CB517900G儿童孤独症的遗传基础及其致病的机制研究.docx
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CB517900G儿童孤独症的遗传基础及其致病的机制研究
项目名称：
儿童孤独症的遗传基础及其致病的机制研究
首席科学家：
夏昆中南大学
起止年限：
2012.1-2016.8
依托部门：
湖南省科技厅教育部
一、关键科学问题及研究内容
（一）拟解决的关键科学问题
已有的研究显示，孤独症具有高度的临床异质性。
由于缺乏明确的疾病相关生化、病理、影像学等指标，孤独症的诊断均以行为障碍为依据。
目前国际上孤独症诊断评价的最佳工具被认为是ADOS和ADI-R，但在国内并未被推广。
孤独症的病因至今不明。
流行病学调查显示孤独症的遗传度高达90%。
近年来，通过染色体核型分析、连锁分析、GWAS、全基因组CNVs研究，已鉴定了多个相关的位点和易感基因，但由于孤独症高度的表型和遗传异质性，这些位点或基因很少能够被重复验证。
此外，即使是已经发现的遗传变异，也只能解释10-20%的患者。
环境因素也被认为是孤独症的主要病因之一，但由于缺乏系统的调查与研究，至今尚未发现确切的与孤独症发生有关的环境因素。
最近几年，关于孤独症的神经生物学机制研究取得了一些重要的进展，对多个孤独症高度相关基因的功能研究表明，神经发育、神经元可塑性、突触连接功能、神经环路的异常可能是孤独症发生的重要分子机制。
但总体而言，关于孤独症的分子致病机制研究还处于早期阶段，易感基因究竟通过什么机制参与疾病的发生、发展，其中所包含的调控机制是什么仍然是当前孤独症研究的重大问题。
根据目前的研究现状，我们提出2个需要解决的科学问题：
1、孤独症的遗传学基础：
已有的研究显示，孤独症的易感位点或基因很难被重复验证。
我们认为其根本原因在于孤独症具有高度的临床异质性，同时缺乏有效的疾病相关生化、病理、影像学等特征及临床内表型和亚型分类，导致孤独症易感基因研究中入组样本实际存在较大的不同质性。
此外，多数研究以ASD、而不是典型的孤独症患者为研究对象，进一步导致了研究样本的不同质性。
而决定其不同质性的主要原因是由于孤独症的遗传基础较非常复杂，染色体异常、CNVs、罕见基因变异、GWAS发现的常见变异等均与孤独症有关。
尽管近年来孤独症的遗传基础研究取得了很大的进展，但将所有已发现的遗传因素合并起来，也仅能解释10-20%的孤独症患者。
因此，进一步鉴定孤独症的易感基因、确定不同类型变异在疾病发生中的贡献度仍然是阐明孤独症遗传学基础的重要问题。
通过鉴定孤独症临床内表型，进行临床亚型分类，并在此基础上鉴定易感基因是解决这一问题的关键。
2、孤独症的神经生物学机制：
已有研究表明，神经发育、神经元可塑性、突触连接功能以及神经环路的异常似乎是导致孤独症发生的重要原因。
然而，现有的研究尚未阐明孤独症发生、发展过程中神经元的生物学特征和功能、以及神经环路等的改变及相关调控机制。
在疾病发生中，除了已知的少数通路之外，还有哪些分子、通过什么信号途径、生物学通路和调控机制来参与疾病的病理过程尚属未知。
此外，由于遗传基础复杂，至今没有一个合适的孤独症动物模型，从而制约了疾病的发病机理研究进程。
因此，在准确鉴定孤独症易感基因的基础上，选择合适的模型和策略开展神经生物学研究是阐明其发病机理的关键。
（二）主要研究内容
根据孤独症的研究现状及拟解决的科学问题，我们提出如下科学假说：
孤独症具有明显的遗传易感性，与其相关的遗传基础主要分为两类：
一类是以SNPs等常见变异为代表的潜在背景基因，另一类是以染色体异常、新发CNVs和罕见基因突变等为代表的主效基因。
两类基因是疾病发生共同的遗传基础，并且在环境因素以及表观遗传异常的作用下造成神经发育、神经元可塑性、突触连接功能和神经环路异常，最终导致孤独症表型的出现。
罕见突变、新发CNVs
易感遗传背景
孤独症内表型
环境
表观遗传异常
环境
