丹参酮ⅡA对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用及机制.docx

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丹参酮ⅡA对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用及机制

丹参酮UA对脑缺血再灌注损伤大鼠的

保护作用及机制

（作者：

单位：

邮编：

）

作者：

李浩，刘开祥，俸军林，曾爱源，唐永刚

【摘要】目的探讨丹参酮HA（TanIIA）对缺血再灌注损伤大

鼠保护作用及对额顶部皮质中性粒细胞浸润、自由基含量、能量代谢

的影响。

方法将大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、TanIA低

剂量治疗组和TanIA高剂量治疗组，线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型。

TanIA高、低剂量治疗组于术前连续灌胃给药3d，1次

/d。

用生化法观察缺血90min再灌注24h大鼠额顶部皮质髓过氧化物酶（MPO活性、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA含量、三磷酸腺苷（ATP含量及脑含水量变化，并进行2，3，5-三苯基氯化四氮唑（TTC染色检测脑梗塞体积。

结果TanIA治疗组脑梗塞体积较缺血再灌注组减小，高、低剂量组之间差异亦具有显著性

（P0.05）;与缺血再灌注组比较，TanIA治疗组显著降低MPOS性、MDA含量，增加SOD、ATP含量，降低脑组织含水量，高、低剂量组之间差异亦具有显著性（P0.05）。

结论TanIA对缺血再灌注脑损伤具有保护作用，其机制可能与减轻缺血再灌注损伤炎症反应，减轻氧化性损伤和改善能量代谢有关。

【关键词】缺血再灌注；髓过氧化物酶；自由基；三磷酸腺苷；

丹参酮H

Abstract:

ObjectiveTostudytheeffectofTanshinoneIIA

（TanIA）onneutrophilsinfiltrationandthecontentsoffree

radicalandATPinischemicfrontalandparietalcortexofcerebralischemiareperfusion（l/R）rats.MethodsInthis

experiment,ratswererandomlydividedinto4groups,namelyshamoperatedgroup,I/Rgroup,lowdoseTanIAtreatedgroupandhighdoseTanIAtreatedgroup.Thefocalmiddlecerebralarteryocclusion（MCAO）modelwasmadebysuture-occluded

method.RatswerepretreatedwithTanIAigfor3d,respectively.After90minMCAObllowing24hofreperfusion,

theMPOactivity,thecontentsofSODandMDAinischemicfrontalandparietalcortexwereinvestigated.TTCstainingwas

usedtocalculatethecerebralinfarctvolume.ResultsComparedwithI/Rgroup,cerebralinfarctionvolumeinlowdoseTanI

AtreatedgroupandhighdoseTanIAtreatedgroupdecreasedinadose-dependentmanner（allP0.05）.ComparedwithI/Rgroup,lowandhighdoseTanIAtreatedgroupsdose-dependentlyreducedMPOactivity,thecontentofMDAandbrainwatercontent,

increasedtheactivityofSODandthecontentofATP.

ConclusionTanIIAmayaueviatecerebralischemia-reperfusion

injurybydecreasingtheinflammationreaction,freeradicalsandthedisbanlanceofenergymetabolism.

Keywords:

