最新N型色谱工作站操作操作规程.docx

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最新N型色谱工作站操作操作规程

N2000型色谱工作站操作操作规程

N2000型色谱工作站操作规程

目的：

建立色谱工作站操作程序，规范操作行为。

适用范围：

N2000型色谱工作站操作

责任者：

色谱工作站操作员

程序：

1、进入N2000色谱工作站，选择进入“在线色谱工作站”。

2、打开通道1或2，对实验信息、方法进行编辑。

3、输入实验信息，包括实验标题、实验人及实验单位。

4、编辑方法：

①采样控制：

输入采样结束时间、文件前缀、文件保存方式、保存路径以及选择采样结束后自动积分或自动打印报告；②积分：

选择积分参数、积分方法，并且根据实验所需对分析参数进行修改；③谱图显示：

输入时间、电压显示范围，并选择色谱图注释内容；④报告内容编辑：

根据实验所需对谱图尺寸、实验信息、报告内容及谱图显示等进行修改；⑤仪器条件：

在“液相色谱”下输入仪器型号、标温、柱类型，在“检测器”下输入检测波长，“梯度方式”下选择梯度类型、输入流量。

5、数据采集：

①查看基线；②零点校正。

6、待检测器稳定后，开始进样。

在“数据采集”状态下，单击“采集数据”，采集完毕后，单击“停止采集”，如不要此数据，则单击“放弃采集”。

7、在“在线色谱工作站”状态时，打开“离线色谱工作站”。

8、在“offline”下，打开文件，查阅数据，并对所得结果进行计算、打印。

9、分析完成后，退出N2000色谱工作站。

N2000型色谱工作站的有关概念

1、本工作站需用到的部分色谱专业术语

1.1色谱图的有关概念

色谱图：

色谱柱流出物通过检测器系统时所产生的响应信号对时间或者说载气流出体积的曲线图

色谱峰：

色谱柱流出组分通过检测器系统时所产生响应信号的微分曲线。

基线：

峰的起点与终点之间所连接的直线

峰高：

从峰的最大值到峰基线的距离

峰宽：

在峰两侧拐点处所作切线与峰基线相交两点之间的距离

半峰宽：

通过峰高的中点作平等于峰底的直线，此直线与峰两侧相交两点之间的距离

峰面积：

峰与峰基线之间的面积

1.2峰处理参数

色谱峰检测、基线漂移的修正、峰起落点的确定、分割分离不完全的峰、测定峰面积等谱峰处理，都是根据设定的峰处理参数（如峰宽、斜率、漂移量、最小峰面积、时间变参、时间程序表及积分事件表）等进行的，其有关概念见下表：

参数

单位及范围

功能与说明

峰宽

0～50（5）秒

删除峰宽比设置值小的峰，过程如同筛子以最小有效峰的半高处的宽度为依据来设置，最小半峰宽，可从谱图显示处估计该设置值。

斜率

0～99999.99（70）（微伏/分）

峰检测灵敏度，用于确定峰的起点与终点

最小峰面积

0～99999.99（100）（微伏?

秒）

删除面积（峰高）比设定值小的峰,用于删除分析过程中面积相对较小的不相关峰（如仪器噪声）

漂移

0～99999.99（0）（微伏?

