两性霉素B粗制品的结晶提纯工艺研究精.docx

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两性霉素B粗制品的结晶提纯工艺研究精

　Vol.15,No.12精细与专用化学品第15卷第12期FineandSpecialtyChemicals2007年6月21日

两性霉素B粗制品的结晶提纯工艺研究

涂志英31　陈丽辉2　邵　伟1

（1.三峡大学化学与生命科学学院,湖北宜昌443002;2.华东理工大学化学工程研究所,上海200237

摘　要:

以两性霉素B粗制品为原料,以产品中未知杂质含量、效价及质量收率为考察对象,探索了两性霉素B结晶的操作条件。

实验发现,以20%N,N2二甲基甲酰胺2乙醇（75%水溶液为溶剂体系、pH为5~6、75%乙醇水溶液加入量为3~4倍滤液体积时可得到杂质含量低、。

关键词:

两性霉素B;结晶;提纯;效价

StudyonAdsorption2ofAmphotericinB1Li2hui2,SHAOWei1

istryLifeScience,SanxiaUniversity,Yichang443000,China;

2.ChemicalCenter,EastChinaUniversityofScienceandTechnology,Shanghai200237,China

Abstract:

Takingthecontentofunknown2impurityinproduct,itspotencyandyieldastheobjectforinvestigation,thecrystallizationprocessofamphotericinBwasstudied.TheexperimentresultsshowedthatthetotalcontentoftheimpuritiesinamphotericinBproducedbythisprocesscouldbedecreased,anditspotencyandyieldwashigherwhentheaqueousso2lutioncomposedof20%DMF2ethanol（75%wasusedassolventsystemandpHvaluewasattherangeof5~6andthevolumeofaqueous75%ethanolsolutionin3~4timesasmuchasthatoffiltratewasadded.

Keywords:

amphotericinB;crystallization;purification;potency

　　两性霉素B（AmphotericinB是由结节链霉菌（S.nodosus产生的大分子多烯类抗真菌抗生素〔1〕,它对念珠菌病、隐球菌病、组织胞浆菌病、球孢子菌病、副球孢子菌病、青霉菌病等均有很强的抗菌活性,为抗深部真菌感染的优良药物,目前尚无其他适当的可替代药〔2〕。

虽然我国两性霉素B原料药的生产已达到国际水平,市场需求年均增长率也已达10%,但因传统纯化工艺中仍存在诸多问题,特别是未知杂质含量高又难以去除,且回收率极低（到四次精制收率<10%,这在很大程度上制约了其产量、增加了其成本。

结晶是制备纯物质的有效方法〔3~4〕,两性霉素B现在常用的纯化工艺主要是通过结晶方法进行的。

本研究以两性霉素B粗制品为原料,以产品中未知杂质（以下称“有关物质”含量、效价及质量收率为考察对象,对两性霉素B结晶的基本操作条件进行研究,以期为两性霉素B结晶纯化工艺的进一步研究提供理论依据。

1　实验材料

两性霉素B对照品和两性霉素B原料（粗制品均为上海新先锋药业有限公司产品;N,N2二甲基甲酰胺,色谱纯甲醇HPLC,二甲亚砜。

2　实验方法

（1溶解　精密称取一定质量的两性霉素B原料置于三口烧瓶中,按效价总亿1∶10（总亿/v加入二甲基甲酰胺（DMF,室温下搅成悬浮液,加入柠檬酸（m

两性霉素B

∶m

柠檬酸

=1∶1185,并继续搅拌使其基本溶解。

・

8

・

3收稿日期:

2007204210

　作者简介:

涂志英（19732,女,硕士,讲师,从事生物分离工程研究。

　2007年6月21日涂志英,等:

两性霉素B粗制品的结晶提纯工艺研究

（2活性炭吸附去热源及脱色　加入溶液总体

积1%的活性炭（m/v（活性炭须经200℃烘烤

2h,搅拌约15min,于铺有硅藻土的布氏漏斗中过

滤,滤掉活性炭及未溶物质,得滤液。

（3结晶　在上述所得滤液中加入滤液一定体

积倍数的适当的混合溶剂,搅拌,三乙胺乙醇水溶液

调节pH值到一定值,继续搅拌10min后,于8~

10℃冷却6h,抽滤,滤饼即为两性霉素B产品湿品。

（4干燥　将所得两性霉素B湿品于50℃、真

空度0106~0109MPa下干燥4h以上。

3　实验结果与讨论

考虑到两性霉素B易溶于酸性DMF,不溶于

水、低级醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、

实验选择混合溶剂20%DMF2乙

20%DMF2甲醇（2丙酮

（75%B产

品效价、,所得结果

见表1。

表1　溶剂体系对两性霉素B产品的影响

溶　剂　体　系

产品

效价

/（u/mg

有关物

质含量

/%

产品收率/%

20%DMF2乙醇（75%水溶液99671485116520%DMF2甲醇（75%水溶液101491355510520%DMF2丙酮（75%水溶液1014816157106

