高效液相色谱二极管阵列检测器法测定水蜜桃中水溶性有机酸和维精.docx
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高效液相色谱二极管阵列检测器法测定水蜜桃中水溶性有机酸和维精
南京农业大学学报 2009,32(1:
151-154JournalofNanjingAgriculturalUniversity
http:
//nauxb1njau1edu1cn
刘小莉,周剑忠,董明盛,等.高效液相色谱-二极管阵列检测器法测定水蜜桃中水溶性有机酸和维生素的含量[J].南京农业大学学报,2009,32(1:
151-154
高效液相色谱-二极管阵列检测器法测定水蜜桃中
水溶性有机酸和维生素的含量
刘小莉1
周剑忠1
董明盛2
黄开红
13
(1.江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京210014;2.南京农业大学食品科学技术学院,江苏南京210095
摘要:
采用高效液相色谱-二极管阵列检测器法(HPLC2DAD同时检测水蜜桃中水溶性有机酸和维生素含量。
样品经
纯水超声波提取、离心和膜过滤,ZORBAXSB-C18(416mm×250mm,5μm液相色谱柱分离,以015mmol・L-1磷
酸-乙腈梯度洗脱,流速018mL・min-1;二极管阵列检测器(DAD同时以210nm波长检测苹果酸、柠檬酸、琥珀酸,254nm波长检测烟酸、维生素C、维生素B1,270nm波长检测维生素B2。
结果显示:
待测成分在8min内达到良好的基线分离,线性范围广,苹果酸、柠檬酸、琥珀酸的检出限为015μg・mL-1,烟酸、维生素C、维生素B1的检出限为
011μg・mL
-1
维生素B2的检出限为0105μg・mL-1
。
方法的加标回收率为9710%~10213%,线性相关系数为019993~
019999,精确度平均偏差0133%~1197%。
该方法适用于水蜜桃样品中多种水溶性有机酸和维生素的同时测定。
关键词:
高效液相色谱;多波长;有机酸;维生素
中图分类号:
TS20713 文献标志码:
A 文章编号:
1000-2030(200901-0151-04
Determinationofwater2solubleorganicacidsand
vitaminsinjuicypeachusingHPLC2DAD
LIUXiao2li1
ZHOUJian2zhong1
DONGMing2sheng2
HUANGKai2hong
13
(1.
InstituteofAgriculturalProductsProcessing,JiangsuAcademyofAgriculturalSciences,Nanjing210014,China;2.CollegeofFoodScienceandTechnology,NanjingAgriculturalUniversity,Nanjing210095,China
Abstract:
Amethodwasestablishedtodeterminewater2solubleorganicacidsandvitaminsinjuicypeach,includingmalicacid,citricacid,succnicacid,nicotinicacid,vitaminC,vitaminB1andvitaminB2.Thepeachwasextractedbyultrasonicinwater,
centrifugedandfiltered.Thechromatographiccolumn,ZORBAXSB2C18(416mm×250mm,5μm,gradient015mmol・L
-1
H3PO42acetonitrilemobilephaseat018mL・min-1
flowrate,anddiode2arraydetection(DAD(210nm,254nmand270nm
wereadopted.Thesamplewasisolatedwellin8minandhadawidelinearrange.
Thedetectionlimitofmalicacid,citricacid
andsuccnicacidwas015μg・mL
-1
nicotinicacid,vitaminCandvitaminB1011μg・mL-1
andvitaminB20105μg・mL-1
.
