高效液相色谱二极管阵列检测器法测定水蜜桃中水溶性有机酸和维精.docx

1、高效液相色谱二极管阵列检测器法测定水蜜桃中水溶性有机酸和维精南京农业大学学报2009,32(1:151-154Journal of N anjing A gricultural U niversityhtt p:/nauxb 1njau 1edu 1cn刘小莉,周剑忠,董明盛,等.高效液相色谱-二极管阵列检测器法测定水蜜桃中水溶性有机酸和维生素的含量J .南京农业大学学报,2009,32(1:151-154高效液相色谱-二极管阵列检测器法测定水蜜桃中水溶性有机酸和维生素的含量刘小莉1,周剑忠1,董明盛2,黄开红13(1.江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京210014;2.南京农业大学食

2、品科学技术学院,江苏南京210095摘要:采用高效液相色谱-二极管阵列检测器法(HP LC 2DAD 同时检测水蜜桃中水溶性有机酸和维生素含量。样品经纯水超声波提取、离心和膜过滤,Z ORBAX S B -C 18(416mm 250mm,5m 液相色谱柱分离,以015mmol L -1磷酸-乙腈梯度洗脱,流速018mL m in -1;二极管阵列检测器(DAD 同时以210n m 波长检测苹果酸、柠檬酸、琥珀酸,254n m 波长检测烟酸、维生素C 、维生素B 1,270n m 波长检测维生素B 2。结果显示:待测成分在8m in 内达到良好的基线分离,线性范围广,苹果酸、柠檬酸、琥珀酸的检

3、出限为015g mL -1,烟酸、维生素C 、维生素B 1的检出限为011g mL-1,维生素B 2的检出限为0105g mL -1。方法的加标回收率为9710%10213%,线性相关系数为019993019999,精确度平均偏差0133%1197%。该方法适用于水蜜桃样品中多种水溶性有机酸和维生素的同时测定。关键词:高效液相色谱;多波长;有机酸;维生素中图分类号:TS20713文献标志码:A 文章编号:1000-2030(200901-0151-04Deter minati on of water 2s oluble organic acids andvita mins in juicy p

4、each using HP LC 2DADL IU Xiao 2li 1,ZHOU J ian 2zhong 1,DONG M ing 2sheng 2,HUANG Kai 2hong13(1.I nstitute of Agricultural Pr oducts Pr ocessing,J iangsu Acade my of Agricultural Sciences,Nanjing 210014,China;2.College of Food Science and Technol ogy,Nanjing Agricultural University,Nanjing 210095,C

5、hina Ab s tra c t:A method was established t o deter m ine water 2s oluble organic acids and vita m ins in juicy peach,including malic acid,citric acid,succnic acid,nicotinic acid,vita m in C,vita m in B 1and vita m in B 2.The peach was extracted by ultras onic in water,centrifuged and filtered .The

6、 chr omat ographic colu mn,Z ORBAX S B 2C 18(416mm 250mm,5m ,gradient 015mmol L-1H 3P O 42acet onitrile mobile phase at 018mL m in -1fl ow rate,and di ode 2array detecti on (DAD (210n m,254n m and 270n m were adop ted .The sa mp le was is olated well in 8m in and had a wide linear range .The detecti

7、 on li m it of malic acid,citric acidand succnic acid was 015g mL-1,nicotinic acid,vita m in C and vita m in B 1011g mL -1,and vita m in B 20105g mL -1.The average recoveries of the method were 9710%-10213%.The correlati on coefficients of regressi on equati ons were 019993-019999.The method was sui

8、table f or the deter m inati on of organic acids and vita m ins in peach .Key wo rd s:HP LC;multi 2wavelength;organic acid;vita m in水蜜桃是一种营养价值很高的水果,以其形美、色艳、味佳、肉细、皮韧易剥、汁多甘厚、味浓香溢、入口即化等特点而驰名中外,含有蛋白质、脂肪、糖、钙、磷、铁、多种有机酸和维生素等营养成分1。样品中有机酸和维生素的检测,文献已有报道,如分光光度法2-3、电泳法4、微生物测定法5、高效液相色谱法6-7等,但由于各组分的检测方法和条件差别较大,需分

9、批多次检测,非常繁琐。7、8月份是水蜜桃成熟的集中季节,本研究采用高效液相色谱-二极管阵列检测器(HP LC 2DAD 同时检测两种无锡水蜜桃样品中的水溶性有机酸和维生素,旨在建立一种简单、快捷的方法,为水蜜桃采收、储存期间及出口贸易的品质控制提供依据。收稿日期:2007-12-10基金项目:江苏省农业科学院科研基金项目(6510723作者简介:刘小莉,博士,研究方向为食品生物技术,E 2mail:liuxl1981yahoo 1com 1cn 。3通讯作者:黄开红,研究员,研究方向为生物技术,Tel:025-*。1材料与方法111材料11111样品和试剂水蜜桃样品:品系为小湖景和红花,由无锡