孤独症表型
环境
神经元可塑性、
突触连接功能、
神经环路异常
图1研究假说示意图
具体研究内容包括以下四个方面：
1、鉴定孤独症的临床表型和内表型：
由于尚未发现特定的孤独症病理学特征，目前的诊断仅依赖ADOS，ADI-R等行为学量表，与其他神经精神疾病不同的是，孤独症高度的表型异质性加大了临床诊断的难度。
本项目将充分发挥项目组孤独症临床实践和临床基础研究国内领先的优势，在建立孤独症临床和遗传资源库的基础上，详细鉴定孤独症的临床特征，特別注重孤独症患儿的社交障碍、语言障碍、刻板行为等核心症状，并利用生化、电生理、脑成像等技术发现潜在的内表型，建立孤独症核心症状等表型和内表型数据库，为诊断提供客观指标，为孤独症的病因学研究、特别是基于特征表型的样本入组提供科学支撑。
2、孤独症的遗传学基础研究：
过去近十年的遗传学研究已鉴定了数十个孤独症易感位点或基因，并在某些基因中发现了高致病效应的罕见突变。
孤独症的遗传度在90%以上，但已发现的遗传因素只能够解释10-20%的患者，因此孤独症的遗传基础在很大程度上还没有阐明。
而且由于孤独症高度的表型异质性，针对某种临床亚型或内表型的遗传基础也很少有人探究。
本项目将利用全基因组关联研究寻找孤独症的常见变异，通过全基因组CNVs扫描以及外显子捕获结合第二代测序技术寻找孤独症的罕见致病变异。
在临床实践和研究工作的基础上，依据核心症状等临床亚型或内表型进行分组，开展基于临床亚型或内表型的GWAS及第二代测序研究，鉴定孤独症易感基因。
3、孤独症的分子发病机制研究：
由于遗传基础不明，缺乏合适的细胞和动物模型，孤独症的分子病理机制研究还处于早期阶段。
本项目将利用遗传学、细胞生物学、生物化学与分子生物学以及电生理等方法，对前期研究工作已发现的和本项目新发现的部分易感基因开展研究，鉴定孤独症的神经生物学基础。
同时，一方面建立患者来源的iPSCs并诱导分化为神经元作为细胞模型，另一方面选择几个高度相关的易感基因构建敲除、点突变敲入或过表达小鼠和果蝇模型，确定这些细胞和动物模型中神经发育、神经元可塑性、突触连接功能、神经环路或行为学变化，预测相关基因在神经发育、突触功能和神经环路中的作用，以阐明孤独症的分子发病机制。
此外，由于孤独症多基因遗传背景，单个基因变异可能无法构建符合孤独症行为学特征的动物模型，本项目拟利用最新的染色体工程技术，以发现的疾病相关CNVs为目标，探索构建孤独症的小鼠模型。
4、孤独症的分子调控网络和风险预测模型的构建：
孤独症的临床和遗传异质性说明多种病因（遗传、环境、表观遗传等）、多条生物学通路参与了疾病发生过程，从系统水平研究孤独症的发病机制将是一个有效的方式。
本项目将利用生物信息学技术构建一个数据整合平台，将各个课题组的研究结果以及公共数据，包括环境数据、表型数据、影像学数据、基因组数据以及神经生物学数据等进行整合，并利用数学建模的理论和方法，构建孤独症分子调控网络，寻找潜在的生物学通路，结合转化医学建立孤独症风险预测模型，辅助孤独症的早期诊断和预防。
二、预期目标
（一）总体目标
通过临床实践和研究，发现部分孤独症的特征表型和内表型，对孤独症进行亚型分类，为制定符合国际标准，并具有神经电生理、影像学等特征的诊断体系提供科学数据；利用细胞遗传学、分子遗传学和基因组学技术，鉴定孤独症的易感基因，阐明疾病发生、发展的遗传学基础；利用生物化学、细胞生物学、分子生物学、电生理等技术，以及合适的细胞和动物模型，研究孤独症的神经生物学基础，阐明孤独症的分子发病机制；利用染色体工程技术，探索构建多基因遗传背景、符合孤独症行为学特征的动物模型，并应用于孤独症的发病机制和干预研究；利用生物信息学技术和数学建模方法，整合孤独症有关的临床、遗传、神经生物学等信息，构建孤独症分子调控网络，建立孤独症风险预测模型，为孤独症的早期诊断、早期干预和临床治疗提供科学依据。
（二）五年预期目标