秒）

确定基线变化程度,实现峰面积的自动分割置“0”则进行自动修正

时间变参

0～2000（0）（分）

依据色谱峰的峰形规律,在到达设定时间后,斜率减半.峰宽加倍,置“0”根据峰宽与实际峰形的关系,自动改变,如不想使用则设置一个比停止时间大的值

锁定时间

0～99999.99（0）（分）

删除分析开始至锁定时间之间的峰,主要用于删除分析开始的一段时间内出现的空气峰,溶剂峰,负峰等不相关峰

样品量

0～999999.99（100）

分析样品的重量,不能置零,对非归一法有效

注：

表中括号内数据为系统默认值。

2、色谱处理的相关概念

2.1.数据采集：

在采集数据的过程中，分析仪器所输出的信号在采集器中由模拟信号转化为数字信号。

数字信号传送到N2000色谱工作站并保存在信号数据文件中。

2.2.积分：

积分是从信号曲线上确定峰并计算其大小。

积分是定量计算必不可少的。

N2000色谱工作站积分时，先是辨别每一个峰的开始及结束时间，并用“|“符号标记这些点，同时寻找这些峰的顶点，确定保留时间，建立基线，计算峰面积、峰高及峰宽。

这些过程由积分参数表、时间表、手动积分事件表控制。

    在实际运行中，色谱工作站常常必须处理非常复杂的色谱问题。

在一次运行中，峰的大小可能变化很大，而且峰经常是以很小的浓度出现。

系统噪声，漂移等干扰会影响工作站用来计算峰面积和高度的基线，最终会导致色谱过程难以完全将峰分离。

只要有可能，就优化色谱分析方法来产生分离效果。

当由于某些原因而难以做到时，色谱工作站必须处理复杂峰。

    因此，我们知道峰的积分是一项复杂的工作，尽管我们浙江大学智能信息工程研究所的增强型智能算法尚不能对极差的色谱峰完全补偿，但我们的N2000型色谱工作站能够克服噪声、漂移和峰的不完全分离等问题，并从较差的色谱图中获得可重复的结果。

2.3.定量：

使用峰面积或峰高来确定样品中化合物的浓度，包括以下过程：

弄清并鉴别您所分析的化合物；建立分析含有这种化合物样品的方法；分析含有已知化合物浓度的一个或几个标准样品，以获得该浓度下的响应，并计算出响应因子；分析未知浓度的化合物样品，以得到未知浓度的响应；将未知浓度的样品与标准样品进行比较，并利用标准样品的校正因子来确定未知样品中化合物的浓度。

    为了获得未知样品响应与标准样品的有效比较，必须在相同的条件下采集和处理数据。

2.4.校准：

校准是通过进样分析指定的准备好的标准样品，来确定计算绝对组分浓度的响应因子的过程。

    重复次数：

同一浓度的标准样品平行进样的次数。

    校准点数：

由一个校准不同样品浓度的校准点组成。

    标准样品：

也叫校准样品或标准混合物，是含有用于定量的已知数量的化合物样品。

标准样品可从国家标准试剂供应商处买到。

    标准曲线：

是从一个或多个标准样品中获得的化合物的数量与响因数据的图形表示。

2.5.报告：

报告包含所分析样品的质及量的信息。

报告可以直接打印，或在屏幕上显示，报告可包括运行中所测峰的详细信息及所得的信号图。

3、本工作站的特有概念介绍：

积分方法、组分表、谱图、ORG文件、MDY文件、DAT文件、手动积分事件表等。

3.1.方法（.MTD文件）

    方法是指控制工作站对色谱仪的信号进行显示、采样保存、分析计算、打印、同时记录试验条件的一个程序，包括采样控制、积分参数、组分表、谱图显示控制、报告编辑格式、仪器条件等。

