PBS缓冲液配制方法.docx

1、PBS缓冲液配制方法PBS缓冲液配方不管是免疫组化，还是细胞培养中，常用到PBS缓冲液，下面 是我 们实验室的配方，供大家参考。我们实验室的配方：A液：0. lmol/L磷酸二氢钾：磷酸二氢钾(KH2P04, MW136. 09)1. 361g,加双蒸水至 100ml。B液:0. lmol/L磷酸氢二钠：酸酸氢二钠(Na2HP04. 2H20, MW177. 99)1. 78g,加双蒸水至 100ml。或者酸酸氢二钠(Na2HP04. 12H20, MW358. 14) 3. 58g,加双蒸水至 100ml pH A 液(ml) B 液(ml)5.60 9. 50 0. 255.91 9. 0

2、0 1. 006.24 8.00 2. 006.47 7.00 3.006. 64 6. 00 4. 006.81 5.00 5.006.98 4. 00 6. 007.17 3.00 7. 007.38 2. 00 8. 00 7. 73 1. 00 9. 008.04 0. 50 9. 50一般免疫组化用 PBS都只包含Na2HP04?12H20 (磷酸氢二钠)NaH2P04?2H20 (磷酸二氢钠)Nacl 用于细胞培养的PBS需含有氯化钾称取 8g NaCl 0. 2g KCI、1. 44g Na2HP04 禾口 0. 24g KH2P04,溶于800ml蒸惚水中，用HC1调节溶液的p

3、H值至7.4,最后加蒸惚水定 容至1L即可0. 01MPBS 缓 冲 液称取 NaCI 8g, KCI 0. 2g, Na2HP04?12H203. 63g, KH2P04 0. 24g, 溶于 900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至7. 4,加水定容至IL,常温 保存备用。PBS是最普遍不过的实验室缓冲液，但其配方各异。以下是我的总结：母液的配制：0. 2M Na2HPO4 :称取 71. 6g Na2HPO4-12H2O,溶 于1000ml 水0. 2M NaH2P04 : 称 取 31. 2g NaH2P04-2H20, 溶 于 1000ml 水各种 浓度PB(pH=7. 4) 的配制：先

4、 配 0. 2M PB (pH=7. 4100ml)取 19ml 0. 2mol/L的 NaH2P04 , 81ml 0. 2mol/L 的 Na2HP04,即 可 然后 只需将 0 2M PB(pH=7. 4)按相应比例适当稀释即可，如:0. IM PB ( ph二7. 4)500ml 0. 2M PB ,加水稀释至1000ml0. 01M PB ( PH=7. 4 )50ml 0. 2M PB ,加水稀释至1000ml0. 02M PB ( PH=7. 4) 可100ml 0. 2 M PB,加水稀释至1000ml要NaCL的加 入 NaCL 至 0 9% ( g/100ml)即可。另：其

5、它各种另PH值的pH0. 2M NaH2P04(ml )5.793.56.55.89285.990106.087.712.36. 185156.281.518.56.377.522.56.473.526.56.568.531.56.662.537.50. 2M PB ( 100ml)0. 2M Na2HP04 (ml )6. 756. 543.6.851496.945557.038627. 133677.228727.323777.419ml81m7.516847.613877. 710.50.57.88.591. 57.97938.05. 394.75磷酸盐缓冲液(Phosphate Buf

6、fer, PB,磷酸氢二钠和磷酸二氢钠缓 冲液 配方磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffer, PB)试剂：NaH2P04 2H20 Na2HP04 12H20配制方法:配制时，常先配制0. 2mol/L的NaH2P04和02mol/L的Na2HP04,两者按一定比例混合即成 0. 2mol/L的磷酸盐缓冲液(PB),根据需要可配制不同浓度的PB和PBS。(1 ) 0. 2mol/L 的 Na2HP04;称取 Na2HP04. 12H20 31.2g(或NaH2P04 H20 27. 6g)加重蒸水至 1000ml 溶解。(2)0. 2mol/L 的 Na2HP04:称取 NaHP04.

