肺炎链球菌研究现况及血清分型_精品文档.ppt

肺炎链球菌研究现况及血清分型_精品文档.ppt

《肺炎链球菌研究现况及血清分型_精品文档.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《肺炎链球菌研究现况及血清分型_精品文档.ppt（81页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

肺炎链球菌疾病及其防治,袁小亮2014-3-24,肺炎球菌疾病病原学及流行病学肺炎球菌疾病的诊治方法及耐药机制肺炎球菌疫苗及接种,内容,呼吸道传染病室,细菌学实验室工作内容,病原学：

采样、运输、培养、分离、鉴定、分型、保存抗生素耐药性检测免疫学：

血清学、免疫效果评价分子生物学测：

PCR检测、分型、聚类、遗传变异、进化分析,肺炎链球菌的菌落形态,在营养丰富的培养基上，肺炎链球菌形成扁平、中间有凹陷的典型菌落，少数菌可呈粘液型菌落。

肺炎链球菌,2.Optochin（OP）敏感试验,optochin即乙基氢化叩卟啉，因结构似于奎宁，故又称为乙基氢化羟基奎宁。

该药对肺炎链球菌的作用机制是干扰其叶酸的合成。

optochin敏感试验方法似药敏试验。

挑取被检菌，密涂于血平板上，贴上含5g/片的optochin纸片，置5-10%CO2的大气中（或烛缸），35孵育过夜。

抑菌环直径=14mm为敏感，推断为肺炎链球菌。

抑菌环直径14mm时参照胆汁溶菌试验。

肺炎链球菌的抑制圈直径常在20mm以上，甲型溶血性链球菌（约98%）小于12mm。

肺炎链球菌,肺炎链球菌（Streptococcuspneumoniae）,又名肺炎球菌（Pneumococcus）或肺炎双球菌。

多成双或短链排列,革兰染色阳性肺炎球菌主要抗原：

荚膜多糖：

致病的主要基础及血清分型依据，超过90种血清型，仅少数血清型致病菌体抗原：

C多糖，可与C反应蛋白发生沉淀反应。

M蛋白：

型特异性蛋白溶血（草绿溶血环）。

Optochin敏感试验阳性。

胆汁溶解试验：

自溶酶，胆汁或脱氧胆酸盐可激活自溶酶，加速菌体自溶。

胆汁溶解试验阳性。

可与甲型溶血性链球菌区别。

肺炎球菌血清型,PCV7:

4,6B,9V,14,18C,19F,23FPHiD10:

4,6B,9V,14,18C,19F,23F,1,5,7FPCV13:

4,6B,9V,14,18C,19F,23F,1,5,7F,3,6A,19A,91differentcapsuletypes（serotypes）.110F18B28A40211A18C28F41311B18F2941F411C19A3142511D19B32A436A11F19C32F446B12A19F33A456C12B2033B467A12F2133C47A7B1322A33D47F7C1422F33F487F15A23A34815B23B35A9A15C23F35B9L15F24A35C9N16A24B35F9V16F24F3610A17A25A3710B17F25F3810C18A2739,肺炎球菌的传播,广泛存在的并易于传播5-72%的健康成人和27-58%的健康儿童的鼻咽部携带1单种血清型可在鼻咽部长期存在肺炎球菌可通过频繁密切的接触在人与人之间传播1.PneumococcalDisease.CDC.PinkBookChapters（12thedition,2011）.,健康人群,暴露未暴露,感染,未感染,病例,携带者,肺炎球菌的致病机理,细菌黏附和穿透粘膜,细菌血中生存,细菌穿过血脑屏障,MeningococcalDisease,NancyE.Rosenstein,NEnglJMed,2001,中耳炎、鼻窦炎、支气管炎,肺炎,菌血症/败血症,脑膜炎,疾病严重程度,X1000,X100,X10,患病率,侵袭性,非侵袭性,肺炎链球菌感染性疾病,Annualincidenceofmeningitisin2-year-olds7-10/100,000-UnitedStates,AmericanAcademyofPediatrics.Pediatrics.2000;106:

367-37646:

1-24,预计年病例数,侵袭性肺炎球菌病例InvasivePneumococcalDiseases,IPD,16,菌血症脑膜炎肺炎非侵袭性感染,Lancet2009;374:

