发酵分析试验教案.docx

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发酵分析试验教案

《发酵分析》试验教案

试验一酿造用水硬度分析（2学时）

一、教学目的:

掌握配位滴定法分析水硬度的操作技术。

二、重点与难点:

学习EDTA标准溶液的标定过程；掌握指示剂铬黑T的使用条件和终点变化

三、主要内容:

1.原理:

水硬度主要是由水中钙盐、镁盐引起的，故硬度一般指水中钙离子、镁离子的浓度。

水的硬度高就是指水中钙离子、镁离子浓度高。

按钙、镁成盐形式不同，水的硬度分为碳酸盐硬度（又称暂时硬度）和非碳酸盐硬度（又称永久硬度）。

水的硬度表示方法有好几种，常用的表示方法是以度为单位：

1L水中含有钙、镁等盐的总量相当于10mgCaO时，称为1度。

按照硬度的大小，可将水质分为下列几类：

水质的分类

 WaterQualityClass

名称

（Name）

极软水

（Verysoftwater）

软水

（Softwater）

中等水

（Moderatelyhardwater）

硬水

（Hardwater）

极硬水

（Veryhardwater）

硬度（Hardness）

0～4.2

4.2～8.4

8.4～16.8

16.8～28.0

>28.0

EDTA（乙二胺四乙酸）其二钠盐可与水中钙离子、镁离子生成可溶性无色配合物,指示剂铬黑T也能与钙离子、镁离子配位,生成酒红色配合物。

但EDTA与钙离子、镁离子的配合物更稳定。

当在水样中加入蓝色的铬黑T后，生成铬黑T钙、镁配合物，而使溶液呈酒红色。

再用EDTA滴定时，由于EDTA与钙离子、镁离子的配合能力强于铬黑T，故能将铬黑T钙、镁配合物中的钙离子、镁离子夺出来，进行配位，生成无色的EDTA钙、镁配合物，致使铬黑T游离出来，溶液从酒红色突变为蓝色，即为滴定终点。

2.试剂：

①0.01mol/L乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2）标准滴定溶液：

称取4gC10H14N2O8Na2·2H2O，用水加热溶解，冷却后用水定容至1000mL。

a.标定:

称取基准ZnO1g（准确到0.0001g），用少量水润湿，加6mol/L的HCl溶液至样品溶解，移入250mL容量瓶中，用水稀释定容。

移取该溶液25mL，加70mL水，用10%NH3·H2O中和pH至7-8，加10mLpH10NH4OH-NH4Cl缓冲液，加5滴1%铬黑T指示剂，用待标定的EDTA-Na2溶液滴定至溶液由紫色变为纯蓝色。

同时做试剂空白试验。

b.计算：

c（C10H14N2O8Na2·2H2O）=m/0.08138×（V1-V2）

式中：

c（C10H14N2O8Na2·2H2O）：

EDTA-Na2标准滴定溶液的实际浓度，mol/L；

V1：

滴定消耗EDTA-Na2标准滴定溶液的体积，mL；

V2：

空白试验消耗EDTA-Na2标准滴定溶液的体积，mL；

m：

ZnO的质量

0.08138:

与1.00mLEDTA-Na2标准滴定溶液〔c（EDTA）=1.000mol/L〕相当的以克表示的氧化锌的质量。

②PH10NH4OH-NH4Cl缓冲溶液：

称取5.4gNH4Cl溶于水中，加35mL浓NH3·H2O，用水稀释定容至100mL。

③1%铬黑T指示剂：

称

取1g铬黑T和1g盐酸羟胺，溶于100mL无水乙醇中。

3.测定方法

⑴总硬度的测定：

移取50mL水样，置于250mL三角瓶中，加5mLPH10NH4OH-NH4Cl缓冲溶液和5滴1%铬黑T指示剂，用0.01mol/LEDTA-Na2标准滴定溶液滴定至蓝色。

⑵永久硬度的测定：

移取50mL水样，置于250mL三角瓶中，煮沸10min，用滤纸过滤，滤液用250mL三角瓶接收，用水充分洗涤滤纸，使滤液接近50mL，加5mLPH10NH4OH-NH4Cl缓冲溶液和5滴1%铬黑T指示剂，用0.01mol/LEDTA-Na2标准滴定溶液滴定至蓝色。

