药品生物检定技术.ppt

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全国高职高专药品类专业第二轮规划教材全国高职高专药品类专业第二轮规划教材药物分析药物分析第第八章八章药品生物检定技术简介药品生物检定技术简介Page2药品生物检定技术是指利用生物体（微生物、药品生物检定技术是指利用生物体（微生物、细胞、离体组织或动物）对药物的特定药理、细胞、离体组织或动物）对药物的特定药理、毒理作用，来测定生物药品的效价、检查药品毒理作用，来测定生物药品的效价、检查药品中的有害物质以及对制剂进行微生物限度或无中的有害物质以及对制剂进行微生物限度或无菌检查的技术方法菌检查的技术方法Page3无菌检查无菌检查微生物限度检查微生物限度检查抗生素效价的微生物检定法抗生素效价的微生物检定法生化药物效价的生物测定法生化药物效价的生物测定法药品的安全性检查药品的安全性检查Page4第第一一节节无菌检查无菌检查Page5概述概述无菌检查法无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料系用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否及其他品种是否无菌无菌的一种方法。

的一种方法。

将药品或材料，在严格的无菌操作条件下，接种于适合各将药品或材料，在严格的无菌操作条件下，接种于适合各种微生物生长的不同培养基中，置于不同的适宜温度下培养种微生物生长的不同培养基中，置于不同的适宜温度下培养一定的时间，逐日观察微生物的生长情况，并结合阳性和阴一定的时间，逐日观察微生物的生长情况，并结合阳性和阴性对照试验的结果，判断供试品是否无菌。

性对照试验的结果，判断供试品是否无菌。

包括包括薄膜过滤法薄膜过滤法和和直接接种法直接接种法两种方法两种方法Page6一、常规技术要求一、常规技术要求1.1.应应在环境洁净度在环境洁净度1000010000级以下的级以下的局部洁净度局部洁净度100100级的单向流级的单向流空空气区域内或隔离系统中进行检查。

气区域内或隔离系统中进行检查。

2.2.全全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染。

过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染。

3.3.单向单向流空气区、工作台面及环境应定期按流空气区、工作台面及环境应定期按医药工业洁净室医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标的现行国家标准进行洁净度验证。

准进行洁净度验证。

Page7二、培养基二、培养基

（一）培养基的种类：

（一）培养基的种类：

7种种硫乙醇酸盐流体培养基（需氧菌、厌氧菌培养基）硫乙醇酸盐流体培养基（需氧菌、厌氧菌培养基）改良马丁培养基（真菌培养基）改良马丁培养基（真菌培养基）选择性培养基选择性培养基0.5%葡萄糖肉汤培养基（用于硫酸链霉素等抗生素的无菌葡萄糖肉汤培养基（用于硫酸链霉素等抗生素的无菌检查）检查）营养肉汤培养基营养肉汤培养基营养琼脂培养基营养琼脂培养基改良马丁琼脂培养基改良马丁琼脂培养基Page8二、培养基二、培养基

（二）培养基的适用性二）培养基的适用性检查检查证明证明：

培养基无菌，且能保证细菌生长良好：

培养基无菌，且能保证细菌生长良好1.无菌性检查无菌性检查无菌性检查无菌性检查每批培养基随机取不少于每批培养基随机取不少于5支（瓶），培养支（瓶），培养14天，应无菌生长天，应无菌生长Page9二、培养基二、培养基

（二）培养基的适用性检查

（二）培养基的适用性检查2.灵敏度检查灵敏度检查灵敏度检查灵敏度检查方法：

取每管装量为方法：

取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种支，分别接种小于小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各生孢梭菌各2支，另支，另1支不接种作为空白对照，培养支不接种作为空白对照，培养3天；取每管装天；取每管装量为量为9ml的改良马丁培养基的改良马丁培养基5支，分别接种小于支，分别接种小于100cfu的白色念珠的白色念珠菌、黑曲霉各菌、黑曲霉各2支，另支，另1支不接种作为空白对照，培养支不接种作为空白对照，培养5天。