893902WHO.ReportofameetingonprioritiesforpneumococcalandHaemophilusinfluenzaetypeb（Hib）vaccinedevelopmentandintroduction.Geneva,February912,1999.WHO/V82:

93104.,1450万肺炎球菌感染病例，发病率为2331/10万。

肺炎病例1380万（95.6%），占到所有肺炎病例（16000万）的8.6%。

脑膜炎病例（10.3万）0.7%，发病率估计为17/10万。

82.6万死亡，5岁以下儿童死亡病例的11%（不包括HIV阳性儿童）。

2000年，全球5岁以下儿童肺炎链球菌感染疾病负担估计,2000年，全球5岁以下肺炎球菌病发病病例数,India:

27%China:

12%Nigeria:

5%Pakistan:

5%Bangladesh:

4%Indonesia:

3%Ethiopia:

3%Congo:

3%Kenya:

2%Philippines:

2%,2000年全球5岁以下儿童肺炎球菌感染死亡病例数,国家（死亡病例数）India（142000）Nigeria（86000）Ethiopia（57000）Congo（51000）Afghanistan（31000）China（30000）Pakistan（27000）Bangladesh（21000）Angola（20000）Uganda（19000）,WHO：

2008年疫苗可预防疾病,肺炎球菌病:

476000Hib:

199000百日咳:

195000麻疹:

118000新生儿破伤风:

59000破伤风（non-neonatal）:

2000轮状病毒：

453000,WHO估计，2008年全球5岁以下儿童150万死于疫苗可预防疾病，占5岁以下儿童死亡的17%,IPD病例的危害,75%的IPD病例和83%的肺炎球菌脑膜炎病例发生在2岁以下的儿童中，对于肺炎而言，8.7%52.4%的病例发生在小于6个月的婴幼儿。

IPD病例：

病死率高，发展中国家，菌血症20%，脑膜炎50%，婴幼儿是高危人群，发达国家，菌血症成人病死率1520%，老年人中30%40%。

后遗症中耳炎：

公共卫生问题肺炎球菌感染定义：

血液或其他无菌部位标本（CSF）分离到细菌，但是对于无菌血症的肺炎病例，判断起来比较困难。

RusselFetal2011，SAGEmeeting,810November2011,肺炎球菌病疾病负担,WHO估计，2008年全球5岁以下儿童死亡880万，其中，5.4%（47.6万）死于肺炎球菌感染，多数在发展中国家，非洲和亚洲。

HIV感染加重疾病负担。

肺炎球菌是儿童重症肺炎的主要致病菌，约50%的重症肺炎的病原菌是肺炎链球菌，在致死病例中可能超过50%。

疾病负担估算的影响因素：

病例的定义、实验室检测能力、监测系统的敏感性等。

1.WHO.WeeklyEpidemiolApril2012,87:

129-1442.WHO.WeeklyEpidemiolRec2007;82:

93-1043.UNICEF/WHO.Pneumonia:

Theforgottenkillerofchildren,2006Sep,卫生部2011年中国妇幼卫生事业发展报告导致5岁以下儿童死亡的前5位死因顺位是：

早产或低出生体重，肺炎，出生窒息，先天性心脏病，意外窒息，占全部死亡原因的60.7%,中国肺炎球菌病疾病现况,疾病负担数据有限或不系统发病数及发病率病例的地域、年龄分布特征血清型分布和构成菌株耐药情况目前使用疫苗的血清型别覆盖率疫苗研发模仿跟风抗生素耐药血清型变迁6A6B,19F19A,亚洲大环内酯类耐药的肺炎链球菌,-ermB更常见于（50%）中国,台湾，斯里兰卡，韩国-mefA更常见于香港，,新加坡，泰国，马来西亚-大多数国家MIC9012mg/L.,Songetal,JournalofAntimicrobialChemotherapy2004;53（3）:

457-463.,耐药率（%）,中国肺炎链球菌耐药情况,对青霉素耐药2001年耐药率达42%55%，上海地区:

对PNC不敏感率为72.7%儿童耐药率高，已发现MIC32mg/L菌株对大环内酯类肺炎链球菌对红霉素等的耐药率为50，多数报道在70以上上海报道53%,23.4%耐药,19.8%中度耐药,56.8%敏感,中国肺炎链球菌对青霉素耐药的发展趋势,N=214（2000）,N=564（2004）,N=417（2007）,12.王辉等，中华结核和呼吸杂志.2004年3月第27卷第3期.155-16011.王辉等。

中华检验医学杂志。

2007年11月11期.第1242页-1247页,耐药率（%）,（年）,PISP,PRSP,肺炎球菌耐药,多重耐药的肺炎球菌常见且不断增多肺炎球菌耐药性可导致多重后果：

治疗失败需要用昂贵的抗微生物药物替代住院时间延长医疗费用增加,为什么会出现耐药,由于各种原因使用抗菌药物所造成的选择性压力是导致和加速耐药性产生的最主要因素，而不适当的选用抗菌药、剂量不足、疗程不足、药品质量低劣等同样可导致并加速耐药性的产生,抗生素治疗,选择性压力,肺炎球菌耐药,汪复、张婴元主编.实用抗感染治疗学,2004版,细菌性呼吸道传染病标本采集,1、急性上呼吸道感染:

鼻/咽拭子2、肺炎1）鼻咽拭子/鼻咽抽吸物：

2）尿液：

3）痰液：

4）血液：

5）胸腔穿刺液：

6）支气管肺泡灌洗液。

3、脑膜炎1）脑脊液2）血液,31,肺炎症状、体征影像学诊断，应考虑疾病的进行性改变。

病原微生物学诊断：

呼吸道分泌物分离培养，受正常菌群影响侵袭性的采样，操作风险、接受程度影响。

鼻/咽拭子,32,血标本,足量血标本，床前接种血培养瓶。

成人：

每次采样抽血10mL，5mL注入准备好的血培养瓶。

儿童：

每次采血5mL，3mL注入准备好的血培养瓶血培养瓶有细菌生长，转种培养皿。

血清可进行PCR或RealtimePCR检测或抗体检测。

建议：

不建议用碘伏消毒瓶塞，如用碘伏消毒，应用酒精脱碘。

用70%酒精消毒血培养瓶橡皮塞子，酒精作用1分钟；在血液注入血培养瓶之前，用无菌纱布或棉签清除橡皮塞子表面剩余的酒精，然后注入血液。

防止皮肤寄生菌或环境微生物引起的污染。

芽孢杆菌属、棒状杆菌属、痤疮丙酸杆菌或凝固酶阴性的葡萄球菌、不动杆菌等的标本一般视为污染。

33,脑脊液标本,不增菌，直接接种培养皿可做快速检测（涂片染色、乳胶凝集检测）PCR及RealtimePCR检测,34,培养基及接种培养,普通培养基（血平板、巧克力平板）选择性培养基,35,培养基质量控制,标本接种菌落取菌环划线接种培养鼻咽拭子涂布培养基后，应取菌环划线接种,药敏试验,最后鉴定发出最终报告,初步鉴定菌落特征、菌体形态,直接涂片革兰染色,鉴定试验,检验程序,血平板,营养肉汤增菌,355%-10%CO2,18-24h,35,18-24h,第一天,第二天,第三天,细菌鉴定,Gram染色,37,奥普托欣敏感性抑菌环14mm,胆汁溶解试验,触酶试验,生化鉴定,肺炎球菌,流感嗜血杆菌,生物学性状,主要生化反应optochin试验:

含5goptochin纸片贴于涂布有待测菌的平板上35孵育过夜，抑菌圈大于14mm即为敏感。

血清分型（群）-玻片凝集结果及判读,细菌与一种抗血清凝集，和生理盐水不凝集时，才能鉴定为该种血清型。

如果不能确定血清群，菌株为不可分群菌株（NG）或不可分型菌株（NT）。

关于NG/NT菌株在生理盐水中凝集，无论与任何抗血清发生强反应，都应标记为自凝菌。

在生理盐水中不自凝，和多种血清出现凝集，记为NG。

在生理盐水中不自凝，不和任何一个血清凝集，记作NG。

分型血清质量控制,39,乳胶试剂盒,在待检标本上滴加乳胶悬液,混匀,轻摇反应,观察结果,滴加待检