4.计算

总硬度=cV1×28.04×1/50×1/10×1000

永久硬度=cV2×28.04×1/50×1/10×1000

暂时硬度=总硬度-永久硬度

C：

EDTA-Na2标准滴定溶液的实际浓度，mol/L；

V1：

总硬度测定时消耗EDTA-Na2标准滴定溶液的体积，mL；

V2：

永久硬度测定时消耗EDTA-Na2标准滴定溶液的体积，mL；

28.04:

与1.00mLEDTA-Na2标准滴定溶液〔c（EDTA）=1.000mol/L〕相当的以克表示的氧化钙的质量，mg。

5.讨论

①滴定过程为什么要缓慢进行？

②如果铬黑T在水样中变白色或浑浊的玫瑰色，该怎么办？

是什么原因引起的？

试验二Glu的制备（2学时）

一、教学目的：

学会由味精制备谷氨酸的方法,加深对谷氨酸发酵下游技术的认识。

二、重点与难点：

掌握酸碱滴定的操作步骤。

三、主要内容：

1.原理：

谷氨酸与适量的碱发生中和反应生成L-谷氨酸一钠——味精,

味精与盐酸作用生成谷氨酸。

2.实验材料与仪器：

味精、浓HCl、烧杯、精密酸性PH试纸、纱布、玻棒、干燥箱。

3.实验步骤（配50mL水中加35g味精）

①在烧杯中配制味精饱和溶液，然后缓慢加入一定量浓盐酸，边搅拌边检测溶液的PH值。

②当PH值3.0-3.2左右时,停止加浓盐酸，低温静止30min,谷氨酸沉淀出现。

③如果上清液比较少，考虑用纱布过滤后放进干燥箱干燥；如果上清液比较多，直接倒去部分上清或用纱布过滤后放进干燥箱干燥。

（干燥一周左右后，称量固体粉末）

4.实验结果:

根据加入的味精质量和得到的谷氨酸的质量，计算出谷氨酸的大概得率。

5.讨论：

为什么要缓慢加浓盐酸？

试验三Glu的检测（2学时）

一、教学目的：

学会纸层析方法定性检测样品中氨基酸含量的操作步骤。

二、重点与难点：

掌握Rf值的计算方法。

三、主要内容：

1.原理：

样品经纸层析分离、显色后，由于不同氨基酸色斑的Rf值不同,因此，可依据Rf值大小定性。

样品中谷氨酸色斑与标准谷氨酸色斑的Rf值大小一致。

2.实验材料与仪器：

干燥箱，滤纸，针管，铅笔，直尺，一次性手套，正丁醇，冰醋酸，茚三酮。

3.实验步骤：

①配制展开剂：

正丁醇:

冰醋酸:

水=5:

3:

2（V/V/V）（20-30mL），展开剂中含有0.4%的茚三酮（W/V）。

②层析纸的准备:

裁取高度约为15cm的滤纸，宽度依样品数量而定，注意滤纸的纤维方向与长边一致。

在距滤纸短边边线2cm处用铅笔画一直线，每隔1cm设一点样点，写上点样标记。

③点样:

用微量进样器将氨基酸标准液和处理好的待测谷氨酸样品（浓度2%）点在层析滤纸的相应点样点上，自然晾干或用电吹风吹干，点样点直径控制在4mm内。

④展开及显色:

将点好样的滤纸用钉书机（或绳子）将两端固定，使滤纸成圆筒状，置于装有5mm深展开剂的层析缸内，当展开剂前沿离滤纸上端1厘米时将滤纸取出，直接放在80℃的烘箱中烘烤15min显色。