由表1数据可以看出,以20%DMF2乙醇（75%水溶液为溶剂体系所得产品的有关物质含量最低,产品纯度最高;20%DMF2丙酮（75%水溶液与20%DMF2甲醇（75%水溶液所得产品效价相近,都较20%DMF2乙醇（75%水溶液的稍高,但相差很小,只有1177%;20%DMF2丙酮（75%水溶液所得产品质量收率较高。

从产品纯度角度考虑,应选用20%DMF2乙醇（75%水溶液为溶剂体系。

3.1　pH值对两性霉素B产品的影响

两性霉素B的结晶过程主要由两步组成,首先是两性霉素B与柠檬酸反应生成易溶于DMF的两性霉素B柠檬酸盐,然后加入75%的乙醇水溶液降低两性霉素B的溶解度并调节溶液的pH值,使两性霉素B沉淀析出。

由此可知,pH值是两性霉素B结晶纯化过程中的一个重要操作参数。

而且两性霉素B溶液不稳定,易被酸碱所破坏,因此两性霉素B结晶液的pH值必须控制在一定范围内。

若pH值太高,两性霉素B的内酯环会被强碱所破坏,在结晶过程中副产物又与两性霉素B一同结晶析出,造成产品纯度下降;相反,若pH值太低,未到两性霉素B的等电点处,则两性霉素B沉淀不完全,最终产品收率较低,会造成较大的经济损失〔5〕。

以20%DMF2乙醇（75%水溶液为溶剂体系,调节溶液的pH值至415、515、615、715、815左右,所得结果见图1

。

图1　pH值对两性霉素B产品的影响

由图1可以看出,产品效价随pH值的增大而增大,在所考察的pH值范围内,pH为8152时效价最高,此时的有关物质含量也最低,说明在415≤pH≤815时,增大pH值有利于产品纯度及效价的提高;产品质量收率在pH为515时有最大值,这表明两性霉素B的等电点在pH为515附近,调节溶液的pH值到515左右会有最大产品收率。

建议将pH值控制在5~6之间,在此范围内,所得产品收率较高,而且产品的pH值在510左右,符合药典酸度项下要求的pH值为410~610的规定,pH值低于510或高于610很容易造成产品酸度不合格〔6〕。

3.2　75%乙醇水溶液加入量对产品的影响

溶剂用量是影响两性霉素B产品纯度和收率的一个关键因素。

溶剂用量太少,两性霉素B溶解不完全,收率较低,而且杂质溶解去除的也较少,产品纯度提高不大;溶剂用量太大则成本太高,残留在母液中的两性霉素B也会随之增多,当母液量增大到一定程度时,母液中残留的两性霉素B就会成为影响产品收率的主导因素,此时增大溶剂用量,产品收率会随之降低。

为此,选择一个最佳的溶剂用量是有必要的。

加入不同滤液体积倍数的乙醇水溶液,考察其・9・

精细与专用化学品第15卷第12期

对产品效价、有关物质含量及产品收率的影响,所得结果见图2

。

图2　乙醇水溶液加入量对两性霉素B产品的影响

由图2可见,乙醇水溶液加入量为4产品效价最高;3讲,乙醇水溶液加入量在含量相差并不明显;范围内,加,说明在乙醇水溶液加入量为6倍滤液体积范围内,母液溶解的两性霉素B不是收率的主要影响因素。

综合考虑溶剂成本、产品纯度及收率3方面因素,乙醇水溶液加入量在3~4倍之间较为合适。

采用结晶方法、以粗制品为原料,探索了两性霉素B结晶的基本操作条件,实验发现,以20%DMF2乙醇（75%水溶液为溶剂体系、pH在5~6、75%乙醇水溶液加入量为3~4倍滤液体积时所得两性霉素B产品较为理想,这为两性霉素B吸附结晶纯化工艺的进一步研究提供了重要的理论依据。

□

参考文献

〔1〕顾觉奋,郑珩.两性霉素BJ〕.国外

医药抗生素分册,l996,17:

~366〔2,.脂质体的研制及其质量评

.,（:

593~5953〕.M〕.:

科学出版社,19854,王永莉,等.头孢哌酮钠结晶工艺的进展〔J〕.中国抗生

素杂志,2004,29（1:

58~62〔5〕郑学丽.两性霉素B粗粉回收工艺研究〔J〕.河北化工,2003,6:

17~18〔6〕愈文和,杨纪根.抗生素工艺学〔M〕.沈阳:

辽宁科学技术出版

社,1987〔7〕周立雪,周波.传质与分离技术〔M〕.北京:

化学工业出版社,

2002

（上接第7页2.5　精制2.5.1　投料比

32甲基242正丁酰氨基252硝基苯甲酸甲酯100kg;甲醇8