高效液相色谱法同时测定染发剂中9种氧化型染料图文精.docx

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高效液相色谱法同时测定染发剂中9种氧化型染料图文精

染发剂是一类含有染料的化妆品。

根据其染色后的牢固程度,染发剂可分为暂时性、半永久性和永久性三类。

其中永久性染发剂染发原料又可分为氧化染料、还原染料和仿天然黑素染料。

氧化染料是合成染料中最早用于毛发染色的,也是目前应用最广泛的持久性染发剂原料。

氧化型染发剂以其染色效果好、色调变化宽、维持时间长等诸多优点而成为最受欢迎的染发剂。

但氧化型染发剂主要由氧化型染料和氧化剂组成。

染发剂中的染料成分多属于芳香胺类化合物,芳香胺中有很多物质具有致癌性,所以染发剂的安全性一直受到人们的极大关注。

由染发剂引起的过敏反应非常普遍,长期使用还可能致畸、致突变、致癌及引起内分泌效应等。

目前对染发剂中氧化型染料的检测方法主要包括气相色谱法

、气质联用法和液相色谱法。

为了加强对该类产品中氧

化型染料的监管,中华人民共和国卫生部颁布的《化妆品卫生规范》（2007年版明确规定了93种暂时允许使用的染发剂,并规定了限量要求。

文章在相关文献及《化妆品卫生规范》（2007年版方法的基础上,建立了一种高效液相色谱同时检测染发剂中9种氧化型染料的方法。

该方法前处理简单、快捷,检测灵敏,有效地提高了检测效率。

1.1.1试剂

对苯二胺、对氨基苯酚、间苯二胺、对苯二酚、甲苯-2,5二胺硫酸盐、间氨基苯酚、邻苯二胺、间苯二酚、对甲氨基苯酚硫酸盐均为分析纯;乙腈（色谱纯;超纯水,甲醇（分析纯,其他试剂除特别标注外均为分析纯。

1.1.2仪器

WatersAlliance2695HPLC高效液相色谱仪（配紫外检测器,美国沃特世公司;AvantiJ-E冷冻高速离心机,美国贝克曼公司;Milli-Q超纯水纯化系统,美国Millipore公司;分析天平,德国赛多利斯公司;涡旋混合器;超声波振荡器。

1.2.1标准溶液的配制

准确称取对苯二胺等9种氧化型染料样品各0.25g,各加入0.1g亚硫酸钠（精确至0.01g,其中对苯二胺、对氨基苯酚、间苯二胺、对苯二酚、间氨基苯酚、邻苯二胺、间苯二酚等7种氧化型染料样品加入甲醇使之溶解,并在100mL容量瓶中定容至刻度;甲苯-2,5-二胺硫酸盐和对甲氨基苯酚

[1-

2]

[3]

[4]

[5]1实验部分

1.1试剂与仪器

1.2实验方法

摘要:

关键词:

中图分类号:

文献标识码:

文章编号:

文章建立了染发剂中9种氧化型染料的高效液相色谱检测方法。

样品经甲醇提取、离心和过滤后,经高效液相色谱分离检测。

方法对不同氧化型染料的检测限低于40ug/g;9种氧化型染料空白样品加标回收率为72.7%~108.0%,相对标准偏差不大于3%,9种氧化型染料在0.050mg/mL~2mg/mL浓度范围内呈良好的线性关系,线性回归系数r均大于0.99。

高效液相色谱法;氧化型染料;染发剂doi:

10.3696/j.issn.1007-550X.2010.04.001O657.72A1007-550X（201004-0032-03

高效液相色谱法同时测定染发剂中9种

氧化型染料

黄红霞

（福建省中心检验所,福建福州350002;

国家加工食品质量监督检验中心,福建福州350002

收稿日期:

作者简介:

2010-03-05

黄红霞（1965-,女,高级工程师,研究方向:

食品安全分析。

黄红霞:

高效液相色谱法同时测定染发剂中9种氧化型染料

硫酸盐用水溶解并定容至刻度。

1.2.2样品提取

称取样品于50ml具塞闭塞管,加入1ml2%亚硫酸钠、25ml甲醇,涡旋振荡30s,再加入15ml甲醇,混匀,超声提取15min,用甲醇定容至刻度,充分混匀后,静置,上清液经0.45μmPTFE滤膜后上机测试。

1.2.3液相色谱条件

色谱柱为XBC18柱（5μm、4.6150柱温:

35℃;流动相:

A为纯乙腈,B为三乙醇胺磷酸缓冲溶液（准确移取10.0mL三乙醇胺溶解于1L水中,用HPO调节pH值8.5,经过0.45滤膜过滤。

洗脱程序为梯度洗脱（见表1。

流速1mL/min;进样量5μL。

参考相关文献,同时通过紫外分光光度计扫描200~600nm,发现9种氧化型染料在280.0nm处均具有较大吸收,因此实验选择280nm作为检测波长对染发剂中9种氧化型染料进行检测。