4.实验结果：

根据标准谷氨酸和样品中谷氨酸色斑的位置、色斑的亮度来判断样品中谷氨酸的有无以及谷氨酸的含量。

5.讨论：

测定过程中为什么要使滤纸、溶剂温度等保持恒定？

试验四啤酒色度的测定（2学时）

一、教学目的：

学会分光光度法和目视比色法测定啤酒的色度。

二、重点与难点：

掌握分光光度法和目视比色法测定啤酒色度的操作过程。

三、主要内容：

分光光度法：

1.啤酒的色泽愈深，则在一定波长下的吸光值愈大，因此可通过吸光度的测定求得啤酒的色度。

测试时用1/2min比色杯，在波长430nm下测得吸光度，并换算成啤酒色度。

2.材料与仪器：

可见光分光光度计；1cm比色杯

3.操作步骤：

将除气并澄清的啤酒酒样注入1cm比色杯中，以蒸馏水作空白，用可见光分光光度计在波长430nm测定其吸光度A值。

4.结果计算：

X=10×1.27×A430×2.65－1.2

式中：

X—啤酒色度，EBC单位；

10—1/2in比色杯在波长430nm下测得的吸光度值转化为啤酒样品色度的转化系数；

1.27--1cm比色杯换算成1/2in比色杯的系数；

A430--在波长430nm测得的吸光度；

2.65—换算成EBC单位的经验数据；

1.2—校正系数。

目视比色法：

1.原理：

啤酒色度的测定以碘液消耗量为标准，取100ml水，向其中滴加0.1mol/L碘液，滴至溶液颜色与啤酒色泽一样，所消耗的碘液体积即为啤酒色度。

2.试剂与仪器：

0.1mol/L碘标准溶液，比色管。

3.测定步骤：

选取直径、色泽、管壁厚度均相同的比色管2支，1支准确加入100ml啤酒试样，另一支准确加入100ml水，将2支比色管并列放在白纸上面，置光亮处，用1ml吸管向盛水的比色管内逐滴滴入0.1mol/L碘标准溶液，边滴边搅拌，直至2支比色管色泽相同，记录消耗碘液体积。

4.计算：

X=Vc/0.1

式中：

X--啤酒色度，用0.1mol/L碘标准溶液滴定100ml啤酒试样所消耗碘液的体积，ml；

V--滴定消耗碘液的体积，ml；

c—标定后碘液的浓度，mol/L。

讨论：

2种方法测得的啤酒色度值是否一致？

为什么？

试验五玉米粉中粗纤维素的测定（2学时）

一、教学目的：

掌握测定发酵原料中纤维素含量的方法步骤。

二、重点与难点：

掌握对原料进行加酸和加碱处理时的操作方法。

三、主要内容：

1.原理:

在热的稀硫酸作用下，样品中的糖、淀粉、果胶等物质经水解而除去，再用热的氢氧化钾处理，使蛋白质溶解，脂肪皂化而除去，然后用乙醇和乙醚处理来除去单宁、色素及残余的脂肪，所得的残渣为粗纤维素，如其中含有无机物质，可通过测定灰分扣除。

2.仪器和试剂

仪器:

电子天平,电热恒温水浴锅,电热恒温鼓风干燥箱,回流装置,抽提装置

试剂:

1.25%硫酸溶液:

量取7.1ml硫酸，缓慢倒入适量水中，并用水稀释至1000ml；1.25%氢氧化钠溶液：

称取1.25g氢氧化钠，用水溶解并定容至1000ml；

乙醚；乙醇。

3测定方法

①乙醇处理：

准确称量5-10g玉米粉试样，置入500ml磨口三角瓶中。

加入200ml乙醚，盖严，静置24小时，以除去脂肪，用倾泻法除去乙醚层，并用乙醚洗涤残渣，残存少量的乙醚在水浴中蒸发除去。

②加酸处理：

加200ml煮沸的1.25%硫酸溶液于上述500ml三角瓶中，安上冷凝器，在沸水浴中回流30分钟，取下锥形瓶，3000-3500r/min离心10-15分钟，用热水洗涤沉淀至上清液呈中性。

③加碱处理：

将残渣用煮沸的1.25%氢氧化钠溶液转入500ml磨口三角瓶中，补足1.25%氢氧化钠溶液至200ml，安上冷凝器，加热使之微沸，回流30分钟，取下锥形瓶，用4层纱布过滤，用热水洗涤残渣至滤液呈中性，再分别用乙醇、乙醚洗涤一次。

④干燥、灼烧：

将残渣于100-105干燥箱中干燥至恒重，然后再灼烧至恒重。

4.计算

粗纤维素（以绝干计）=（（m1-m2）/m）×（1/（1-w））×100%

式中m1---试样与坩埚干燥至恒重的质量，g;