Theaveragerecoveriesofthemethodwere9710%-10213%.Thecorrelationcoefficientsofregressionequationswere019993-019999.Themethodwassuitableforthedeterminationoforganicacidsandvitaminsinpeach.Keywords:
HPLC;multi2wavelength;organicacid;vitamin
水蜜桃是一种营养价值很高的水果,以其形美、色艳、味佳、肉细、皮韧易剥、汁多甘厚、味浓香溢、入口即化等特点而驰名中外,含有蛋白质、脂肪、糖、钙、磷、铁、多种有机酸和维生素等营养成分[1]。
样品中有机酸和维生素的检测,文献已有报道,如分光光度法[2-3]
、电泳法
[4]
、微生物测定
法
[5]
、高效液相色谱法
[6-7]
等,但由于各组分的检测方法和条件差别较大,需分批多次检测,非常繁
琐。
7、8月份是水蜜桃成熟的集中季节,本研究采用高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC2DAD同时检测两种无锡水蜜桃样品中的水溶性有机酸和维生素,旨在建立一种简单、快捷的方法,为水蜜桃采收、储存期间及出口贸易的品质控制提供依据。
收稿日期:
2007-12-10
基金项目:
江苏省农业科学院科研基金项目(6510723
作者简介:
刘小莉,博士,研究方向为食品生物技术,E2mail:
liuxl1981@yahoo1com1cn。
3
通讯作者:
黄开红,研究员,研究方向为生
物技术,Tel:
025-********。
1 材料与方法
111 材料
11111 样品和试剂 水蜜桃样品:
品系为小湖景和红花,由无锡阳山水蜜桃科技园管理委员会提供。
标准品试剂:
苹果酸、柠檬酸、琥珀酸、烟酸、维生素C、维生素B
1、维生素B
2
购于中国药品生物
制品检定所。
其他试剂:
色谱纯乙腈(山东禹王实业有限公司,分析纯磷酸(上海化学试剂有限公司,纯净水(娃哈哈集团。
11112 主要仪器和设备 Agilent1100型高效液相色谱仪(配有二极管阵列检测器、液相色谱工作站等,色谱柱ZORBAXSB-C
18
(416mm×250mm,5μm,Agilent;UP3200H超声波仪(熊猫集团南京电子计量有限公司。
112 方法
11211 标准溶液的配制 准确称取标准品,以纯净水溶解定容至100mL,配制成5mg・mL-1的标准储备液,4℃保存。
使用时以纯净水稀释成适当浓度的混合工作液。
11212 样品的前处理 称取水蜜桃果肉200g,加入少量纯净水打浆,100W超声波处理20min,3000r・min-1离心15min,取上清液定容至200mL;再取少量溶液12000r・min-1离心10min,上清液过0145μm滤膜,待进样检测。
11213 高效液相色谱法检测 柱温30℃;进样量20μL;流动相:
0min时100%015mmol・L-1磷酸,在6min内梯度变换为015mmol・L-1磷酸和乙腈混合液(体积比为60∶40,流速018mL・min-1;二极管阵列检测器波长为210、254和270nm。
2 结果与分析
211 色谱测定条件
通过二极管阵列检测器在波长190~900nm范围内进行光谱扫描,结果显示苹果酸、柠檬酸和琥珀
酸在210nm左右吸收值较大;维生素C、维生素B
1和烟酸在254nm处有最大吸收值;维生素B
2
在
270nm处吸收最强,因此设置二极管阵列检测器为多波长同时检测,分别以210nm检测苹果酸、柠檬
酸和琥珀酸,以254nm检测维生素C、维生素B
1和烟酸,以270nm检测维生素B
2
。
本研究所测定的多种有机酸和维生素均为水溶性物质,采用磷酸-乙腈梯度洗脱,0min时流动相为100%015mmol・L-1磷酸,6min内等梯度变换为015mmol・L-1磷酸和乙腈混合液(体积比为60∶40,流速018mL・min-1,可以实现待测组分的良好分离(图1。
212 标准曲线
将混合标准储备液以纯净水梯度稀释,每个浓度梯度进样3次,进样量为20μL,记录峰面积。
分别以进样浓度为横坐标(X、峰面积的平均积分值(Y为纵坐标绘制标准曲线并计算回归方程,以3倍信噪比(S/N作为检出限(LOD,结果见表1,各组分在各自浓度范围内线性关系良好,线性相关系数R2>0199,检出限范围为0105~0150μg・mL-1。
表1 标准品的回归方程
Table1 Regressionequationofstandards
组分Component
回归方程
Regressionequation
相关系数
Correlationcoefficient
线性范围/(mg・mL-1
Linearrange
检出限/(μg・mL-1
Limitofdetection
维生素B
1
VitaminB1Y=40234X+981916019993015~010*******维生素CVitaminCY=39719X+691631019999015~010*******
烟酸NicotinicacidY=28254X+311700019998015~010*******
维生素B
2
VitaminB2Y=40723X+1541150019968012~010*******苹果酸MalicacidY=954178X+91691019997215~010*******