7、 12H2O 71. 632g (或 Na2HP047H20 53. 6g 或 Na2HPO4 2H20 35. 6g)加重蒸水至 1000ml 溶解。(3)0. 2mol/L pH7. 4 的 PB 的配制：取 19ml 0. 2mol/L 的 NaH2PO4 和81ml 0. 2mol/L 的 Na2HP04 12H20,充分混合即为 0 2mol/L 的 PB(pH约为7. 47. 5)。若pH偏高或偏低，可通过改变二者的比例 来加以 调整，室温保存即可。0. 2mol/L磷酸盐缓冲液(PH5.78.0)pH 0. 2mol/L NaH2P04(ml) 0. 2mol/L Na2HP04

8、(ml)5. 793.56. 55.892.08.05.990.010.06.087.712.36. 185.015.06.281.518.56.377.522.56.473.526.56.568.531.56.662.537.56. 756.543.56.851.049.06.945.055.07.039.061.07. 133.067.07.228.072.07.323.067.07.419.081.07.516.084.07.613.087.07. 710. 589.57.88.591.57.97.093.08.05.394. 7关于磷酸缓冲溶液的知识，我在网上搜索了好多帖子，但是还是不

9、能确定正确的答案。现在把他们链接过来，希望有高手们参与讨论，我 会把最终的正确解答整理出来，提供给大家。PBS可以为三种溶液的英文缩写，分别是1 磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffered solution2.磷酸盐缓冲盐水（phosphate buffered saline 及3.磷酸盐缓冲钠（phosphate buffered sodium ,其配制方法不同，pH值不同，发挥的生物学作用亦不完全相同。如无特殊说明，生物学上常用的PBS是中性磷酸盐缓冲溶液(phosp hate buffered solution)。无钙镁离子磷酸缓冲盐水(PBS)(0. 15Mol/L PH 7

10、. 2)NaCl 8. OgKC1 0. 2gNa2HP04 1. 15g(如为 Na2HP04 12H20,则为 2. 89g)KH2PO4 0. 2g将上述试剂依次溶于1 000ml去离子水中，完全溶解后，115C高压 灭菌 10minl5min,存在4C冰箱中备用。此液可用于配制和稀释细 胞分散剂以 及洗涤细胞培养物。我们用的都是第二种问题1：磷酸盐缓冲盐水(phosphate buffered sodium),为什么用第三种或第一种呢：这么多年以来我都以为PBS就是磷酸盐缓冲溶液，其 他两种说法的英语名称常见到，不过我一直都以为他们是差不多的东 西。不同的汉语翻译倒是第一次听说。我们公

11、司用的PBS有很多种，抗体组用的中和PBS配方就比较简 单，没有K+离子，只起到缓冲PH的作用；Na2HP04+ KH2PO4按照不同比例混匀，可以得到不同PH的缓冲液，用于不同目的，这 个在 分子生物学中用得很多； 用于活细胞或者细菌处理的，为了保持渗透压，会加入其他的溶液，最常见的就是 NaCI和KCI调节离 子浓度。以上是个人的理解，欢迎批评。：问题2:既然抗体组的PB S是 起到缓冲PH的作用，那加入80G的NACL作用是什么？需要 平衡渗透压 吗？还有加入K离子的是不是因为细胞上NA-K泵的原 因啊，血清里面又 没有细胞，何来NA-K泵一说啊？我觉得之所以这么配，其实就是对血清 中缓

12、冲环境的一种模拟罢了，血清里面又没有细胞，何来NA-K泵一说 啊？我没说血清撒。我们用的又没加K,我是说加了 K的的 问题3:不加NACL会怎么样啊？多省钱啊在中和磷酸盐缓冲液中，NaCI的主要作用应当是保持一定的离子浓度， 以维持抗体的活性。在离子浓度过高或过低的情况下，蛋白质都会变 性，抗体当然不例外。ps:哺乳类需用生理盐水浓度是0. 9%o称取0.9克氯化钠，溶解在少 量蒸 憾水中，稀释到100毫升。鸟类需用的生理盐水浓度是0. 75%O称取0.75克氯化钠，溶解后用 蒸憾 水稀释到100毫升。两栖类需用的生理盐水浓度是0. 65%o称取0.65克氯化钠，溶解后用蒸憾水稀释到100毫升。/size /font