PCR正式标准操作文件SOP.docx

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PCR正式标准操作文件SOP

浙江省

XX医院

临床基因扩增检验实验室

管理程序和标准操作程序（SOP）

起草人：

XXX

批准人：

XXX

起草日期：

2003年2月10号

1.目录---------------------------------------------------1

2.C001手套使用及左右手分开原则------------------------3

2.C002实验耗材的质检方法--------------------------------5

3.C003试剂的质检操作程序--------------------------------6

4.C004实验室常用溶液的配制标准程序----------------------7

5.C005标本的验收和保存标准程序--------------------------9

6.C006样品编号操作程序---------------------------------12

7.C007实验台摆放规范-----------------------------------15

8.C008样品处理操作程序---------------------------------17

9.C009核酸扩增荧光检测实验和结果分析标准操作程序-------19

10.C010实验有效性判断----------------------------------23

11.C011实验室室内质控标准操作程序----------------------25

12.C012实验室化学试剂及废弃物处理，生物防护措施--------30

13.I001LightCycler的使用、维护和校准操作程序-----------33

14.I002加样器使用、维护和校准的标准操作程序-------------37

15.I003离心机的使用、维护和校准操作程序----------------42

16.I004超净工作台使用和维护的标准操作程序--------------45

17.I005恒温水浴箱使用和维护的标准操作程序---------------46

18.I006旋涡振荡器使用和维护的标准操作程序--------------48

19.I007冰箱使用和维护的标准操作程序--------------------49

20.I008仪器故障时的标记、放置的标准操作程序------------50

21.I009检验结果报告标准操作程序------------------------51

22.I010实验室清洁标准操作程序--------------------------53

23.M001核酸扩增荧光检测实验室规章制度-------------------54

24.M002内务制度----------------------------------------57

25.M003实验室人员的培训程序----------------------------60

26.M004实验人员行为规范--------------------------------61

27.M005抱怨处理----------------------------------------63

28.M006记录管理文件------------------------------------65

XX医院

临床基因扩增检测实验室

手套使用

及左右手分开原则

编号：

C001

第一版

第1页共2页

1目的

核酸扩增荧光检测实验室中，实验人员常要接触各种传染性标本（如乙肝病毒、结核杆菌等），作为一项最基本的防护措施，实验过程中必须戴手套操作，这是要遵守的原则。

而为了防止污染，实验过程中还要注意左右手分开。

2适用范围

本原则贯穿于核酸扩增检测实验的人员工作全过程。

3操作人

XXX

4原则要求

a）实验过程中要戴一次性手套，手套要保持完整、不破损。

b）接触样本前戴上手套，将化验单和试管/离心管依次编好号后，弃去手套。

c）手套一旦疑有污染，立即更换。

d）做RNA类实验时，实验人员不能为了方便把手伸入手套而用手反复搓揉手套或用口吹胀手套，这样都有可能让手套表面沾染上RNAase，破坏样本RNA。

如接触“脏的”器皿或其它物品后，手套就可能沾染上RNAase，及时更换手套。

e）在实验中应遵循左右手分开原则：

左手用于接触样本，右手用于使用移液器、接触和操作仪器。

f）接触仪器均用右手，严禁用接触过样品的左手触摸任何器材或工作室门把手等。

XX医院

临床基因扩增检测实验室

手套使用

及左右手分开原则

编号：

C001

第一版

第2页共2页

g）使用离心机时，用左手将离心管全部配平，按顺序置于离心机中相应位置，右手操作离心机。

离心完毕后，左手取出离心管。

5本原则的变动程序

本原则的变动，可由任一使用该文件的工作人员提出，报上级负责人决定。

如通过则公布实行。

起草人

批准人

启用日期

XXX

XXX

2003年2月10号

XX医院

临床基因扩增检测实验室

实验耗材的质检

标准操作程序

编号：

C002

第一版

第1页共1页

1目的

保证每批用于临床实验的耗材的质量良好，符合要求。

2适用范围

各种用于临床实验的核酸扩增荧光检测耗材：

1.5ml离心管、0.5ml离心管、毛细扩增管、移液器吸头等。

3操作人

XXX

4操作步骤

4.1由本院的采购中心负责向三证[营业许可证、经营许可证（如为厂家则有生产许可证）、注册证]齐全的公司采购合格的产品。