m2---试样与坩埚灼烧至恒重（灰分）的质量，g；

m-----试样的质量，g；

w----风干试样的水分，g；

5.讨论

①测定玉米粉计玉米秸秆中的粗纤维素，应先测定其中的水分，因其参与纤维素的计算。

②用离心机高速离心，可以解决过去用麻布过滤时，由于其孔径不均匀，测定结果重现性较差的现象。

③国产粗纤维测定仪，一次测定6个样品，在操作上仅需90分钟，（酸碱处理、抽提、洗涤）。

试验六0.1000mol/L碘标准溶液的配制与标定（2学时）

一、教学目的：

掌握0.1000mol/L碘标准溶液的配制与标定步骤。

二、重点与难点：

掌握0.05mol/LNa2S2O3标准滴定溶液的配制与标定过程。

三、主要内容：

1.原理：

先用基准物质K2Cr2O7标定Na2S2O3溶液，再用标定好的Na2S2O3溶液滴定配好的碘液，根据消耗的Na2S2O3溶液体积计算出碘标准溶液的浓度。

2.试剂：

Na2S2O3·5H2O，Na2CO3，K2Cr2O7，KI，H2SO4，0.5%淀粉指示剂，I2。

配制0.5%淀粉指示剂：

称取0.5g可溶性淀粉于100mL烧杯中，用少量水调成糊状，倒入70mL沸水，继续煮沸2min，冷却后用水定容至100mL（临用前现配）。

3.方法：

①c（Na2S2O3）=0.05mol∕L硫代硫酸钠标准滴定溶液：

称取13gNa2S2O3·5H2O和0.1g碳酸钠（Na2CO3），溶于刚煮沸冷却后的蒸馏水中，并用该水定容至1000mL，贮于棕色瓶中密闭保存，放置1周后标定使用。

a．标定：

称取基准物K2Cr2O70.05g（K2Cr2O7预先在130℃干燥2h，准确至0.0001g）置于500mL碘量瓶中，用25mL新煮沸并冷却的水溶解，加1gKI及10mLc（1∕2H2SO4）=2mol∕L的H2SO4溶液，待KI溶解后，于暗处放置10min，加150mL水，用配好的Na2S2O3溶液滴定，接近终点时，加3mL0.5%淀粉指示剂，继续滴定到溶液由蓝色变为亮绿色时为终点。

同时做试剂空白实验。

b．计算

c（Na2S2O3）=m∕（V1-V2）×0.04903

式中c（Na2S2O3）----硫代硫酸钠标准滴定溶液的实际浓度，mol∕L；

m----基准物K2Cr2O7的质量，g；

V1----滴定消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液的体积，mL；

V2----试剂空白消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液的体积，mL；0.04903----与1.00mL硫代硫酸钠标准滴定溶液[c（Na2S2O3）=1.000mol∕L]相当的重铬酸钾的质量，g；

②c（1∕2I2）=0.1mol∕L碘标准滴定溶液：

称取36gKI溶于50mL水中,在不断搅拌下加入13g碘（I2），完全溶解后用水稀释定容至1000mL，贮于棕色瓶，密闭、避光保存。

a．标定：

用已标定的c（Na2S2O3）=0.05mol/LNa2S2O3标准滴定溶液标定碘标准滴定溶液。

吸取10.00mL待标定的I2溶液于250mL碘量瓶中，用已标定过的c（Na2S2O3）=0.05mol/LNa2S2O3溶液滴定至淡黄色时，加2-3滴0.5%淀粉指示剂，继续滴定至无色即为终点。

b．计算

c（1/2I2）=cv/10.00

式中c（1/2I2）----碘标准滴定溶液的实际浓度，mol/L；

c----Na2S2O3标准滴定溶液的实际浓度，mol/L；

V----滴定消耗Na2S2O3标准滴定溶液的体积，mL；

10.00----吸取碘标准滴定溶液的体积，mL；

4.讨论：

①结晶的Na2S2O3·5H2O一般含有少量杂质，同时还容易分化潮解，需用间接法配制。

Na2S2O3容易受空气中的O2、溶解在水中的CO2、微生物和光照等作用而分解。

它在碱性介质中较稳定。

所以配制溶液时，为了减少溶解在水中的CO2和杀灭水中的微生物，使用新煮沸的冷蒸馏水配制溶液，并加入少量碳酸钠，其浓度约为0.02%，以维持溶液的微碱性，防止Na2S2O3的分解。

