生理实验大纲杨.docx

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生理实验大纲杨

实验一ABO血型的鉴定

[目的要求]加深理解血型分型的依据及其意义；学会一种鉴定血型的方法。

学时：

2

[提问]

1、确定ABO型的依据是什么？

怎样确定？

2、ABO血型相同的人任何情况下都能相互输血吗？

试说明原因。

[原理]用已知的凝集素（如抗A、抗B）的标准血清，鉴定被检查者红细胞上未知的凝集原（如A凝集原或B凝集原），红细胞上含何种凝集原即为何种血型。

[实验用品]A型和B型标准血清，采血用具，玻璃，牙签，75%酒精棉球，玻璃蜡笔等。

[实验对象]人

[方法步骤]

1、玻片法

（1）取双凹玻片一块，用玻璃蜡笔在两端分别标以A、B字样。

（2）在A侧中央滴A型标准血清一滴，在B侧中央滴B型标准血清一滴。

（3）消毒手指或耳垂后，针刺取血1～2滴于盛有1ml生理盐水之试管混匀，制成红细胞混悬液。

分别用二根牙签取混悬液加入A型和B型血清中，并将玻片转动数次后，使其充分混匀，放置10～15分钟观察结果。

2、试管法

取小试管两只，分别标明A、B字样。

按玻片法在两管分别加入A型和B型标准血清及受检者红细胞悬液各一滴，振荡混合后，立即离心一分钟（1000转/分）。

取出试管后，轻轻摇起沉淀物，观察结果。

[观察项目]两种方法都先用肉眼观察是否发生凝集反应。

如不能确定，再在低倍镜下观察。

[实验结果]以玻片法为例，结果如下（图11）：

[结果分析]

1、甲玻片上红细胞在A、B两种标准血液中都不发生凝集，说明红细胞上A、B两种凝集原都没有，则血型为O型。

2、乙玻片上红细胞在A型标准血清中不凝集，在B型标准血液中发生凝集，说明红细胞上含A凝集原，则血型为A型。

3、丙玻片与乙玻片刚好相反，说明红细胞上含B凝集原，则血型为B型。

4、丁玻片上红细胞在A、B两种标准血清中都发生凝集，说明红细胞上含有A、B两种凝集原，则血型为AB型。

[结论]红细胞上的A、B凝集原被测知，即可作出ABO血型鉴定。

[注意事项]

1、实验前对所用A、B两种标准血清要经过校准，合格者才能用。

2、加入玻片或试管中的A、B两种标准血液切不可混淆错乱。

3、制备红细胞混悬液摇匀时，不可用力摇振，要轻轻将试管来回倒置，以防红细胞破裂溶血。

4、玻片或试管内加入红细胞混悬液时所用牙签要分别专用，不能两侧共用。

[异常现象讨论]本实验一般不会出现异常情况，但有时所测血型与某人原来正式鉴定过的血型不相符，其原因一方面可能所采用的标准血清存放时间过长，已失去标准血清的作用，需要用重新校准的新鲜标准血清；其次可能系实验场所不清洁，红细胞悬液及血清有严重污染而产假凝集。

[思考题]若无标准血清，已知某人血型为A型或B型，能否用来鉴定他人血型？

如何鉴定？

实验二反射弧的分析

[目的要求]分析反射弧的组成部分，加深理解反射与反射弧的概念，证明反射弧的完整性与反射活动的关系。

学时：

2

[提问]

1、什么叫反射？

2、反射活动的物质基础是什么？

[原理]在中枢神经系统参与下，机体对刺激所产生的规律性的反应活动称反射。

反射的实现必须有完整的反射弧。

反射弧的任何一部分受破坏，均不能出现反射活动。

由于脊髓是中枢神经系统的低级部位，机能比较简单，便于观察，所以往往用脊蛙作为实验对象。

[实验用品]蛙板，刺蛙针，粗剪刀，玻璃针，镊子，铁支架，双凹夹，小烧杯，培养皿，棉线，0.5%与1%硫酸液，滤纸片，药棉等。

[实验对象]蟾蜍或蛙

[方法步骤]

1、制备脊蛙用刺蛙针破坏蛙的脑部，保留脊髓，称为脊蛙。

刺蛙针拔出后，以小棉球堵塞伤口止血。

2、分离左侧坐骨神经将蛙俯卧于蛙板上，在左大腿背面作一纵行皮肤切口，用玻璃针分离肌肉，钩出坐骨神经，在其下穿线备用。

3、悬挂脊蛙用肌夹将蛙下颌夹住挂在铁支架上，待蛙四肢松软后再进行实验观察。

[观察项目]