4.2到达实验室的耗材由实验室人员抽样目测。

4.3抽样原则：

一箱里面抽取10个。

5本SOP的变动程序

本SOP的变动，可由任一使用该文件的工作人员提出，报上级负责人决定。

如通过则公布实行。

起草人

批准人

启用日期

XXX

XXX

2003年2月10号

XX医院

临床基因扩增检测实验室

试剂的质检

标准操作程序

编号：

C003

第一版

第1页共2页

1目的

保证每批用于临床实验的试剂的质量良好，符合。

2适用范围

各种用于临床实验的核酸扩增荧光检测试剂（现仅包括HBV、HCV、TB、CT试剂盒）。

3操作人

XXX

4操作步骤

4.1由本院的采购中心负责向三证[营业许可证、经营许可证（如为厂家则有生产许可证）、注册证]齐全的公司采购合格的产品。

4.2收到试剂后检查其是否处于冰冻状态，包装是否有破损。

4.3及时将试剂按照其说明书转移到相应的地方保存。

5本SOP的变动程序

本SOP的变动，可由任一使用该文件的工作人员提出，报上级负责人决定。

如通过则公布实行。

起草人

批准人

启用日期

XXX

XXX

2003年2月10号

XX医院

临床基因扩增检测实验室

实验室常用溶液配制

标准操作程序

编号：

C004

第一版

第1页共2页

1目的

保证实验中用到的各种溶液符合实验要求。

2适用范围

核酸扩增荧光检测实验室常用溶液：

4％NaOH溶液、75％的酒精（由医院提供）、1％新洁尔灭溶液（由医院提供）。

3操作人

XXX

4配制

4.1用具

干燥洁净的200ml量桶一只，5ml量桶一只，三角烧瓶两只，天平一架，250ml、1000ml广口瓶各一只。

4.2配制步骤

4.2.1配制NaOH溶液

a）用天平称取4克分析纯的NaOH固体，置于一只三角烧瓶中。

b）用200ml量桶准确取100ml水，缓缓注入盛放NaOH固体的三角烧瓶中。

c）摇荡三角烧瓶使NaOH固体充分溶解。

d）然后缓缓倾倒入250ml广口瓶中密封保存备用。

4.2.2配制1％新洁尔灭溶液（可以由医院提供）

a）用5ml量桶准确取2ml新洁尔灭原液，缓缓注入一只三角烧瓶中。

b）用200ml量桶准确取198ml水，缓缓注入盛放新洁尔灭的三角烧瓶中。

XX医院

临床基因扩增检测实验室

实验室常用溶液配制

标准操作程序

编号：

C004

第一版

第2页共2页

c）摇荡，混匀溶液。

d）将混匀的溶液转移入广口瓶中。

e）重复a～d步的操作，制备1000ml的1％新洁尔灭溶液储存备用。

5本SOP的变动程序

本SOP的变动，可由任一使用该文件的工作人员提出，报上级负责人决定。

如通过则公布实行。

起草人

批准人

启用日期

XXX

XXX

2003年2月10号

附：

注意事项

每份配制好的溶液保质期为14天。

XX医院

临床基因扩增检测实验室

标本的验收和保存的

标准操作程序

编号：

C005

第一版

第1页共3页

1目的

保证所收集的标本符合实验要求。

保证标本的保存质量。

2适用范围

核酸扩增荧光检测验室现行检测项目：

HBV、HCV、TB、CT。

3操作人

XXX

4验收、保存程序

4.1验收步骤

4.1.1签收

严格对各类样本的查对和签字制度，对病房各样本及时进行验收，查对，不符合要求的样本一律退回，并有书面记录。

4.1.2分类验证

4.1.2.1一般内容

进入实验室的样本在进行编号、离心前，工作人员应再次认真查对姓名，联号，住院号，病区床号，项目等。

对不符合要求者应作记录，并及时通知采样科室，正确及时地补采样本，以免延误病人的检测结果报告。

对书写不清楚的申请单，当事者要及时与病房联系（可电话联系），明确受检者姓名，住院号，性别，年龄，病区，床号和检验项目等。

4.1.2.2按检测项目验证标本

a）HBV：

所需标本类型为未溶血的血清。

XX医院

临床基因扩增检测实验室

标本的验收和保存的

标准操作程序

编号：

C005

第一版

第2页共3页

b）HCV：

所需标本类型为未溶血的血清。

c）CT：

病患部位的棉拭子。

d）TB：

晨起第一口痰（不能为唾液）、胸腹水、脑脊液、脓液或穿刺液。

4.1.3符合拒检的不合格病人标本的范围

未正确使用抗凝剂的标本；严重溶血及静脉营养时严重脂血并影响检测结果的血标本；血量不足检验需要量的标本；经查对，标本的病人姓名、年龄、性别、及检验号联等不相符者；采集的标本将严重影响检验结果者（例如检测项目TB的标本是唾液而不是晨痰）。

4.1.4拒检程序

a）对拒检的不合格标本应登记在不合格标本处置记录本上。

b）在原申请单空白处写上标本不合格原因，并将之送返送检科室/单位。

c）必要时电话告之相关科室/单位的医生或护士。

4.2标本的保存

a）HBV：

全血样本在3小时内分离出血清，保存于-20℃。

b）HCV：

全血样本在3小时内分离出血清，保存于-20℃。

c）TB：

液化的痰标本如果不立即用于核酸提取，保存于-20℃。

处理后的痰或胸腹水、脑脊液、脓液用于TB检测的标本可置于4℃下短期保存。

长期保存于-70℃下。

d）CT：

处理后的棉拭子标本置于－20℃下短期保存。

4.3特殊标本处理

对暂不检测的项目和规定时间外收到的零散样本，要随时登记和交班，以免漏检，遗失和延误检验。

对特殊样本或特殊病人的样本，实行“首接”负责制，

XX医院

临床基因扩增检测实验室

标本的验收和保存的

标准操作程序

编号：

C005

第一版

第3页共3页

所谓特殊样本是指难于采集的样本，