高效液相色谱法同时测定染发剂中9种氧化型染料图文精.docx

1、高效液相色谱法同时测定染发剂中9种氧化型染料图文精染发剂是一类含有染料的化妆品。根据其染色后的牢固程度,染发剂可分为暂时性、半永久性和永久性三类。其中永久性染发剂染发原料又可分为氧化染料、还原染料和仿天然黑素染料。氧化染料是合成染料中最早用于毛发染色的,也是目前应用最广泛的持久性染发剂原料。氧化型染发剂以其染色效果好、色调变化宽、维持时间长等诸多优点而成为最受欢迎的染发剂。但氧化型染发剂主要由氧化型染料和氧化剂组成。染发剂中的染料成分多属于芳香胺类化合物,芳香胺中有很多物质具有致癌性,所以染发剂的安全性一直受到人们的极大关注。由染发剂引起的过敏反应非常普遍,长期使用还可能致畸、致突变、致癌及引

2、起内分泌效应等。目前对染发剂中氧化型染料的检测方法主要包括气相色谱法、气质联用法和液相色谱法。为了加强对该类产品中氧化型染料的监管,中华人民共和国卫生部颁布的化妆品卫生规范(2007年版明确规定了93种暂时允许使用的染发剂,并规定了限量要求。文章在相关文献及化妆品卫生规范(2007年版方法的基础上,建立了一种高效液相色谱同时检测染发剂中9种氧化型染料的方法。该方法前处理简单、快捷,检测灵敏,有效地提高了检测效率。1.1.1试剂对苯二胺、对氨基苯酚、间苯二胺、对苯二酚、甲苯-2,5二胺硫酸盐、间氨基苯酚、邻苯二胺、间苯二酚、对甲氨基苯酚硫酸盐均为分析纯;乙腈(色谱纯;超纯水,甲醇(分析纯,其他试

3、剂除特别标注外均为分析纯。1.1.2仪器Waters Alliance 2695HPLC高效液相色谱仪(配紫外检测器,美国沃特世公司;Avanti J-E 冷冻高速离心机,美国贝克曼公司;Milli-Q超纯水纯化系统,美国Millipore公司;分析天平,德国赛多利斯公司;涡旋混合器;超声波振荡器。1.2.1标准溶液的配制准确称取对苯二胺等9种氧化型染料样品各0.25g,各加入0.1g亚硫酸钠(精确至0.01g,其中对苯二胺、对氨基苯酚、间苯二胺、对苯二酚、间氨基苯酚、邻苯二胺、间苯二酚等7种氧化型染料样品加入甲醇使之溶解,并在100mL容量瓶中定容至刻度;甲苯-2,5-二胺硫酸盐和对甲氨基苯

4、酚1-23451实验部分1.1试剂与仪器1.2实验方法摘要:关键词:中图分类号:文献标识码:文章编号:文章建立了染发剂中9种氧化型染料的高效液相色谱检测方法。样品经甲醇提取、离心和过滤后,经高效液相色谱分离检测。方法对不同氧化型染料的检测限低于40ug/g;9种氧化型染料空白样品加标回收率为72.7%108.0%,相对标准偏差不大于3%,9种氧化型染料在0.050mg/mL2mg/mL浓度范围内呈良好的线性关系,线性回归系数r均大于0.99。高效液相色谱法;氧化型染料;染发剂doi :10.3696/j.issn.1007-550X.2010.04.001O657.72A 1007-550X(

5、201004-0032-03高效液相色谱法同时测定染发剂中9种氧化型染料黄红霞(福建省中心检验所,福建福州350002;国家加工食品质量监督检验中心,福建福州350002收稿日期:作者简介:2010-03-05黄红霞(1965-,女,高级工程师,研究方向:食品安全分析。黄红霞:高效液相色谱法同时测定染发剂中9种氧化型染料 硫酸盐用水溶解并定容至刻度。1.2.2样品提取称取样品于50ml具塞闭塞管,加入1ml2%亚硫酸钠、25ml甲醇,涡旋振荡30s,再加入15ml甲醇,混匀,超声提取15min,用甲醇定容至刻度,充分混匀后,静置,上清液经0.45mPTFE滤膜后上机测试。1.2.3液相色谱条件

6、色谱柱为XB C18柱(5m、4.6150柱温: 35;流动相:A为纯乙腈,B为三乙醇胺磷酸缓冲溶液(准确移取10.0mL三乙醇胺溶解于1L水中,用H PO调节pH值8.5,经过0.45滤膜过滤。洗脱程序为梯度洗脱(见表1。流速1mL/min;进样量5L。参考相关文献,同时通过紫外分光光度计扫描200 600nm,发现9种氧化型染料在280.0nm处均具有较大吸收,因此实验选择280nm作为检测波长对染发剂中9种氧化型染料进行检测。通过化学结构的分析,9种氧化型染料可以采用C18色谱柱、C8柱或苯基柱分离。实验采用C18柱对9种染发剂标准品及其空白加标样品进行分析,获得良好的分离,具有较好的峰

