紫杉醇脂质体与注射液家兔体内药动学行为比较.docx

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紫杉醇脂质体与注射液家兔体内药动学行为比较

紫杉醇脂质体与注射液家兔体内药动学行为比较

【摘要】目的比较紫杉醇脂质体（paclitaxelliposome，LPAC）和注射液（paclitaxelinjection，IPAC）在家兔体内的药动学行为。

方式12只家兔随机分为两组，别离从耳缘静脉单剂量（12mg·kg1）注射LPAC和IPAC，采纳HPLC法测定各时刻点血药浓度，用和软件处置和分析数据。

结果两种制剂的血药质量浓度时刻曲线均符合二房室模型，要紧药动学参数t1/2α别离为（±）、（±）h；t1/2β别离为（±）、（±）h；Vd别离为（±）、（±）L；CL别离为（±）、（±）L·h-1；K10别离为（±）、（±）h-1；K12别离为（±）、（±）h-1；K21别离为（±）、（±）h-1；AUC0→24别离为（±）、（±）mg·h·L-1；AUC0→∞别离为（±）、（±）mg·h·L-1；两种制剂的t1/2α，t1/2β，Vd，CL，K10，K12，K21，AUC0→24及AUC0→∞经统计学分析后，存在极显著或显著不同。

结论LPAC与IPAC相较，在家兔体内的药动学行为有显著的不同，脂质体制剂具有长效缓和释的特点，在维持较长的体内循环时刻的同时，能够更好地浓集于靶组织，减少药物对其他脏器的毒副作用并增加疗效。

【关键词】紫杉醇脂质体药动学高效液相色谱法

　　Pharmacokineticsdifferencesbetweenpaclitaxelliposomeandinjectioninrabbitsafterintravenousinjection

　　Abstract:

ObjectiveTocomparethepharmacokineticsofpaclitaxelliposomeandpaclitaxelinjectioninrabbitsafterintravenousadministration.MethodsPaclitaxelliposomeandpaclitaxelinjectionwereintravenouslyadministratedtorabbitsatasingledosageof12mg·h-1.TheconcentrationtimedataofpaclitaxelinplasmasamplesweredeterminedbyHPLCUV,andthepharmacokineticparameterswerecalculatedandanalyzedbyandsoftware.ResultsTheconcentrationtimedataofpaclitaxelliposomeandpaclitaxelinjectionwereallfittedtotwocompartmentmodel,andthemainpharmacokineticparametersforpaclitaxelliposomeandpaclitaxelinjectionwererespectivelyasfollows:

t1/2αwere（±）and（±）h；t1/2βwere（±）and（±）h；Vdwere（±）and（±）L；CLwere（±）and（±）L·h-1；K10were（±）and（±）h-1；K12were（±）and（±）h-1；K21were（±）and（±）h-1；AUC0→24were（±）and（±）mg·h·L-1；AUC0→∞were（±）and（±）mg·h·L-1.Thereweresignificantlydifferencesint1/2α，t1/2β，Vd，CL，K10，K12，K21，AUC0→24andAUC0→∞betweenpaclitaxelliposomeandpaclitaxelinjection.ConclusionPaclitaxelliposomehashigherefficacy,longerreleasetime,highertargettissueconcentrationandlowersideeffectthanpaclitaxelinjection.

　　Keywords:

paclitaxel；liposome；pharmacokinetics；HPLC

　　紫杉醇（paclitaxel）是具有抗癌机制的植物药，可用于对常规化疗药物耐药的转移性卵巢癌和乳腺癌的医治［1］。

由于紫杉醇水溶性极差，因此目前国内外上市的注射剂均以聚氧乙基代蓖麻油（cremophorEL）与无水乙醇作为混合溶媒，溶媒中的成份在体内降解时会刺激机体释放组胺，引发严峻的过敏反映，尽管医治前采取了预防方法，但仍有超过41％的病人发生程度不等的过敏反映；而紫杉醇本身亦有神经和血液等系统毒性（如骨髓抑制、白细胞减少、血小板降低等），常致使临床医治难以进行。

因此，改良现有紫杉醇制剂的剂型，增加其水溶性，幸免复合溶媒带来的严峻不良反映已迫在眉睫。

国内外对紫杉醇新剂型的研究已取得一些具有应用价值的功效，其中以脂质体为载体,将其制成靶向制剂已在国内上市，该制剂在维持了与市售紫杉醇注射液相同的抗肿瘤活性的同时明显降低了药物的毒性，提高了机体耐受性。

目前关于紫杉醇脂质体制剂药动学研究的报导尚不多，本实验成立了简便灵敏的紫杉醇血药浓度HPLC检测方式，对紫杉醇脂质体（paclitaxelliposome，LPAC）和注射液（paclitaxelinjection，IPAC）在家兔体内的药动学规律进行了比较研究。