1.建立一个10,000例样本以上的孤独症临床和遗传资源库，将孤独症样本以社交障碍、语言障碍、刻板行为等核心症状为主细分临床亚型，并通过生化、电生理、脑成像等方法鉴定几个孤独症的内表型。
2.联合应用经典细胞遗传学、全基因组CNVs分析、GWAS以及第二代测序技术，发现10-20个孤独症（或某些核心症状）的致病或易感基因。
3.选择若干已有的和本项目新发现的与疾病相关的易感基因，研究其生理功能及其参与的神经生物学过程，初步阐明孤独症的分子致病机制。
4.建立10-20个孤独症患者特异性iPSCs细胞模型并分化为神经元，在孤独症患者遗传背景下研究发病机理，建立5-10个孤独症易感基因突变的动物模型研究孤独症易感基因功能。
5.利用生物信息学技术整合大量样本的临床数据、影像学数据、基因组数据等，寻找孤独症相关的生化通路和调控网络并构建一套孤独症网络分析预测模型。
6.在国际权威杂志上发表50篇以上的SCI专业论文，其中IF≥10的专业论文8-10篇、IF≥20的专业论文3-5篇。
7.培养一支创新团队和中青年学术带头人队伍，确定我国在孤独症病因和发病机制研究领域前沿的学术地位。
8.促进国内外孤独症研究的学术合作和研究资源的交流，以加强我国儿童发育性疾病的基础和临床研究。
（三）项目总体目标和五年目标的关系
项目总体目标是针对目前孤独症面临的现状，通过临床实践和研究，实现对孤独症的早期诊断、早期干预。
在本项目中，经过五年的努力，我们将发现部分孤独症的特征表型和内表型，对孤独症进行亚型分类，为制定符合国际标准的诊断体系提供科学数据；发现孤独症的部分遗传基础；阐明孤独症的部分分子发病机制；构建动物模型，应用于孤独症的干预研究；构建孤独症分子调控网络，建立孤独症风险预测模型。
五年目标是实现总体目标的基础，一方面可望鉴定孤独症的主要遗传学基础，初步阐明疾病发生的遗传学机制和分子病理机制，从而为全面认识其发病机理研究提供思路，为后续开展干预和治疗研究提供有效的细胞和动物模型；另一方面，获得的数据及构建的分子网络将为实现孤独症的早期诊断和早期干预提供重要的科学思路和依据。
三、研究方案
（一）学术思路和技术途径
通过临床特征表型、电生理和脑影像学研究等鉴定孤独症内表型，进行亚型分类；在内表型和临床亚型分类及前期研究工作的基础上，利用细胞遗传学、分子遗传学、基因组学及第二代测序技术，鉴定孤独症的易感基因，阐明疾病发生、发展的遗传学基础；以培养神经元、患者来源的iPSCs诱导神经元及易感基因动物模型，综合利用生物化学、细胞生物学、分子生物学、电生理、行为学等技术，研究孤独症的神经生物学基础，阐明其分子发病机制；采用染色体工程技术，构建多基因遗传背景的孤独症动物模型；整合孤独症有关的临床、遗传、神经生物学等信息，构建孤独症分子调控网络及风险预测模型，为孤独症的早期诊断、早期干预和临床治疗提供科学依据。
图2总体技术途径
（二）创新点与特色
1.临床与基础的结合：
国际上孤独症研究的样本多为ASD患者，具有高度临床异质性，给基础研究工作带来很大困难。
鉴定孤独症不同临床亚型的分类，消除样本表型异质性给基础研究工作，尤其是给遗传学研究带来的影响极其重要。
本项目设置了一个有较强临床研究基础的课题组，通过临床表型、影像学等技术对遗传资源进行详细的临床亚型及内表型分类，进一步以特异的内表型对样本分组，由于分组患者有较高的同质性，有利于鉴定在孤独症发生中起重要生物学意义的易感基因。
2.学术理论的创新：
本项目中我们提出的科学假说是“孤独症具有明显的遗传易感性，与其相关的遗传基础主要分为两类：
一类是以SNPs等常见变异为代表的潜在背景基因，另一类是以染色体异常，新发CNVs和罕见基因突变等为代表的主效基因。
两类基因是疾病发生共同的遗传基础，并且在环境因素以及表观遗传异常的作用下造成神经发育，神经元可塑性，突出连接功能和神经环路异常，最终导致孤独症表型的出现”。
此假说是根据目前孤独症的研究现状提出的，具体依据包括：
（1）已鉴定的易感位点或基因众多，但很少被重复验证；