Ischemia-reperfusion;Myeloperoxidase;Free

radical;ATP;TanshinoneIA

丹参SalviamiltorrhizaBge为唇形科多年生草本植物，是我国传

统具有活血化淤作用的中药，已被广泛用于心脑血管疾病的治疗，但

其作用机制尚不十分清楚。

丹参酮（Tanshinone）是丹参的有效活性组分，其中丹参酮IA（TanshinoneIA,TanIA）为丹参酮中含量最高的活性成分。

本实验采用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，研究

丹参酮IA对大鼠脑缺血再灌注损伤缺血区额顶部皮质中性粒细胞浸润、自由基含量、能量代谢、脑组织含水量及梗塞体积变化的影响，探讨其对脑再灌注损伤保护作用机制。

1材料与方法

1.1药品与试剂

TanIA由提供上海第一生化药业有限公司提供，纯度85%。

髓

过氧化物酶（MPO,丙二醛（MDA和超氧化物歧化酶（SOD试剂盒均购于南京建成生物工程研究所。

TTC购自中国医药集团上海化学试剂公司。

1.2动物分组及给药方法

健康Wistar大鼠，雄性，清洁级，共100只，质量（250士30）g（广西医科大学动物实验中心提供）。

按随机分组原则分成假手术组

（25只）、缺血再灌注组（25只）、TanIIA低剂量治疗组（25只）及TanIA高剂量治疗组（25只）。

Tan低剂量治疗组（15mg/kg）和高剂量治疗组（30mg/kg）均于术前连续灌胃给药3d,1次/d,假手术组和缺血再灌注组给予等量的生理盐水灌胃。

第3天给药后1

h建立缺血90min再灌注24h动物模型。

1.3动物模型的建立

参照Longa等［1］的方法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。

采用颈外动脉插入线栓法，各组均进行左侧大脑中动脉栓塞。

线栓采用石蜡线栓。

线栓直径约0.27mm,插入深度约18mm,此时线栓头位于大脑中动脉起始部。

缺血90min时，抽提线栓实现再灌注。

神经功能缺陷评分：

按照Longa等［1］评分标准，各组分别在再灌注24h进行评分。

0分：

正常，无神经学征象；1分：

动物不能完全神展右前肢；2分：

动物右侧肢体瘫痪，行走时向右侧转圈，出现追尾现象；3分：

动物行走向右侧跌倒，或动物不能站立或动物打滚；4

分：

无自发活动，有意识障碍。

神经功能缺陷评分在1~3分为模型

成功。

1.4MPO活性的测定

再灌注24h，将大鼠开颅取脑，置于4C冰箱5min，在冰浴下取左侧距离嗅球尖端7〜11mm之间的额顶部皮质，以试剂盒提供的匀浆介质制成脑组织匀浆。

严格按试剂盒说明书步骤要求操作，计算

出MPO舌力单位。

1.5MDA和SOD勺测定

再灌注24h,将大鼠开颅取脑，置于4C冰箱5min，在冰浴下取左侧距离嗅球尖端7〜11mm之间的额顶部皮质，以试剂盒提供的匀浆介质制成脑组织匀浆（步骤和方法同上）。

严格按试剂盒说明书步骤要求操作，计算出MDA和SOD含量。

1.6三磷酸腺苷（ATP含量测定

再灌注24h，将大鼠开颅取脑，置于4C冰箱5min，在冰浴下取左侧距离嗅球尖端7〜11mm之间的额顶部皮质，迅速加入乙腈，混匀，冰浴离心脱蛋白，离心后取上清液水系滤膜过滤后，-86C保

存。

用高效液相测定ATP含量。

1.7脑含水量检测

再灌注24h，各组随机取5只大鼠，断头取脑后，快速称取左右大脑半球湿重，置110〜115C烤箱内烤至恒重，再分别称其干重，用（湿重-干重）/湿重的百分比，作为衡量脑含水量指标。

1.8TTC染色

再灌注24h，将各组另外5只大鼠深麻后开颅取脑。

将鼠脑置于

—4C冰箱20min后，将其切成5等份冠状位切片，置于2%TTC溶液中，水浴、多聚甲醛液固定。

用计算机病理图像分析仪及梯形法计算出梗塞灶体积，各脑片梗死灶体积之和即为梗塞体积。

左侧大脑半球梗死灶区呈白色，主要为额顶部皮质和尾壳核，正常组织呈红色。

部分组织表现为由白色向红色过度区。

1.9统计学方法

数据处理采用SPSS11.5统计软件进行运算，结果以士s表示，组间差异显著性检验米用方差分析。

2结果

2.1TANIIA对MPOS性的影响

结果见表1。

假手术组MPO活性呈低水平。

缺血再灌注组缺血侧MPO舌性较假手术组明显升高（P0.05）;TANIA高、低剂量治疗组MPOS性较缺血再灌注组明显降低（均P0.05）;高、低剂量组之间差异亦具有显著性（P0.05）。

表1TANIA对MPOMDASOD,ATP含量，脑含水量及脑梗塞体积影响（略）

2.2TanIA对MDASOD含量的影响

缺血再灌注组缺血侧额顶部皮质SOD含量下降，MDA含量升高，与假手术组比较，差异具有显著性（P0.05）。

TanIA治疗组可提高额顶部皮质SOD含量，降低MDA含量，与缺血再灌注组相比较，差异具有显著性（P0.05）;高、低剂量组之间差异亦具有显著性（P0.05）。

见表1。

2.3TanIA对ATP含量的影响

缺血再灌注组缺血侧额顶部皮质ATP含量下降，与假手术组比较，差异具有显著性（P0.05）;TanIA治疗组ATP含量升高，与缺血再灌注组相比较，差异具有显著性（P0.05），高、低剂量组之间差异亦具有显著性（P0.05）。

见表1。

2.4TanIA对脑水肿的影响

缺血再灌注组缺血侧脑组织含水量较假手术组明显升高，差异具有显著性（P0.05）;TanIIA治疗组降低脑组织含水量，与缺血再灌注组相比差异有显著性（P0.05），高、低剂量组之间差异亦具有显著性（P0.05）。

见表1。

2.5TanIA对脑梗塞体积的影响

TTC染色后，缺血再灌注24h左侧大脑半球梗塞灶区呈白色，主要为额顶部皮质和尾壳核，正常组织呈红色。

部分组织表现为由白色向红色过度区。

TTC染色形态学观察显示，用石蜡线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，可使大脑中动脉供血区出现恒定的、复制性

良好的梗塞灶（图1）。

TanIA高、低剂量组梗死体积较缺血再灌注组显著减小（P0.05）;高、低剂量组之间差异亦具有显著性（P0.05）

3讨论

何丽娜等［2］研究发现，丹参酮对原代大鼠神经细胞缺血性损伤有保护作用。

本研究结果也证实，脑缺血再灌注损伤给予TanIA治疗,可明显减少减轻再灌注损伤脑水肿及梗塞体积，对缺血脑组织有保护

作用，高剂量GBE勺保护效果更显著。

MPO主要存在于中性粒细胞的噬天青颗粒中。

MPC活性反映中性粒细胞在脑组织中浸润程度。

我们前期研究已证实，脑缺血再灌注损伤出现了中性粒细胞参与为标志的炎症反应过程，减轻脑缺血再灌注损伤后炎症反应对缺血脑组织有保护作用［3］。

本研究结果提示，脑缺血再灌注损伤给予TanIA腹腔注射治疗，可明显减少缺血再灌注后MPC活性，减少中性粒细胞的浸润，对缺血再灌注损伤炎症反应

有抑制作用。

胡霞敏等［4］预防性用药给予缺血再灌注损伤大鼠Tan

HA治疗，发现TanII