　　1实验材料

　　药品、试剂与仪器

　　注射用紫杉醇脂质体（批号：

070307，南京思科药业生产）；紫杉醇注射液（批号：

0704161，北京四环医药科技股分）；紫杉醇对照品（中国药品生物制品检定所，批号：

1534200202）；地西泮对照品（中国药品生物制品检定所，批号：

171225200302）；甲醇（一级色谱纯，天津市四友生物医学技术）；叔丁基甲醚（色谱纯，TEDIACOMPANY，.）；实验用水为灭菌注射用水。

　　高效液相色谱系统（包括1525二元泵，717自动进样器，2487紫外检测器，Breeze色谱工作站，美国Waters公司）；QT1型旋涡混合器（上海琪特分析仪器公司）；FA1604上皿电子天平（上海天平仪器厂）；Centrifuge5415D型EPPENDOF离心机（基因）；电热恒温水浴锅（天津中环实验电炉公司）；CQ超声波清洗机（上海医用分析仪器厂）。

　　动物

　　健康家兔12只，雌雄各半，体质量～kg，由中山大学实验动物中心提供，动物合格证号粤监证字2005A064。

　　2方式与结果

　　分组与给药

　　用两组制剂单周期设计实验。

将12只家兔随机分为2组，雌雄各半，一侧耳缘静脉给药，第一组给予LPAC，第二组给予IPAC，剂量均为12mg/kg；给药前12h开始禁食，自由饮水。

　　血样搜集及预处置

　　两组均于给药后、、、一、二、4、六、八、1二、1六、24h别离在对侧耳缘静脉采血1～2mL，置肝素抗凝管中，3000r/min离心15min，取血浆。

　　周密吸取900μL血浆样品置具塞离心管中，加地西泮（内标）溶液100μL（浓度为20mg/L），旋涡混匀后，加叔丁基甲醚3mL，旋涡振荡5min，3000r/min离心10min，移取上清液至另一具塞试管，残液再加叔丁基甲醚3mL同法提取2次，归并3次上清液，35℃水浴中以氮气流吹干，残渣用流动相1mL溶解，涡旋助溶，10000r/min离心10min，取上清液50μL进样。

　　HPLC方式学考察

　　色谱条件

　　色谱柱：

大连依利特C18色谱柱（mm×150mm，5μm）；柱温：

室温；紫外检测波长：

227nm；灵敏度：

；流量：

mL/min；流动相：

甲醇水（体积比65∶35）。

　　标准曲线制备

　　用空白家兔血浆别离加紫杉醇对照品溶液，配制浓度为、、、、、、mg/L的血浆标样，并均已加地西泮溶液（20mg/L）100μL，按上述“”处置血样并进样50μL，每一个浓度作6个样品，测定后计算其峰面积比值（紫杉醇/地西泮），并求出6次峰面积比值（A），以A平均值对血浆质量浓度（ρ）进行回归分析，回归方程为A＝ρ－（r＝），结果说明紫杉醇在～mg/L范围内线性关系良好，最低定量限为mg/L。

　　专属性考察

　　紫杉醇与内标和血浆杂质均分离完全，峰形良好，紫杉醇与内标保留时刻别离为min和min，色谱图见图1。

　　图1紫杉醇和内标地西泮色谱图（略）

　　HPLCchromatogramsofpaclitaxelanddiazepam

　　周密度和回收率

　　紫杉醇低、中、高3个浓度（，，mg/L）的提取回收率见表1。

在相同的色谱条件下，进行日内和日间周密度测定，结果见表2。

　　表1回收率实验结果（n=5）（略）

　　Recoverytest（n=5）

　　表2周密度和相对回收率实验结果（n=5）（略）

　　Precisionandrelativerecoveryrateofdocetaxelinplasma

　　血药浓度时刻曲线

　　各时刻点血药浓度曲线经软件进行拟合分析，比较拟合优度值和AIC值，紫杉醇脂质体和一般注射液均符合二房室模型，见图2。

　　图2家兔单剂量静脉注射紫杉醇注射液和脂质体制剂后的血浆中药物浓度时刻曲线（略）

　　Plasmaconcentrationtimecurvesofpaclitaxelafterasingledoseinjectioninrabbits

　　药动学参数

　　静脉注射两种制剂后的要紧药动学参数见表3。

　　表3家兔单剂量（12mg·kg-1）注射紫杉醇注射液和脂质体制剂后的药动学参数（n＝6）（略）

　　PharmacokineticparametersofLPACandIPACafterasingleintravenousadministrationdoseof12mg·kg-1torabbits（n＝6）

　　**P<，*P<

　　表3中的参数用SPSSforWindows统计软件行t查验统计学分析，结果可见，与IPAC相较，家兔单剂量静注LPAC后，其t1/2α,t1/2β,Vd，CL，AUC0→24和AUC0→∞等药动学参数均发生了显著或极显著改变，这提示紫杉醇脂质体改变了紫杉醇的体内药动学特性，药物体内散布容积减少，清除率下降，药物排除半衰期延长，血药浓度时刻曲线下面积显著增大。

　　3讨论

　　血浆样品中紫杉醇的浓度测定，文献报导多采纳先提取再测定的方式，提取溶剂有的采纳无水乙醚［2］、有的采纳叔丁基甲醚［3，4］；内标物质有的采纳炔诺酮［2］，有的用多西紫杉醇［4］或地西泮［3,5］，流动相多采纳甲醇、乙腈及水按不同比例组成［2-4］。

本实验经比较提取率、峰型、保留时刻、分离度等指标，最终确信以地西泮为内标，用叔丁基甲醚提取3次，以甲醇水（体积比65∶35）为流动相，方式学研究说明，此法简即可行，结果靠得住。

　　目前国内报导紫杉醇动物及人体内药动学