    本工作站所用的方法有三类：

贮存方法、缺省方法、现用方法，扩展名为.MTD

    针对不同的样品设置相应的方法，可以使您更准确更快速更方便地进行样品测试，并真实地记录样品的实验条件。

所以，在日常的操作中应养成良好习惯；即取一个简单直观的方法文件名并及时地保存修改过的方法。

3.2.组分表（即ID表）

    工作站组分表就是用来鉴别峰，判定组分名称，进行非归一法计算时的依据。

3.3.谱图DAT文件

    即只包含色谱数据信息的文件，与原N型和UPPER色谱工作站兼容。

3.4.ORG文件

    原始处理数据文件，除了谱图数据以外，还包括实验信息与样品分析方法、仪器条件、积分及定量计算结果、结果报告等信息。

这是只可查看不可编辑的二进制文件，因而可确保结果的原始性，符合ISO9000系列及美国GMP认证规定。

后处理时不许对其进行修改，修改后保存为MDY文件。

3.5.MDY文件

    对原始处理数据（ORG文件）进行修改后保存的文件。

3.6.实验日志

    即您利用本工作站时对方法的操作、数据的采集等在线工作站的自动记录。

    可记录整个系统的运行情况，包括方法的建立、保存、另存、加载、实验数据的采集及文件的保存。

3.7.手动积分事件表

    即您对谱图手动画基线等手动积分事件的集合。

N2000工作站相关文件操作

1、本工作站通用的文件操作方式

1.1.方法的加载：

从磁盘中调入一个已有方法到内存中，作为现用方法处理色谱数据。

1.2.方法的保存：

将内存中正在使用的方法以加载时的文件名保存到磁盘中，以免因调用其他方法或突然停电而将修改后的方法丢失。

1.3.方法的另存：

将内存中正在使用的方法作为另一个文件名保存到磁盘中。

1.4.方法的缺省：

将工作站内置的方法调出作为当前方法。

1.5.谱图的打开：

从磁盘中调入一个已有的谱图作为当前对象进行操作，打开之前可以在打开谱图的下方小窗口进行预览及放大。

1.6.谱图的保存：

将当前内存中的谱图以另一个文件名保存到磁盘中，需要选择或者输入一个文件名，保存的扩展名为MDY。

2、本工作站通用的谱图操作方式

2.1.谱图的放大：

在谱图窗口内，按住鼠标左键，从左上到右下选一个区域，放开鼠标，所选区域即被放大至全窗口。

2.2.谱图的缩小：

与放大的操作步骤相反，即在谱图窗口内，按住鼠标左键，从右下到左上拉一个区域，放开鼠标，谱图即还原回被放大前的全窗口。

2.3.谱图的拖动：

即在谱图窗口内，按住鼠标右键，任意移动鼠标，即可将谱图的其他部分显示在窗口内。

2.4.选择一个色谱峰：

按住shift键，用鼠标在谱图上点击所需要的色谱峰，然后再点击插入，工作站自动给出相应的保留时间，以方便您进行组分表的编辑。

2.5.选择一个时间段：

按住shift键，用鼠标在谱图上拉出所需要的时间范围，在编辑时间程序表时用。

2.6.谱图的全量程显示：

以最大的峰高为纵坐标，将谱图的所有峰都显示在窗口内。

工作站默认为本选择。

2.7.谱图的自动显示：

即工作站根据谱图的实际情况，自动选择一个最佳的电压作为纵坐标，以美观的格式显示谱图，方便您的操作。

2.8.范围不变：

即工作站强制以您设置的电压范围和时间范围显示谱图。

校正归一法（单点多次校正）

在本例中，所测样品有四种组分，各组分浓度如下：

组分名

组分浓度（％）

A

25.23

B

45.22

C

15.5

D

14

该样品所采用的方法为“面积校正归一”，且已对该标样进行了2次平行进样（重复进样）。

现要求对方法进行单点二次的校正归一法校正。

参照本章第一节的叙述，其校正步骤如下：

1、选择方法和积分参数，在此例中我们使用“面积校正归一法”，如图所示：

2、编辑组分表，调开标样谱图，在本例中我们采用“全选”方式套用各组分保留时间及时间宽度，在峰名一栏中输入组分名“A”、“B”、“C”、“D”，

然后单击“采用”，工作站将跳出提交成功窗口：

点击OK，工作站将加亮“校正”按扭，单击“校正”，工作站将跳出校正窗口。

3、输入标准品含量:

单击“组分含量”，在组分含量表中输入A、B、C、D的浓度，如图所示：

注：

在输入组分含量时，请将输入法切换成英文形式，在中文输入法下，很容易将小数点“.”输成句号“。

”。

这是软件不能接受的格式，还则系统将提示您“请输入正确的数值”。

4、校正：

在本例中我们采用“加入标样”来运行校正，单击“加入标样”，工作站将跳出“打开谱图文件”窗口，选择标样hplc1.dat，单击“打开”，以完成一次校正；

重复第一次校正步骤，即再点击一次“加入标样”，打开标样谱图hplc2.dat文件，并“确定”，单击“校正完毕”用以完成本次平行两点校正。

5、预览校正曲线：

单击“另存”，输入方法文件名“面积校正归一法（平行两次校正）测样.MTD”，用以保存校正曲线，以便分析样品使用。

高度内标法（单组分单点二次校正）

例：

标准样品的配制：

精密称取98.54mgVE标准品（含量为99.3%）于100ml容量瓶，用含1mg/ml内标物C32的正已烷稀释至刻度。

可算出VE标准品的浓度（即标浓度1）为0.9785mg/ml；

样品1的配制：

精密称取96.13mg样品于100ml容量瓶，用含1mg/ml内标物C32的正已烷稀释至刻度。

可算出VE样品的浓度（即样品量）为0.9613mg/ml

样品