逐日观天。

逐日观察结果。

察结果。

结果判断：

空白对照管无菌生长，加菌培养基管均生长良好，判结果判断：

空白对照管无菌生长，加菌培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定该培养基的灵敏度检查符合规定Page10二、培养基二、培养基

（二）培养基的适用性检查

（二）培养基的适用性检查适用性检查的菌种：

适用性检查的菌种：

金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌生孢梭菌生孢梭菌白色念珠菌白色念珠菌黑曲霉黑曲霉图片取自青岛海博生物技术有限公司图片取自青岛海博生物技术有限公司Page11三、方法验证试验三、方法验证试验建立产品的无菌检查法时，应进行方法的验证建立产品的无菌检查法时，应进行方法的验证证明所采用的方法适合于该产品的无菌检查证明所采用的方法适合于该产品的无菌检查排除供试品是否具有抑细菌和抑真菌作用排除供试品是否具有抑细菌和抑真菌作用避免假阴性结果避免假阴性结果方法方法：

薄膜：

薄膜过滤过滤法、直接法、直接接种法接种法Page12四、无菌检查法四、无菌检查法

（一）检验数量及检验量

（一）检验数量及检验量中国药典中国药典现行版附录现行版附录批批出厂产品最小检验数量出厂产品最小检验数量表表液体液体制剂最小检验量及上市抽验样品的最少检验数制剂最小检验量及上市抽验样品的最少检验数量量表表固体固体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验数制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验数量量表表Page13四、无菌检查法四、无菌检查法

（二）对照试验

（二）对照试验1.1.阳性对照阳性对照必须长菌，用以证明微生物确实可在应用的试验条件下生长必须长菌，用以证明微生物确实可在应用的试验条件下生长根据供试品特性选择阳性对照菌根据供试品特性选择阳性对照菌无抑菌作用和抗革兰阳性菌为主的供试品，以金黄色葡萄无抑菌作用和抗革兰阳性菌为主的供试品，以金黄色葡萄球菌为对照菌球菌为对照菌抗革兰阴性菌为主的供试品，以大肠埃希菌为对照菌抗革兰阴性菌为主的供试品，以大肠埃希菌为对照菌抗厌氧菌的供试品，以生孢梭菌为对照菌抗厌氧菌的供试品，以生孢梭菌为对照菌抗真菌的供试品，以白色念珠菌为对照菌抗真菌的供试品，以白色念珠菌为对照菌阳性对照管培养阳性对照管培养48487272小时应生长良好小时应生长良好Page14四、无菌检查法四、无菌检查法

（二）对照试验

（二）对照试验2.2.阴性对照阴性对照不得长菌，用以检查试验过程中使用的溶剂、稀释液、不得长菌，用以检查试验过程中使用的溶剂、稀释液、冲洗液等对微生物生长及存活无影响冲洗液等对微生物生长及存活无影响Page15四、无菌检查法四、无菌检查法（三）检查方法（三）检查方法1.1.薄膜过滤法薄膜过滤法通过滤膜过滤，将供试品中可能存在的微生物富集于通过滤膜过滤，将供试品中可能存在的微生物富集于滤膜上，再冲洗掉滤膜上的抑菌成分后，在薄膜过滤滤膜上，再冲洗掉滤膜上的抑菌成分后，在薄膜过滤器滤筒内加入培养基，在所需温度下培养，观察是否器滤筒内加入培养基，在所需温度下培养，观察是否有菌生长有菌生长Page16四、无菌检查法四、无菌检查法（三）检查方法（三）检查方法2.2.直接接种法直接接种法3.3.培养及观察培养及观察将含培养基的容器在规定的温度培养将含培养基的容器在规定的温度培养1414天，逐日观察天，逐日观察并记录是否有菌生长。

必要时可转种及涂片并记录是否有菌生长。

必要时可转种及涂片Page17五、无菌检查结果判断五、无菌检查结果判断（三）检查方法（三）检查方法1.1.阳性对照管应生长良好，阴性对照管阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生长。