（2）近年的研究发现孤独症患者约3%携带染色体异常，约5%存在相关CNVs，提示在异常染色体和CNVs累及的区间存在与孤独症直接相关的易感基因；（3）罕见变异导致子代患病，但携带相同变异的父亲或母亲正常；（4）所有易感位点或基因加起来也只能够解释大约10-20%的患者。
基于上述原因，我们认为孤独症的遗传基础与多数复杂疾病相比，存在一定程度的差异，除了通过关联研究发现的背景基因之外，可能有潜在的罕见主效基因，二者协同作用导致疾病的发生。
3.新技术的应用：
目前复杂疾病的研究已经进入一个高通量的时代，本项目将利用新一代高密度基因芯片进行全基因组关联研究和CNVs分析，利用新一代测序技术进行全外显子组测序，寻找孤独症新的罕见或新发致病突变，从基因组学水平系统研究孤独症的遗传病因。
4.孤独症患者来源的iPSCs的建立：
由于孤独症的多基因遗传背景，根据单个基因变异构建的细胞或动物模型很难模拟真正的孤独症表型。
我们将利用患者来源的细胞构建具有孤独症遗传背景的iPSCs并定向诱导分化为神经元，以此细胞模型来研究孤独症的分子发病机制。
5.利用染色体工程探索构建孤独症动物模型：
孤独症发病机制以及潜在的治疗靶点的探索需要有效的动物模型，通用的动物模型仅涉及单个基因或2-3个基因，与孤独症的遗传基础不符。
本项目在开展单个基因有关的动物模型研究同时，将利用最新的染色体工程技术，探索构建孤独症的多基因连锁群遗传背景（如疾病相关的CNVs）的动物模型，并对模型进行行为学评估。
（三）可行性分析
1、坚实的前期研究基础
研究团队具有丰富的临床诊疗经验并且已经诊治孤独症谱系障碍儿童约20000例，收集了近5000例孤独症样本。
通过前期研究，已在全基因组学关联研究，外显子测序和易感基因的神经生物学研究积累了一定经验，为本研究的立项积累了坚实的遗传基础研究和大量的基因组数据。
其全基因关联研究和外显子测序在国内尚属于首例。
本研究临床和遗传资源依托的中南大学精神卫生研究所、中山大学第三附属医院儿童发育行为中心、南京医科大学附属脑科医院儿童心理卫生研究中心、哈尔滨医科大学以及中南大学医学遗传学国家重点实验室在孤独症临床诊治、资源收集、保存和利用方面做了大量的工作。
南京医科大学附属脑科医院儿童心理卫生研究中心是我国最早报道孤独症的单位，自1991年起一直从事孤独症的临床诊治工作，已收集孤独症核心家系200多个；中山大学附属第三医院近10年来也一直致力于孤独症的临床诊疗工作，积累了孤独症病例10000例以上，均有详细的临床资料及评估体系，收集了400个孤独症家系的临床资料及DNA样本（包括患儿与一级亲属）。
哈尔滨医科大学2007年初开始建立孤独症核心家系生物样本库，目前已收集600个孤独症核心家系样本。
中南大学精神卫生研究所和医学遗传学国家重点实验室近几年来也致力于孤独症的临床和基础研究，共收集孤独症临床和DNA样本 1676例，其中核心家系460个。
这些资源充分保证了本项目对样本数量的要求。
本项目建议首席科学家夏昆教授和赵靖平教授合作，利用Illumina高通量芯片完成国内第一个孤独症全基因组关联研究（GWAS）和拷贝数变异（CNVs）研究。
本项目组前期利用收集的部分遗传资源进行了GWAS和CNVs分析。
GWAS研究的初筛结果见图3。
通过国际合作，在676个来源于AGRE的高加索人群孤独症核心家系中验证，发现了4个具有全基因组显著相关位点（p<5e-07），目前文章正在Nature杂志审稿。
所发现的4个基因均位于以前的两个连锁研究定位的区域内，其中两个基因属于被认为对孤独症有重要作用的mTOR/PI3K通路。
这为我们开展神经生物学研究，探讨孤独症发病机制提供了可靠的科学基础。
与此同时，发现了两个基因位点接近全基因组显著水平，与最近JAMA和NatGenet报道与神经发育疾病和阿尔兹海默病有关的基因相同。
利用先进的全基因组关联分析技术，我们的孤独症全基因组关联研究发现多个常见变异与孤独症相关，打破西方一些人认为CNVs是孤独症的主要遗传因素。