10、阳山水蜜桃科技园管理委员会提供。标准品试剂:苹果酸、柠檬酸、琥珀酸、烟酸、维生素C、维生素B1、维生素B2,购于中国药品生物制品检定所。其他试剂:色谱纯乙腈(山东禹王实业有限公司,分析纯磷酸(上海化学试剂有限公司,纯净水(娃哈哈集团。11112主要仪器和设备Agilent1100型高效液相色谱仪(配有二极管阵列检测器、液相色谱工作站等,色谱柱Z ORBAX S B-C18(416mm250mm,5m,Agilent;UP3200H超声波仪(熊猫集团南京电子计量有限公司。112方法11211标准溶液的配制准确称取标准品,以纯净水溶解定容至100mL,配制成5mgmL-1的标准储备液,4保存。使用

11、时以纯净水稀释成适当浓度的混合工作液。11212样品的前处理称取水蜜桃果肉200g,加入少量纯净水打浆,100W超声波处理20m in,3 000rm in-1离心15m in,取上清液定容至200mL;再取少量溶液12000rm in-1离心10m in,上清液过0145m滤膜,待进样检测。11213高效液相色谱法检测柱温30;进样量20L;流动相:0m in时100%015mmolL-1磷酸,在6m in内梯度变换为015mmolL-1磷酸和乙腈混合液(体积比为6040,流速018mLm in-1;二极管阵列检测器波长为210、254和270n m。2结果与分析211色谱测定条件通过二极管

12、阵列检测器在波长190900n m范围内进行光谱扫描,结果显示苹果酸、柠檬酸和琥珀酸在210n m左右吸收值较大;维生素C、维生素B1和烟酸在254nm处有最大吸收值;维生素B2在270nm处吸收最强,因此设置二极管阵列检测器为多波长同时检测,分别以210nm检测苹果酸、柠檬酸和琥珀酸,以254n m检测维生素C、维生素B1和烟酸,以270n m检测维生素B2。本研究所测定的多种有机酸和维生素均为水溶性物质,采用磷酸-乙腈梯度洗脱,0m in时流动相为100%015mmolL-1磷酸,6m in内等梯度变换为015mmolL-1磷酸和乙腈混合液(体积比为6040,流速018mLm in-1,可

13、以实现待测组分的良好分离(图1。212标准曲线将混合标准储备液以纯净水梯度稀释,每个浓度梯度进样3次,进样量为20L,记录峰面积。分别以进样浓度为横坐标(X、峰面积的平均积分值(Y为纵坐标绘制标准曲线并计算回归方程,以3倍信噪比(S/N作为检出限(LOD,结果见表1,各组分在各自浓度范围内线性关系良好,线性相关系数R20199,检出限范围为01050150gmL-1。表1标准品的回归方程Tab l e1R eg re s s i o n e qua ti o n o f standa rd s组分Component回归方程Regressi on equati on相关系数Correlati o

14、n coefficient线性范围/(mgmL-1L inear range检出限/(gmL-1L i m it of detecti on维生素B1V ita m in B1Y=40234X+981916019993015010*维生素C V ita m in C Y=39719X+691631019999015010*烟酸N icotinic acid Y=28254X+311700019998015010*维生素B2V ita m in B2Y=40723X+1541150019968012010*苹果酸Malic acid Y=954178X+91691019997215010*柠檬酸

15、Citric acid Y=1041180X+101858019998215010*琥珀酸Succinic acid Y=1790140X+81766019999215010*213回收率称取两组水蜜桃样品,其中一组加入标准品溶液,分别按11212所述处理,加标回收试验结果见表2。从表2可见,待测有机酸和维生素的回收率为9710%10213%。251南京农业大学学报第32卷 图1高效液相色谱图F i g 11HPLC ch r om a t o g ramA.254nm;B.270nm;C .210nm标准Standard;样品Samp le;样品加标Sa mp le added with s

16、tandards1.维生素B 1V ita m in B 1;2.维生素C V ita m in C;3.烟酸N icotinic acid;4.维生素B 2V itam in B 2;5.苹果酸Malic acid;6.柠檬酸Citric acid;7.琥珀酸Succinic acid表2加标回收试验结果(n =3Tab l e 2R e co ve ry te st o f the com po ne n ts组分Component本底平均值/(mg mL -1Average backgr ound values添加终浓度值/(mg mL -1Added concentrati on va