否则，试验无效。

不得有菌生长。

否则，试验无效。

2.2.若供试品管显澄清，或虽显浑浊但经若供试品管显澄清，或虽显浑浊但经确证无菌生长，判供试品符合规定。

确证无菌生长，判供试品符合规定。

3.3.若供试品管中任何一管显浑浊并确证若供试品管中任何一管显浑浊并确证有菌生长，判供试品不符合规定，除非有菌生长，判供试品不符合规定，除非能充分证明试验结果无效，即生长的微能充分证明试验结果无效，即生长的微生物非供试品所含。

生物非供试品所含。

4.4.试验若经确认无效，需依法重试。

试验若经确认无效，需依法重试。

Page18第第二二节节微生物限度检查微生物限度检查Page19微生物限度检查法微生物限度检查法系检查系检查非规定灭菌制剂非规定灭菌制剂及其原料、辅料受到及其原料、辅料受到微生物污染程度的方法，检查项目包括微生物污染程度的方法，检查项目包括细细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。

微生物限度检查成为微生物限度检查成为非规定灭菌制剂非规定灭菌制剂保证药保证药品质量的重要检查内容，也是综合评价药品质量的重要检查内容，也是综合评价药品生产各环节卫生状况的一个依据。

品生产各环节卫生状况的一个依据。

Page20一、常规技术要求及检验量一、常规技术要求及检验量

（一）技术要求

（一）技术要求1.检查应在环境洁净度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内级的单向流空气区域内进行。

检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。

进行。

检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。

2.单向流空气区域、工作台面及环境应定期按单向流空气区域、工作台面及环境应定期按医药工业洁净室（区）悬医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行洁净度验证。

的现行国家标准进行洁净度验证。

3.供试品检查时，如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其有供试品检查时，如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其有效性及对微生物无毒性。

效性及对微生物无毒性。

4.细菌培养温度为细菌培养温度为3035；霉菌、酵母菌培养温度为；霉菌、酵母菌培养温度为2328；控制菌；控制菌培养温度为培养温度为3537。

5.检验结果以检验结果以1g、1ml、10g、10ml或或10cm2为单位报告，特殊品种可以最为单位报告，特殊品种可以最小包装单位报告。

小包装单位报告。

Page21一、常规技术要求及检验量一、常规技术要求及检验量

（二）检验量

（二）检验量一次试验所用的供试品量一次试验所用的供试品量（g、ml或或cm2）。

除另有规定外，一般。

除另有规定外，一般供试品的检验量为供试品的检验量为10g或或10ml；膜剂为；膜剂为100cm2；贵重药品、微；贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。

要求检查沙门菌的供试品，其量包装药品的检验量可以酌减。

要求检查沙门菌的供试品，其检验量应增加检验量应增加20g或或20ml。

检验时，应从检验时，应从2个以上最小包装单位中抽取供试品，膜剂还不个以上最小包装单位中抽取供试品，膜剂还不得少于得少于4片。

一般应随机抽取不少于检验用量（两个以上最小片。

一般应随机抽取不少于检验用量（两个以上最小包装单位）的包装单位）的3倍量供试品。

倍量供试品。

Page22二、样品供试液的制备二、样品供试液的制备中国药典中国药典现行版附录中提供了液体供试品、固体、现行版附录中提供了液体供试品、固体、半固体或黏稠性供试品以及需用特殊方法制备供试液半固体或黏稠性供试品以及需用特殊方法制备供试液的供试品的供试液制备方法。

的供试品的供试液制备方法。

需用特殊方法制备供试液的供试品有：

非水溶性供试需用特殊方法制备供试液的供试品有：

非水溶性供试品、膜剂供试品、肠溶及结肠溶制剂供试品、气雾剂、品、膜剂供试品、肠溶及结肠溶制剂供试品、气雾剂、喷雾剂供试品及具抑菌活性的供试品。

喷雾剂供试品及具抑菌活性的供试品。

Page23三、菌种及培养基三、菌种及培养基

（一）菌种

（一）菌种1.1.细菌、霉菌、酵母菌计数检查的对照试验菌种细菌、霉菌、酵母菌计数检查的对照试验菌种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌白色念