1、用浸湿0.5%硫酸滤纸片贴于右足趾皮肤，观察有无屈腿反射。

2、环绕右大腿切开皮肤，彻底剥去该下肢皮肤，用0.5%硫酸滤纸片贴于该下肢无皮肤区，观察有无屈腿反向。

3、用0.5%硫酸滤纸片贴于左足趾皮肤，观察有无屈腿反向？

然后剪断左侧坐骨神经，重复上述操作，观察有无屈腿反向。

4、用1%硫酸滤纸片贴于蛙腹部皮肤，观察蛙有何反射活动？

5、用探针插入脊蛙椎管，捣毁脊髓，再重复操作4，观察蛙有无反射活动？

[结果及分析]

1、产生右下肢屈腿反射，因为反射弧五个部分完整：

皮肤感受器→传入神经→脊髓中枢→传出神经→屈肌收缩。

2、无屈腿反射，因皮肤感受器被破坏。

3、坐骨神经完整时，有屈腿反射，因反射弧完整。

剪断坐骨神经后，无屈腿反向，因传入与传出神经被破坏。

4、右下肢产生屈伸活动，因腹部皮肤感受器完整可以传入，右下肢传出神经与效应器也完整。

左下肢无屈伸活动，因其坐骨神经已剪断。

5、捣毁脊髓，破坏了反射中枢，故刺激腹部皮肤，右下肢也无屈伸活动。

[结论]反射弧的任何一部分受损，反射活动即不能出现。

[注意事项]

1、捣毁蛙脑时不能损伤脊髓，以免破坏反射中枢。

2、每次每硫酸刺激，观察结果后，应立即用清水洗净擦干皮肤，以免烧坏感受器。

3、酸刺激持续时间只能几秒钟，以免损伤皮肤。

4、用硫酸滤纸片贴于皮肤时，操作要轻，以免产生机械刺激。

[异常现象讨论]

1、硫酸滤纸片贴于无皮肤区，有时产生屈腿反射。

其原因可能由于脚趾皮肤未剥干净，或深层组织受损伤，或操作太重产生了机械刺激。

2、硫酸滤纸片贴于蛙腹部皮肤，左下肢因坐骨神经被切断，应无屈伸活动，但还有股神经及坐骨神经上段分支，故可产生屈髋活动，仔细观察与右下肢（坐骨神经完整）的活动有所不同。

3、脊蛙制备后，硫酸滤纸片刺激任何部位的皮肤均无屈腿反射。

这可能由于脊休克或污物流入椎管对脊髓产生了抑制所致。

[思考题]

1、反射与反应有何区别？

各举例说明之。

2、反射弧与反射活动的关系如何？

实验三坐骨神经腓肠肌标本的制备

[目的要求]学习破坏蟾蜍或蛙脑脊髓和制备坐骨神经腓肠肌标本的方法，要求每个同学制备一个完整的坐骨神经腓肠肌标本。

学时：

2

[提问]

1、动物实验方法一般可分为几类？

2、何谓离体实验、在体实验？

[原理]蟾蜍或蛙的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相近似，且其离体组织所需的生活条件比较简单，易于控制和掌握。

坐骨神经腓肠肌标本就是从蟾蜍或蛙后肢取下的坐骨神经及其支配的腓肠肌所组成，常用于观察神经冲动、兴奋性、兴奋过程、刺激的一些规律及肌肉的收缩特点等。

因此，制备坐骨神经腓肠肌标本是生理实验的一项基本操作技术。

[实验用品]蛙板，玻璃板，粗剪刀，手术剪，镊子，刺蛙针，玻璃针，大头针或图钉，瓷盘，滴管，培养皿，纱布，丝线，锌铜弓，任氏液。

[实验对象]蟾蜍或蛙

[方法步骤]

1、破坏脑脊髓：

取蛙一只，用自来水冲洗擦干。

左手握蛙，并用食指压住其头部前端，拇指按压背部，使头前俯（图1）。

右手刺蛙针由头前端沿中线向尾端划触，触及凹陷处即枕骨大孔。

刺蛙针由此垂直刺入，再将刺蛙针尖端向前刺入颅腔、左右搅动，毁坏脑组织。

然后将刺蛙针退出，再由枕骨大孔向后刺入椎管捣毁脊髓。

此时如蛙的四肢松软。

呼吸消失，表示脑脊髓已完全破坏，否则，应按上法再进行捣毁。

2、剪除躯干上部及内脏：

左手握住蛙的脊柱，使蛙头与内脏自然下垂。

右手持粗剪刀在蛙骶髂关节水平以上1cm处剪断脊柱，然后将蛙头、脑部、前肢和内脏一并弃去，仅保留一段脊柱、骶骨及两后肢。

3、剥除后肢皮肤：

左手捏住脊柱断端，右手掐住断端边缘皮肤，向下剥掉全部后肢皮肤，将标本放在盛有任氏液的培养皿中，将手及用过的器械洗净。

4、分离两腿：

用镊子挟住脊柱，将标本提起，用粗剪刀去骶骨后，沿正中线将脊柱分为两年，并从耻骨联合中央剪开两侧大腿，使之完全分离，将标本浸于任氏液中。

5、游离坐骨神经：

取一腿放于玻璃板上，用玻璃针沿脊柱向下游离坐骨神经，将标本背侧向上放量置，在股二头肌与半膜肌之间找出坐骨神经的大腿部分，小心分离，使之完全暴露，并剪去神经干上的所有分支，游离坐骨神经至腠关节处。