通过本项目研究，我们将进一步加大样本量，以发现更多的易感基因。
此外，全基因组CNVs分析也得到了大量的有意义的结果，在验证已发现的CNVs位点的同时，发现了多个新发的和遗传的罕见CNVs，这些CNVs所包含的基因将成为我们接下来要重点研究的对象。
图3全基因关联分析，统计分析结果按染色体绘图
中国科学院孙中生研究员前期开展的外显子组捕获结合第二代高通量测序研究，为在全基因组关联的基础上寻找功能变异（causalvariants）积累了经验。
前期研究中我们已经用外显子组捕获结合第二代测序技术对20个白人样品和10个独立的中国人孤独症病例进行了遗传突变的筛查，并且在更大的孤独症样本中对结果进行了验证。
发现了一个新的孤独症致病基因，目前文章正在NatGenet杂志审稿。
这一成果的完成不仅发现了孤独症新发突变易感基因，而且还证明了运用第二代测序技术在孤独症遗传学研究中的作用，为本项目开展的研究工作开辟了新的思路，积累了宝贵经验。
本项目研究人员具有丰富的孤独症易感基因神经生物学研究经验。
东南大学“发育与疾病相关基因”教育部重点实验室在国际上最早克隆了果蝇的dneuroligin（dnl）和dneurexin（dnrx）基因并发现它们与人类的Neuroligin和Neurexin有高度的同源性。
对这两个基因的前期研究发现dnrx基因突变的幼虫有严重的运动缺陷，脑神经元突触数目减少，并且突触小泡分布也发生了明显的改变，幼虫和成虫的联想式嗅觉学习记忆被打断（Zeng,2007），DNRX参与突触囊泡再循环（Sun,2009）,dnl2突变体的NMJ中，DGluRIIA的募集量增加，DGluRIIB和DGluRIII的募集量减少；突触前活跃区的标记物Brp的spots的数量增多，突触后PSD的标记物D-PAK的cluster的面积明显变小，DNRX与DNL2相互作用，参与突触分化和突触成熟（Sun,2011）。
小鼠神经细胞培养体系中的初步研究显示，在代谢型谷氨酸能受体依赖的长时程抑制（mGluR-LTD）的情况下，Neuroligin的突触表达受到神经活动的动态调控（未发表资料），提示在mGluR-LTD情况下，Neuroligins和Neurexins跨突触相互作用对协调突触前、后改变有至关重要的作用。
该研究可能为理解长时程突触可塑性的分子机制提供崭新的视野，为阐明孤独症的神经生物学机制奠定前期基础。
2、完善的技术平台和雄厚的科研实力
中南大学医学遗传学国家重点实验室、中国科学院北京生命科学研究院和中国医学科学研究院具有整套先进的医学遗传学研究技术平台，包括IlluminaBeadArray高通量基因分型系统，HiSeq2000第二代高通量测序仪和Sun高性能计算机系统等设备和相应的技术支持。
研究团队在细胞遗传学、分子遗传学、表观遗传学、基因功能组学等方面做出了显著成绩，相关研究总计发表论文600余篇，部分论文发表在NatGenet，JClinInvest，PNAS等国际一流杂志。
中南大学精神卫生研究所是我国四大精神卫生区域中心之一，学科现有6个国内一流各具特色的研究方向，分别是临床心理评估、精神应激、成瘾行为、精神药理与生物精神病学、儿童精神病与精神卫生、精神疾病脑影像与脑电生理诊断研究方向。
在神经精神性疾病的临床研究方面有雄厚的基础和实力。
在JAMA,AmJPsychiatry,MolPsychiatr等国际一流杂志发表论文多篇。
东南大学“发育与疾病相关基因”教育部重点实验室和中南大学医学遗传学国家重点实验室建成了以小鼠、果蝇、线虫等模式生物基因修饰的共用平台，拥有分子和细胞神经生物学、神经生理学、神经药理学、分子影像学和基因敲除/转基因设施以及SPF级小鼠饲养中心等实验软硬件条件，还具有包括2台大型电子显微镜、7.0TMRI动物专用micro-MRI、2台单光子激光共聚焦显微镜（Zeiss，Olympus），活细胞工作站（TimeLapseMicroscope，Zeiss），倒置荧光显微镜、正置荧光显微镜、体视荧光显微镜、双光子激光共聚焦显微-电生理分析系统、4套电生理记录系统（含双通道膜片钳记录系统）、莱卡UC6新型超薄切片机、动物行为学检测系统、脑片LTP记录系统。