17、lues平均测定值/(mg mL -1Average detected values平均回收率/%Average recovery维生素B 1V ita m in B 10136010-30110010999816维生素C V ita m inC010*烟酸 010*维生素B 2V ita m in B 20106010-3010*苹果酸Malic acid 113621*619柠檬酸Citric acid 0115111001117410213琥珀酸Succinic acid014161100113879711214精密度和稳定性试验结果取水蜜桃样品制备溶液,按照试验所确定的色谱条件分别连续

18、进样5次,考察方法的精密度;取样品制备溶液于0、2、4、8、12、24和48h 分别测定,计算日内、日间稳定性,结果见表3。从表3可见,样品平行检测的平均偏差为0133%1197%,不同时间内检测值的平均偏差为0135%2141%。表3精密度和稳定性试验结果(相对标准偏差Ta b l e 3P re c isi o n a nd stab ility te sts (re l a ti ve standa rd devi a ti o n,R SD 维生素B 1V ita m in B 1维生素CV itam in C 烟酸N icotinic acid维生素B 2V ita m in B 2

19、苹果酸Malic acid 柠檬酸Citric acid 琥珀酸Succinic acid精密度/%Precisi on1159118011971165013311791136稳定性/%Stability0196210411361127013521411187215样品的检测按照试验方法提取和测定样品5次,根据标准曲线计算出水溶性维生素和有机酸的平均含量,结果见表4。351第1期刘小莉,等:高效液相色谱-二极管阵列检测器法测定水蜜桃中水溶性有机酸和维生素的含量表4样品中维生素和有机酸含量的检测结果Tab l e4R e su lts o f the de te r m i na ti o n

20、o f vitam i n s and o rga n i c a c i d s i n sam p l e s mgkg-1样品Sa mp le 维生素B1V ita m in B1维生素CV itam in C烟酸N icotinic acid维生素B2V ita m in B2苹果酸Malic acid柠檬酸Citric acid琥珀酸Succinic acid小湖景Xiaohujing0175332113175011137801802890红花Honghua01161211421580112163043018103讨论二极管阵列检测器(DAD可以在一次运行中选择多个检测波长或设计一个

21、波长时间程序同时采集不同波长的色谱图,便于对最大吸收波长不同的组分进行定性和定量8。传统紫外检测器只能采取在不同波长下分别进样分析,检测工作比较繁琐且浪费检测资源,但目前利用DAD检测器实现多波长检测的报道不多9。本研究利用DAD检测器对待测组分进行光谱扫描,确定各组分的最大吸收波长作为检测波长,可以提高检测方法的灵敏度,各组分的检出限都较低,保证检验结果的准确、可靠,而且大大缩短了分析时间、降低了分析成本。磷酸盐-乙腈流动相系统在反相C18柱中普遍使用。高浓度的盐会对泵和色谱柱的寿命产生影响,同时pH的大小对待测组分的分离起重要作用,本试验采用015mmolL-1磷酸和乙腈梯度洗脱,可以较好

22、地分离和定量水蜜桃中7种有机酸和维生素。本研究采用纯水超声提取,提取效率高,以色谱柱Z ORBAX S B-C18(416mm250mm,5m分离,用015mmolL-1磷酸-乙腈梯度洗脱,二极管阵列检测器同时以210、254和270n m波长定性和定量检测。方法简单易行、定量准确、灵敏度高、速度快,对于水蜜桃产品的研发和生产质量控制有实际意义。参考文献:1张海英,韩涛,王有年,等.桃果实品质评价因子的选择J.农业工程学报,2006,22(8:235-2392张捷莉,高雨,侯冬岩.紫外分光光度法测定维多康中维生素C的含量J.食品科学,2004,25(11:235-2373杨政,蒋俊春,孙硕远.

23、差示分光光度法测定维生素B1片的含量J.医药论坛杂志,2006,27(15:1084Santalad A,Teerapornchaisit P,Burakha m R,et al.Cap illary z one electr ophoresis of organic acids in beveragesJ.LW T2Food Scienceand Technol ogy,2007,40:1741-17465王茵,陈似兰,韦育浦.浙江省食物成分中尼克酸含量的测定J.中国卫生检验杂志,2000,10(3:322-3236董园园,董彩霞,卢颖林,等.植物组织中有机酸的提取方法比较J.南京农业大学学

24、报,2005,28(4:140-1437Jakobsen J.Op ti m isati on of the deter m inati on of thia m in,22(12hydr oxyethylthia m in,and riboflavin in food sa mp les by use of HP LCJ.Food Che m istry,2008,106(3:1209-12178王骏,胡梅,祝建华.二极管阵列检测器在农药液相色谱分析中的应用J.农药,2006,45(7:466-4699康海宁,陈波,韩超,等.HP LC法测定茶叶水提液中五种儿茶素和咖啡碱及其用于茶叶分类的研究J.分析测试学报,2007,26(2:211-215责任编辑:沈波451南京农业大学学报第32卷