再将膝关节以上所有肌肉及股骨上端1/3剪去。

即成坐骨神经小腿标本（图2A）。

6、分离腓肠肌：

用玻璃针或镊子将腓肠肌跟腱分离，并穿线结扎，在结扎处下端剪断跟腱。

左手持线提起腓肠肌，用手术剪刀剪去与周围联系的组织，只保留腓肠肌起始端与骨的联系。

7、游离坐骨神经腓肠肌标本：

用粗剪刀将膝关节以下除腓肠肌外全部小腿剪去，留下的即是坐骨神经腓肠肌标本（图2B）。

[观察项目、结果及分析]

标本制成后，用经任氏液沾湿的锌铅弓迅速接触坐骨神经或电刺激坐骨神经，如腓肠肌收缩，表示标本良好。

要求经老师检查合格为准。

骨骼肌的收缩活动受神经支配，坐骨神经支配到腓肠肌，所以刺激坐骨神经能引起腓肠肌收缩。

直接刺激肌肉，也能引起肌肉收缩。

在整体中，肌肉的收缩一般是受神经支配的。

[结论]刺激完整的支配肌肉的神经可以引起该肌收缩。

[注意事项]

1、剪骨骼时只能用粗剪刀，在剥离标本时，不能用金属器械触碰神经干。

2、分离肌肉时，注意按肌肉的层次进行，不要刮剪。

分离神经时，一定要把周围的结缔组织剥离干净。

3、在整个操作过程中，经常滴加任氏液湿润神经和肌肉，防止干燥影响标本活性。

4、不能使动物的皮肤分泌物和血液等沾污神经和肌肉，但也不能用自来水冲洗，以免影响组织的机能。

5、提起标本时，应一手用镊子夹住椎骨片，一手拿住股骨，使神经处于松驰状态。

[异常现象讨论]

1、标本制成后，刺激坐骨神经不能引起腓肠肌收缩。

其原因可能在制作过程中神经干受了过分牵拉、钳夹、污物浸蚀或干燥，致使标本使失效了活性。

2、剪断脊柱时剪得过低，致使坐骨神经起始端被剪断。

这也是同学们在操作过程中多见的异常现象。

我们体会在剪除躯干上部及内脏时，可改用剪开腹壁，把内脏往头端翻拉，由腹腔暴露脊柱，再以粗剪刀剪断脊柱，这样可避免剪断坐骨神经起始端。

[思考题]

1、利用神经肌肉标本进行实验，属于那一类实验方法？

这点方法的特点和意义如何？

2、如何制备一个较好的坐骨神经腓肠肌标本？

实验四蛙肠系膜微循环观察

[目的要求]通过观察蛙系膜微循环血管结构与血流情况以区分微循环内部的小动脉、毛细血管和小静脉。

学时2

[提问]

1、什么叫微循环？

2、微循环中血流通路有那些？

[原理]蛙类的肠系膜很薄，在显微镜上可直接观察其血液循环。

这样在观察中，可根据微循环血管结构的特点和血流特点区分出小动脉、毛细血管和小静脉。

[实验用品]显微镜，有孔蛙板，蛙类手术器械，大头针，20%氨基甲酸乙酯溶液，任氏液等。

[实验对象]蟾蜍或蛙

[方法步骤]

1、取蛙（或蟾蜍）一只，用20%氨基甲酸乙酯进行皮下淋巴囊注射，剂量是每克体重2mg，约10—15分钟进入麻醉状态。

2、将蛙固定在蛙板上（背位或腹位均可），于下腹部旁侧剪开一长形切口，轻轻拉出一段小肠半，用大头针数枚将肠系膜展开并固定于有孔蛙板上（图19），备以显微镜观察。

手术过程中要避免出血。

为防止肠系膜干燥，需要以任氏液湿润，但也不宜滴得太多。

3、将蛙板置显微镜载物台上，物镜对准展开之肠系膜，在低低倍显微镜下进行观察（图20）。

[观察项目]在低倍显微镜下观察到微循环血管结构特点和血流特点（见附表）。

[结果分析]

1、根据实验结果附表的内容区分小动脉、毛细血管和小静脉。

2、流体的轴流现象大致是这样形成的：

（1）液体在管道中稳定流动时，由于内部摩擦力的不同，管中心摩擦力小，流速最快，距离中心越远处流速越慢。

（2）速度大处压强小，正由于上述存的流速梯度，故在血管壁附近的压强最大，管中心的坟强最小。

这样，在一血管中的任一血细胞则受到一自血管壁垂直指向管轴的附加压力，称伯努利力，在这种力的作用下，血细胞则向着管轴流动，形成轴流现象。

显微镜下微循环血管结构特点和血流特点

动脉

小动脉

毛细血管

小静脉

静脉

血管壁

厚、有肌