这些实验平台和大型仪器设备等将成为本973项目重要的支持力量，充分保证本项目的顺利实施。
电子科技大学神经信息教育部重点实验室是三期985重点建设实验室。
2011年学校已立项2500万建设以磁共振成像3.0T为平台的脑研究中心，目前有3套128道脑电采集系统和电生理采集系统。
30台4核和8M，1.5T硬盘的高档计算机分析系统，目前已在神经精神疾病脑影像研究中取得了重要研究成果，发表50余篇高水平SCI论文，可以满足数据采集和分析的需要。
为孤独症脑成像的内表型研究提供了有力条件。
上海生物信息技术研究中心已经建立了可操作的生物信息资源汇交平台和基因组功能注释、生物芯片数据分析、蛋白质组数据分析技术平台。
还建立了人类疾病相关基因的高通量生物信息学筛选技术体系，拥有IBM、SUN、SGI等大型服务器9台，PC集群三套，总CPU个数超过200个，存储容量超过40TB。
保证了本项目的生物信息学的软件和硬件需求。
（四）课题设置
围绕本项目拟解决的关键科学问题，我们共设置了5个课题，课题设置思路如下图：
图4课题设置思路图
课题1：
孤独症临床亚型、内表型及影像学研究
研究目标：
前期研究中，我们已经收集了近5000例孤独症临床资料及DNA样本，其中家系1500多个（患儿及一级亲属）。
前期研究已发现孤独症广泛表型中的某些特定表型符合可遗传性、家族聚集性及与疾病状态相对独立性等候选内表型的条件，课题组完成了孤独症患儿神经认知、功能影像学等预实验项目。
本课题的主要研究目标是：
1、收集孤独症家系及其血样标本，完善病例的诊断评估，以及家系成员的神经心理学指标、脑影像学指标、神经电生理指标及相应的生化、代谢指标等数量性状的测量，建立中国儿童孤独症临床，环境和遗传资源库；2、全面筛选具有可遗传性、家族聚集性、共分离以及疾病状态相对独立性的候选内表型，并进行内表型分组研究；3、通过与本项目其他课题组的合作寻找不同内表型的遗传学基础和致病机制，并探索内表型在孤独症临床中的早期预警及早期预防作用。
研究内容
1、建立中国儿童孤独症临床、环境和遗传资源库
（1）各参加单位协作，按照统一标准共同收集符合孤独症诊断访谈量表修订版（ADI-R）诊断标准的孤独症家系5000例，对患儿进行社交反应量表（SRS）及心理教育量表修订版（PEP-R）评估，并对一级亲属进行孤独症广泛表型评估。
（2）采用自编访谈表和一些代表性的量表收集患儿在胎儿时期及出生后的环境因素数据，分类整理，登记入册。
（3）在知情同意的原则下，采集患者及其父母的外周血，抽提DNA并建永生细胞株。
（4）根据患者样本的性别组成、年龄层次，随机选取3岁以上的正常人作为对照样本，采集外周血，抽取DNA。
2、鉴定孤独症的内表型
（1）对患儿及其一级亲属进行神经认知测试，包括威斯康辛卡片分类任务（WCST），韦氏记忆量表修订版（WMS-R），韦氏智力量表（WPPSI/WISC/WAIS）等，收集神经认知的数量性状数据。
（2）对患儿进行脑影像学指标（包括结构和功能影像学指标）、神经电生理指标（如：
听觉诱发电位，事件相关电位，脑电图）及相应的生化、代谢指标等进行鉴定，收集相应的数量性状数据。
（3）根据数量性状与不同神经信号通路和神经网络通路的联系，采用表型-内表型建模的多重变量统计分析策略筛选候选内表型，并在其他神经精神疾病及普通人群中测量这些内表型在不同群体中的分布，建立孤独症候选内表型数据库，并对孤独症进行内表型分类。
3、对孤独症的临床亚型进行分类
综合表型评估的数据和已鉴定的内表型，对孤独症进
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