日光能促使Na2S2O3溶液分解，故Na2S2O3溶液贮于棕色瓶中，并放置暗处。

长期保存的溶液，应每隔一段时间重新标定。

如发现溶液变浑浊（表面有固体析出）时，就应过滤后标定，或重新配制。

保存得好，可每两个月标定一次。

②标定Na2S2O3溶液，常选用强氧化剂如KIO3、KBrO3或K2Cr2O7等作基准物质，这些物质均能与KI反应析出定量的I2。

试验七碘量法测定维C含量（2学时）

一、教学目的：

掌握碘量法测定样品中维C含量的操作步骤。

二、重点与难点：

掌握碘量法测定维C含量的原理。

三、主要内容：

维生素C在乙酸的酸性条件下，可被碘定量氧化。

根据消耗碘标准滴定溶液的体积，即可计算出维生素C的含量。

1、原理：

维生素C在乙酸的酸性条件下，可被碘定量氧化。

根据消耗碘标准滴定溶液的体积即可计算维生素C的体积，即可计算维生素C的含量。

2、仪器和试剂

①、仪器电子天平

②、试剂

a.c（1/2I2）=0.1000mol／L碘标准滴定液（配制见实验六）

b.1％淀粉指示剂（配制见实验六）

c.c（CH3COOH=1mol／L乙酸溶液取6ml冰醋酸用水稀释定容至100ml

3、测定方法

称取试样0.2g（称准至0.0001g）于500ml三角瓶中，加新煮沸过的冷水100ml与1mol／L乙酸溶液10ml使之溶解，加淀粉指示剂1.0ml，立即用碘标准滴定液滴定至溶液显蓝并在30s内不褪色,记录消耗c（1/2I2）=0.1000mol／L碘标准滴定液的体积。

4、计算

1mlc（1/2I2）=0.1000mol／L碘标准滴定液相当于8.806mg的维生素C（C6H8O6）

5、讨论

（1）操作中加入1mol／L乙酸溶液可使滴定在酸性溶液中进行。

因在酸性介质中维生素C受空气中氧的氧化速度减慢，但样品溶于稀酸后仍需立即进行滴定。

（2）加入新煮沸过的冷水的目的是为了减少水中氧对测定的影响

（3）中国药典采用本方法对维生素C原料、片剂、泡腾片、颗粒和注射剂进行含量测定，为消除制剂中辅料对测定的干扰，滴定前要进行必要的处理。

如片剂溶解后应过滤，取滤液测定；注射液测定时要加2ml丙酮，以消除注射液中含有的抗氧化剂亚硫酸氢钠对测定结果的影响。

试验八蒸馏酒中总醛的测定（2学时）

一、教学目的：

掌握化学分析法测定蒸馏酒中总醛含量的操作步骤。

二、重点与难点：

掌握化学分析法测定蒸馏酒中总醛含量的原理。

三、主要内容：

1.原理:

白酒中醛类的羰基与亚硫酸氢钠可起加成反应，反应中剩余的亚硫酸氢钠可用I2氧化，过量的I2用Na2S2O3标准溶液滴定，从空白试验值与酒样值之差求得醛的含量。

2.试剂：

1CNa2S2O3（硫代硫酸钠）=0.05mol/L硫代硫酸钠标准滴定溶液称取13gNa2S2O3晶体和0.1gNa2CO3，溶于刚煮沸冷却后的蒸馏水中，并用该水定容至1000ml，贮于棕色瓶中密闭保存，放置1周后标定使用。

2CNaHSO3（亚硫酸氢钠）=0.025mol/LNaHSO3溶液称取2.6gNaHSO3，用水溶解并定容至1000ml（该试剂不稳定，须现用现配）。

3C（

）=0.1mol/L碘标准滴定溶液称取36gKI溶于50ml水中，在不断搅拌下加入13gI2，完全溶解后用水稀释定容至1000mL，贮于棕色瓶，密闭、避光保存。

40.5%淀粉指示剂称取0.5g可溶性淀粉于1000ml烧杯中，用少量水调成糊状，倒入70℃沸水，继续煮沸2min，冷却后用水定容至1000ml（临用前现配）。

3.测定方法：

吸取待测酒样50.0ml，置于250ml碘量瓶中，准确加入20.00mlC（NaHSO3）=0.025mol/LNaHSO3溶液，于暗处反应30min，其间需经常摇动以利反应进行。

准确加入25.0mlC（

）=0.1mol/L碘标准滴定溶液，摇匀，立即用C（Na2S2O3）=0.05mol/LNa2S2O3标准滴定溶液滴定至浅黄色，加1.00ml0.5%淀粉指示剂，再继续滴定至蓝色消失。

