末总成绩的50%。

这使学生们对实验课的热情高涨。

通过这种改革方式,学生们的动手能力和创新能力均得到了较大提高,同时也使“死记硬背得高分”成为历史。

4结语在当今大力发展素质教育的阶段,社会对本科毕业生的综合能力有了更高的要求。

为了适应社会需求,植物病原细菌学课程改革势在必行,这也是面临的非常艰巨的任务,有待于在教学实践中不断调整和改进。

参考文献:

1邱天俊,章松柏,郭灵芳,等1植保专业植病学科教学、实践体系改革的探索研究J.科技创新导报,2007,（33）:

239-24012景岚,周洪友,胡俊,等1普通植物病理学教学研究及探索J.内蒙古农业大学学报（社会科学版）,2008,10

（1）:

192-19313韦继光,袁高庆,赖传雅,等1普通植物病理学的教学内容需紧跟学科发展步伐J.广西农业生物科学,2007,26（增刊）:

188-19014马宗斌,王群,王志强,等1作物学通论课程教学改革的实践探索J.安徽农业科学,2008,36（11）:

4795-4796,480415黄辉,吕光俊1水产动物疾病学实验教学改革的探索与实践J.安徽农业科学,2008,36（19）:

8394-83961（上接第165页）总之,化学实验室产生的废液虽然数量少,但种类多,为害大,应引起高度的重视。

因此,对所有有毒、有害的废液都必须进行有效处理后方能排放,以防止污染环境,危害人们的身体健康。

参考文献:

1吴志宏1实验室常见有毒物质废弃液的危害及处理J.科技情报开发与经济,2001,11（5）:

9012陈炳辰,王成功,仲崇波1氰化物的危害及处理方法J.金属矿山,2001,（5）:

46-4913段秀琴1实验室几种废弃物的危害及处理J.甘肃环境研究与监测,1995,

（1）:

50-5114杜秀芳,李和敏1几种高校化学实验室废液的处理方法J.中国卫生检验杂志,2007,17（3）:

54815周国泰,吕海燕,张海峰1危险化学品安全技术全书M.北京:

化学工业出版社,19971861