7、型。并且比较了不同流动相组成、梯度洗脱条件及不同进样体积对色谱峰分离及峰型的影响。实验采用乙腈-三乙醇胺磷酸缓冲溶液(pH8.5作为流动相。并通过调节不同流动相比例及洗脱程序(见表1,获得较好的色谱分离。同时试验表明进样量5L可获得较好的峰型和色谱峰分离效果,色谱峰达到基线分离。而随着进样体积的增加色谱峰展宽加大,色谱峰分离度降低。(见图1实验比较了不同极性提取溶剂(包括水、甲醇、乙醇和95%乙醇对染发剂中9种氧化型染料的提取效果。资料表明,对苯二胺、对氨基苯酚、间苯二胺、对苯二酚甲苯、间氨基苯酚、邻苯二胺、间苯二酚在极性溶剂中有较大溶解性,而2,5二胺硫酸盐、对甲氨基苯酚硫酸盐易溶于水,同时

8、甲醇对上述氧化型染料的溶解性明显强于乙醇,且色谱峰型较好,无明显拖尾。因此在试验过程中我们通过甲醇溶解对苯二胺、对氨基苯酚、间苯二胺、对苯二酚甲苯、间氨基苯酚、邻苯二胺、间苯二酚,纯水溶解2,5二胺硫酸盐、对甲氨基苯酚硫酸盐。并且鉴于氧化型染料易氧化,不稳定等特点,在配置标准溶液和提取样品时均加入一定量的亚硫酸钠,减缓目标组分的氧化。实验还比较了不同时间(5、10、15、30min对超声提取效果的影响,实验表明超声时间为15min时获得满意的提取效果。X mm;m342结果与讨论2.1液相色谱条件的选择2.2样品的提取Time(min 06172020.125Flow rate111111A%

9、999990659999B%11103511表1液相色谱测定染发剂中9种氧化型染料的梯度洗脱条件图1空白样品(A、标准品(B、空白加标样品(B中9种氧化型染料的液相色谱图(1:对苯二胺;2:对氨基苯酚;3:间苯二胺;4:对苯二酚;5:甲苯-2,5-二胺硫酸盐;6:间氨基苯酚;7:邻苯二胺;8:间苯二酚;9:对甲氨基苯酚 2.3分析方法确证2.3.1选择性实验通过空白染发剂样品及9种氧化型染料标准品及实际样品加标实验表明,在9种氧化型染料标准品色谱保留时间无明显干扰峰存在,该分析检测方法无明显干扰。2.3.2标准曲线与检测限配制不同浓度的标准溶液,作出9种氧化型染料的线性方程(见表2,其线性范围

10、为0.050mg/mL到2mg/mL。按信噪比S/N为3计,方法中目标组分的检测限不高于40ng/g。2.3.3回收率取空白染发剂样品进行标准添加实验,每个添加样做3个平行试验,样品回收率为72.7%108.0%,相对标准偏差不大于3%。具体试验结果见表3。文章建立了染发剂中9种氧化型染料含量的液相色谱同时检测方法,可有效满足检验部门、卫生质量检验部门对染发剂中氧化型染料的快速检测的需要,同时可应用于相关化妆产品的检测。为严格质量管理和监控提供必要的技术支持,提高产品质量水平,保障人民身体健康。1周桦,张国棋,高岩,刘洪英,龙峰.气相色谱法测定氧化型染发剂中化学物质J.中国公共卫生,2003,

11、19,996.2李海涛,吴平谷.气相色谱法测定氧化型染发剂中染料J.中国卫生检验杂志2002,12:435.3朱英,杨艳伟,李静.气相色谱-质谱法同时测定氧化型染发剂中的多种染料中间体J.色谱,2005,23:566.4王骏,胡俊明.高效液相色谱法测定化妆品中的染料J.色谱,1999,17:486.5化妆品卫生规范S.北京:中华人民共和国卫生部,2007. 3结论参考文献:序号123456789目标组份对苯二胺对氨基苯酚间苯二胺对苯二酚甲苯2,5二胺硫酸盐间氨基苯酚邻苯二胺间苯二酚对甲氨基苯酚硫酸盐线性方程Y=1.73e+003X+2.12e+003Y=2.71e+003X-1.23e+003

12、Y=3.25e+003X+2.03e+004Y=4.63e+003X+2.90e+004Y=9.35e+002X+4.55e+003Y=4.65e+003X+2.90e+004Y=5.42e+003X+1.47e+004Y=4.49e+003X+1.82e+004Y=1.42e+003X+1.13e+004r0.9980.9970.9980.9980.9980.9990.9990.9970.9982表29种氧化型染料的检测线性方程及线性回归系数表3染发剂中9种氧化型染料的加标回收率和精密度(n=3序号1 2 3 4 5 6 7 8 9目标组份对苯二胺对氨基苯酚间苯二胺对苯二酚甲苯2,5二胺硫酸盐间氨基苯酚邻苯二胺间苯二酚对甲氨基苯酚硫酸盐回收率%86.287.684.690.284.289.5108.098.584.4精密度%3.01.02.60.451.10.61.80.60.6回收率%72.774.672.775.573.375.777.176.674.2精密度%1.00.81.31.20.81.10.50.50.7回收率%85.186.183.588.184.186.788.488.386.1低浓度(100ppb中浓度(200ppb高浓度(400ppb精密度%1.01.42.11.01.80.40.30.70.5