高效液相色谱二极管阵列检测器法测定水蜜桃中水溶性有机酸和维精.docx

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高效液相色谱二极管阵列检测器法测定水蜜桃中水溶性有机酸和维精.docx

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高效液相色谱二极管阵列检测器法测定水蜜桃中水溶性有机酸和维精

南京农业大学学报　2009,32（1:

151-154JournalofNanjingAgriculturalUniversity

http:

//nauxb1njau1edu1cn

刘小莉,周剑忠,董明盛,等.高效液相色谱-二极管阵列检测器法测定水蜜桃中水溶性有机酸和维生素的含量[J].南京农业大学学报,2009,32（1:

151-154

高效液相色谱-二极管阵列检测器法测定水蜜桃中

水溶性有机酸和维生素的含量

刘小莉1

周剑忠1

董明盛2

黄开红

（1.江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京210014;2.南京农业大学食品科学技术学院,江苏南京210095

摘要:

采用高效液相色谱-二极管阵列检测器法（HPLC2DAD同时检测水蜜桃中水溶性有机酸和维生素含量。

样品经

纯水超声波提取、离心和膜过滤,ZORBAXSB-C18（416mm×250mm,5μm液相色谱柱分离,以015mmol・L-1磷

酸-乙腈梯度洗脱,流速018mL・min-1;二极管阵列检测器（DAD同时以210nm波长检测苹果酸、柠檬酸、琥珀酸,254nm波长检测烟酸、维生素C、维生素B1,270nm波长检测维生素B2。

结果显示:

待测成分在8min内达到良好的基线分离,线性范围广,苹果酸、柠檬酸、琥珀酸的检出限为015μg・mL-1,烟酸、维生素C、维生素B1的检出限为

011μg・mL

-1

维生素B2的检出限为0105μg・mL-1

。

方法的加标回收率为9710%~10213%,线性相关系数为019993~

019999,精确度平均偏差0133%~1197%。

该方法适用于水蜜桃样品中多种水溶性有机酸和维生素的同时测定。

关键词:

高效液相色谱;多波长;有机酸;维生素

中图分类号:

TS20713　　　文献标志码:

A　　　文章编号:

1000-2030（200901-0151-04

Determinationofwater2solubleorganicacidsand

vitaminsinjuicypeachusingHPLC2DAD

LIUXiao2li1

ZHOUJian2zhong1

DONGMing2sheng2

HUANGKai2hong

（1.

InstituteofAgriculturalProductsProcessing,JiangsuAcademyofAgriculturalSciences,Nanjing210014,China;2.CollegeofFoodScienceandTechnology,NanjingAgriculturalUniversity,Nanjing210095,China

Abstract:

Amethodwasestablishedtodeterminewater2solubleorganicacidsandvitaminsinjuicypeach,includingmalicacid,citricacid,succnicacid,nicotinicacid,vitaminC,vitaminB1andvitaminB2.Thepeachwasextractedbyultrasonicinwater,

centrifugedandfiltered.Thechromatographiccolumn,ZORBAXSB2C18（416mm×250mm,5μm,gradient015mmol・L

-1

H3PO42acetonitrilemobilephaseat018mL・min-1

flowrate,anddiode2arraydetection（DAD（210nm,254nmand270nm

wereadopted.Thesamplewasisolatedwellin8minandhadawidelinearrange.

Thedetectionlimitofmalicacid,citricacid

andsuccnicacidwas015μg・mL

-1

nicotinicacid,vitaminCandvitaminB1011μg・mL-1

andvitaminB20105μg・mL-1

Theaveragerecoveriesofthemethodwere9710%-10213%.Thecorrelationcoefficientsofregressionequationswere019993-019999.Themethodwassuitableforthedeterminationoforganicacidsandvitaminsinpeach.Keywords:

HPLC;multi2wavelength;organicacid;vitamin

水蜜桃是一种营养价值很高的水果,以其形美、色艳、味佳、肉细、皮韧易剥、汁多甘厚、味浓香溢、入口即化等特点而驰名中外,含有蛋白质、脂肪、糖、钙、磷、铁、多种有机酸和维生素等营养成分[1]。