同时做试剂空白试验，不加酒样，其余操作同上。

4.计算：

总醛（以乙醛计，g/100ml）=（V-

）×C（Na2S2O3）×0.2203×100/50.0

式中V----试样测定时消耗Na2S2O3标准滴定溶液的体积，ml；

---空白试验时消耗Na2S2O3标准滴定溶液的体积，ml；

C（Na2S2O3）----Na2S2O3标准滴定溶液的实际浓度，mol/L；

0．2203----与1.00mlNa2S2O3标准滴定溶液[c（Na2S2O3）=1.000mol/L]相当的乙醛的质量，g。

5.讨论：

NaHSO3极不稳定，用后需密封防潮；NaHSO3溶液要现用现配，然后用C（

）=0.1mol/L碘标准溶液滴定；用Na2S2O5（偏重亚硫酸钠）代替NaHSO3效果较好，因为Na2S2O5较NaHSO3稳定得多，且作用相同。

试验九蒸馏酒中总脂的测定（2学时）

一、教学目的：

掌握测定蒸馏酒中总脂含量的操作步骤。

二、重点与难点：

掌握测定蒸馏酒中总脂含量的原理。

三、主要内容：

1.原理：

先用碱（NaOH）中和蒸馏酒中的游离酸，再加入一定量的碱（NaOH）使脂皂化，过量的碱（NaOH）再用酸（H2SO4）进行反滴定，然后计算出脂的含量。

2NaOH+H2SO4＝Na2SO4+2H2O

2.仪器和试剂

（1）仪器电子天平（0.1mg）；电热恒温水浴锅；全玻璃回流装置（250ml）。

（2）试剂

C（NaOH）=0.1mol/L标准滴定溶液称取4gNaOH,用水溶解并稀释定容至1000mL.

a.标定：

准确称取0.4g（称准至0.0001g）邻苯二甲酸氢钾（预先于120℃烘2h）,置入250mL三角瓶中，加50mL水使其溶解，加2滴0.5%酚酞指示剂，用待标定的NaOH溶液滴定至微红色，30s不褪色即为终点。

同时做一空白试验。

b.计算

式中m－邻苯二甲酸氢钾的质量，g;

V1—滴定消耗NaOH标准滴定溶液的体积，mL；

V2—空白试验消耗NaOH标准滴定溶液的体积，ml;

0.2042—与1.00mlNaOH标准滴定溶液[c（NaOH）=1.000mol/L]相当的邻苯二甲酸氢钾的质量，g。

c（1/2H2SO4）=0.1mol/LH2SO4标准滴定溶液量取2.8ml浓H2SO4，用水稀释至1000ml.

a标定：

吸取20.00,ml待标定的硫酸溶液，置入150ml三角瓶中，加2滴0.5%酚酞指示剂，用已标定过C（NaOH）=0.1mol/LNaOH标准滴定溶液滴定至微粉色，30s不褪色即为终点。

b．计算

式中

—硫酸标准滴定溶液的实际浓度，mol/L;

C（NaOH）—NaOH标准的滴定溶液的实际浓度，mol/L;

V—消耗NaOH标准滴定溶液的体积，ml。

0.5%酚酞指示剂称取0.5g酚酞，溶于100ml95%乙醇中。

3.测定方法

吸取酒样50.0ml置于250ml磨口三角瓶中，加入2滴0.5%酚酞指示剂，用C（NaOH）=0.1mol/LNaOH标准滴定溶液滴定至微粉色，切忌过量{记录消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积V1（ml）}.再准确加入C（NaOH）=0.1mol/LNaOH标准滴定溶液25.00ml，摇匀，置沸水浴中回流30min（用球形冷凝管），取下后冷却至室温，用c（1/2H2SO4）=0.1mol/LH2SO4标准滴定溶液进行反滴定，使微红色刚好完全消失为终点，记录消耗c（1/2H2SO4）=0.1mol/LH2SO4标准滴定溶液的体积V2（ml）。

4.计算

总酯（以乙酸乙酯计，g/L）

式中C（NaOH）—NaOH标准的滴定溶液的实际浓度，mol/L;

25.00—皂化时加入NaOH标准滴定溶液的体积，ml;

—硫酸标准滴定溶液的实际浓度，mol/L;

V2—反滴定时消耗硫酸标准滴定溶液的体积，ml;

0.08812—与1.00mlNaOH标准滴定溶液[c（NaOH）=1.000mol/L]相当的乙酸乙酯的质量，g。

50.0—取样体积，ml;

结果的允许误差：

同一样品两次测量的结果相差不得超过0.006g/L,结果保留两位小数。

5.讨论

（1）.皂化时加入NaOH的量，视白酒中总酯的含量而定，如总酯含量大于0.4%时，0.1mol/LNaOH溶液需加入30ml。

皂化条件的改变影