通过化学结构的分析,9种氧化型染料可以采用C18色谱柱、C8柱或苯基柱分离。

实验采用C18柱对9种染发剂标准品及其空白加标样品进行分析,获得良好的分离,具有较好的峰型。

并且比较了不同流动相组成、梯度洗脱条件及不同进样体积对色谱峰分离及峰型的影响。

实验采用乙腈-三乙醇胺磷酸缓冲溶液（pH8.5作为流动相。

并通过调节不同流动相比例及洗脱程序（见表1,获得较好的色谱分离。

同时试验表明进样量5μL可获得较好的峰型和色谱峰分离效果,色谱峰达到基线分离。

而随着进样体积的增加色谱峰展宽加大,色谱峰分离度降低。

（见图1

实验比较了不同极性提取溶剂（包括水、甲醇、乙醇和95%乙醇对染发剂中9种氧化型染料的提取效果。

资料表明,对苯二胺、对氨基苯酚、间苯二胺、对苯二酚甲苯、间氨基苯酚、邻苯二胺、间苯二酚在极性溶剂中有较大溶解性,而2,5二胺硫酸盐、对甲氨基苯酚硫酸盐易溶于水,同时甲醇对上述氧化型染料的溶解性明显强于乙醇,且色谱峰型较好,无明显拖尾。

因此在试验过程中我们通过甲醇溶解对苯二胺、对氨基苯酚、间苯二胺、对苯二酚甲苯、间氨基苯酚、邻苯二胺、间苯二酚,纯水溶解2,5二胺硫酸盐、对甲氨基苯酚硫酸盐。

并且鉴于氧化型染料易氧化,不稳定等特点,在配置标准溶液和提取样品时均加入一定量的亚硫酸钠,减缓目标组分的氧化。

实验还比较了不同时间（5、10、15、30min对超声提取效果的影响,实验表明超声时间为15min时获得满意的提取效果。

Xmm;μm

34

2结果与讨论

2.1液相色谱条件的选择2.2样品的提取

Time（min0

6

17

20

20.1

25Flowrate

1

1

1

1

1

1

A%

99

99

90

65

99

99

B%

1

1

10

35

1

1

表1液相色谱测定染发剂中9种氧化型染料的梯度洗脱条件

图1空白样品（A、标准品（B、空白加标样品（B

中9种氧化型染料的液相色谱图

（1:

对苯二胺;2:

对氨基苯酚;3:

间苯二胺;4:

对苯二

酚;5:

甲苯-2,5-二胺硫酸盐;6:

间氨基苯酚;7:

邻苯二

胺;8:

间苯二酚;9:

对甲氨基苯酚

2.3分析方法确证

2.3.1选择性实验

通过空白染发剂样品及9种氧化型染料标准品及实际样品加标实验表明,在9种氧化型染料标准品色谱保留时间无明显干扰峰存在,该分析检测方法无明显干扰。

2.3.2标准曲线与检测限

配制不同浓度的标准溶液,作出9种氧化型染料的线性方程（见表2,其线性范围为0.050mg/mL到2mg/mL。

按信噪比S/N为3计,方法中目标组分的检测限不高于40ng/g。

2.3.3回收率

取空白染发剂样品进行标准添加实验,每个添加样做3个平行试验,样品回收率为72.7%~108.0%,相对标准偏差不大于3%。

具体试验结果见表3。

文章建立了染发剂中9种氧化型染料含量的液相色谱同时检测方法,可有效满足检验部门、卫生质量检验部门对染发剂中氧化型染料的快速检测的需要,同时可应用于相关化妆产品的检测。

为严格质量管理和监控提供必要的技术支持,提高产品质量水平,保障人民身体健康。

[1]周桦,张国棋,高岩,刘洪英,龙峰.气相色谱法测定

氧化型染发剂中化学物质[J].中国公共卫生,2003,19,996.

[2]李海涛,吴平谷.气相色谱法测定氧化型染发剂中染料

[J].中国卫生检验杂志2002,12:

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染发剂中的多种染料中间体[J].色谱,2005,23:

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[4]王骏,胡俊明.高效液相色谱法测定化妆品中的染料

[J].色谱,1999,17:

486.

[5]化妆品卫生规范[S].北京:

中华人民共和国卫生部,2007.3结论

参考文献:

序号1

2

3

4

5

6

7

8

9目标组份

对苯二胺

对氨基苯酚

间苯二胺

对苯二酚

甲苯2,5二胺硫酸盐

间氨基苯酚

邻苯二胺

间苯二酚

对甲氨基苯酚硫酸盐

线性方程

Y=1.73e+003X+2.12e+003

Y=2.71e+003X-1.23e+003

Y=3.25e+003X+2.03e+004

Y=4.63e+003X+2.90e+004

Y=9.35e+002X+4.55e+003

Y=4.65e+003X+2.90e+004

Y=5.42e+003X+1.47e+004

Y=4.49e+003X+1.82e+004

Y=1.42e+003X+1.13e+004

r

0.998

0.997

0.998

0.998

0.998

0.999

0.999

0.997

0.998

2

表29种氧化型染料的检测线性方程及线性回归系数

表3染发剂中9种氧化型染料的加标回收率和精密度（n=3

序号

123456789目标组份

对苯二胺

对氨基苯酚

间苯二胺

对苯二酚

甲苯2,5二胺硫酸盐

间氨基苯酚

邻苯二胺

间苯二酚

对甲氨基苯酚硫酸盐

回收率%

86.2

87.6

84.6

90.2

84.2

89.5

108.0

98.5

84.4

精密度%

3.0

1.0

2.6

0.45

1.1

0.6

1.8

0.6

0.6

回收率%

72.7

74.6

72.7

75.5

73.3

75.7

77.1

76.6

74.2

精密度%

1.0

0.8

1.3

1.2

0.8

1.1

0.5

0.5

0.7

回收率%

85.1

86.1

83.5

88.1

84.1

86.7

88.4

88.3

86.1

低浓度（100ppb中浓度（200ppb高浓度（400ppb

精密度%

1.0

1.4

2.1

1.0

1.8

0.4

0.3

0.7

0.5