柠檬酸CitricacidY=1041180X+101858019998215~010*******
琥珀酸SuccinicacidY=1790140X+81766019999215~010*******
213 回收率
称取两组水蜜桃样品,其中一组加入标准品溶液,分别按11212所述处理,加标回收试验结果见表2。
从表2可见,待测有机酸和维生素的回收率为9710%~10213%。
251 南 京 农 业 大 学 学 报 第32卷
图1 高效液相色谱图
Fig11 HPLCchromatogram
A.254nm;
B.270nm;C.210nm
①标准Standard;②样品Sample;③样品加标Sampleaddedwithstandards
1.维生素B1VitaminB1;
2.维生素CVitaminC;
3.烟酸Nicotinicacid;
4.维生素B2VitaminB2;
5.苹果酸Malicacid;
6.柠檬
酸Citricacid;7.琥珀酸Succinicacid
表2 加标回收试验结果(n=3
Table2 Recoverytestofthecomponents
组分
Component
本底平均值/(mg・mL-1
Averagebackgroundvalues
添加终浓度值/(mg・mL-1
Addedconcentrationvalues
平均测定值/(mg・mL-1
Averagedetectedvalues
平均回收率/%
Averagerecovery
维生素B1VitaminB101360×10
-3
0110010999816维生素CVitaminC
010*********烟酸010*********维生素B2VitaminB201060×10-3
010*********苹果酸Malicacid113621*********619柠檬酸Citricacid0115111001117410213琥珀酸Succinicacid
01416
1100
11387
9711
214 精密度和稳定性试验结果
取水蜜桃样品制备溶液,按照试验所确定的色谱条件分别连续进样5次,考察方法的精密度;取样品制备溶液于0、2、4、8、12、24和48h分别测定,计算日内、日间稳定性,结果见表3。
从表3可见,样品平行检测的平均偏差为0133%~1197%,不同时间内检测值的平均偏差为0135%~2141%。
表3 精密度和稳定性试验结果(相对标准偏差
Table3 Precisionandstabilitytests(relativestandarddeviation,RSD维生素B1
VitaminB1
维生素C
VitaminC烟酸
Nicotinicacid
维生素B2
VitaminB2
苹果酸
Malicacid柠檬酸
Citricacid琥珀酸
Succinicacid
精密度/%Precision
1159118011971165013311791136稳定性/%Stability
0196
2104
1136
1127
0135
2141
1187
215 样品的检测
按照试验方法提取和测定样品5次,根据标准曲线计算出水溶性维生素和有机酸的平均含量,结果见表4。
3
51第1期 刘小莉,等:
高效液相色谱-二极管阵列检测器法测定水蜜桃中水溶性有机酸和维生素的含量
表4 样品中维生素和有机酸含量的检测结果
Table4 Resultsofthedeterminationofvitaminsandorganicacidsinsamplesmg・kg-1
样品Sample维生素B
1
VitaminB1
维生素C
VitaminC
烟酸
Nicotinicacid
维生素B
2
VitaminB2
苹果酸
Malicacid
柠檬酸
Citricacid
琥珀酸
Succinicacid
小湖景Xiaohujing0175332113175011137801802890红花Honghua0116121142158011216304301810
3 讨论
二极管阵列检测器(DAD可以在一次运行中选择多个检测波长或设计一个波长时间程序同时采集不同波长的色谱图,便于对最大吸收波长不同的组分进行定性和定量[8]。
传统紫外检测器只能采取在不同波长下分别进样分析,检测工作比较繁琐且浪费检测资源,但目前利用DAD检测器实现多波长检测的报道不多[9]。
本研究利用DAD检测器对待测组分进行光谱扫描,确定各组分的最大吸收波长作为检测波长,可以提高检测方法的灵敏度,各组分的检出限都较低,保证检验结果的准确、可靠,而且大大缩短了分析时间、降低了分析成本。
磷酸盐-乙腈流动相系统在反相C
18
柱中普遍使用。
高浓度的盐会对泵和色谱柱的寿命产生影响,同时pH的大小对待测组分的分离起重要作用,本试验采用015mmol・L-1磷酸和乙腈梯度洗脱,可以较好地分离和定量水蜜桃中7种有机酸和维生素。
本研究采用纯水超声提取,提取效率高,以色谱柱ZORBAXSB-C
18
(416mm×250mm,5μm分离,用015mmol・L-1磷酸-乙腈梯度洗脱,二极管阵列检测器同时以210、254和270nm波长定性和定量检测。
方法简单易行、定量准确、灵敏度高、速度快,对于水蜜桃产品的研发和生产质量控制有实际意义。
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责任编辑:
沈 波451 南 京 农 业 大 学 学 报 第32卷