样品中有机酸和维生素的检测,文献已有报道,如分光光度法[2-3]

、电泳法

[4]

、微生物测定

法

[5]

、高效液相色谱法

[6-7]

等,但由于各组分的检测方法和条件差别较大,需分批多次检测,非常繁

琐。

7、8月份是水蜜桃成熟的集中季节,本研究采用高效液相色谱-二极管阵列检测器（HPLC2DAD同时检测两种无锡水蜜桃样品中的水溶性有机酸和维生素,旨在建立一种简单、快捷的方法,为水蜜桃采收、储存期间及出口贸易的品质控制提供依据。

收稿日期:

2007-12-10

基金项目:

江苏省农业科学院科研基金项目（6510723

作者简介:

刘小莉,博士,研究方向为食品生物技术,E2mail:

liuxl1981@yahoo1com1cn。

通讯作者:

黄开红,研究员,研究方向为生

物技术,Tel:

025-********。

1　材料与方法

111　材料

11111　样品和试剂　水蜜桃样品:

品系为小湖景和红花,由无锡阳山水蜜桃科技园管理委员会提供。

标准品试剂:

苹果酸、柠檬酸、琥珀酸、烟酸、维生素C、维生素B

1、维生素B

购于中国药品生物

制品检定所。

其他试剂:

色谱纯乙腈（山东禹王实业有限公司,分析纯磷酸（上海化学试剂有限公司,纯净水（娃哈哈集团。

11112　主要仪器和设备　Agilent1100型高效液相色谱仪（配有二极管阵列检测器、液相色谱工作站等,色谱柱ZORBAXSB-C

（416mm×250mm,5μm,Agilent;UP3200H超声波仪（熊猫集团南京电子计量有限公司。

112　方法

11211　标准溶液的配制　准确称取标准品,以纯净水溶解定容至100mL,配制成5mg・mL-1的标准储备液,4℃保存。

使用时以纯净水稀释成适当浓度的混合工作液。

11212　样品的前处理　称取水蜜桃果肉200g,加入少量纯净水打浆,100W超声波处理20min,3000r・min-1离心15min,取上清液定容至200mL;再取少量溶液12000r・min-1离心10min,上清液过0145μm滤膜,待进样检测。

11213　高效液相色谱法检测　柱温30℃;进样量20μL;流动相:

0min时100%015mmol・L-1磷酸,在6min内梯度变换为015mmol・L-1磷酸和乙腈混合液（体积比为60∶40,流速018mL・min-1;二极管阵列检测器波长为210、254和270nm。

2　结果与分析

211　色谱测定条件

　　通过二极管阵列检测器在波长190~900nm范围内进行光谱扫描,结果显示苹果酸、柠檬酸和琥珀

酸在210nm左右吸收值较大;维生素C、维生素B

1和烟酸在254nm处有最大吸收值;维生素B

在

270nm处吸收最强,因此设置二极管阵列检测器为多波长同时检测,分别以210nm检测苹果酸、柠檬

酸和琥珀酸,以254nm检测维生素C、维生素B

1和烟酸,以270nm检测维生素B

。

本研究所测定的多种有机酸和维生素均为水溶性物质,采用磷酸-乙腈梯度洗脱,0min时流动相为100%015mmol・L-1磷酸,6min内等梯度变换为015mmol・L-1磷酸和乙腈混合液（体积比为60∶40,流速018mL・min-1,可以实现待测组分的良好分离（图1。

212　标准曲线

将混合标准储备液以纯净水梯度稀释,每个浓度梯度进样3次,进样量为20μL,记录峰面积。

分别以进样浓度为横坐标（X、峰面积的平均积分值（Y为纵坐标绘制标准曲线并计算回归方程,以3倍信噪比（S/N作为检出限（LOD,结果见表1,各组分在各自浓度范围内线性关系良好,线性相关系数R2>0199,检出限范围为0105~0150μg・mL-1。

表1　标准品的回归方程

Table1　Regressionequationofstandards

组分Component

回归方程

Regressionequation