culture medium培养基大全.docx

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culturemedium培养基大全

微生物培养基－原理、制作和现象

食品微生物培养基及其成分

营养琼脂（普通琼脂）

成份：

牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤）   100毫升

      琼脂（视天气，琼脂质量而定）

制法：

将上物加热溶解，补足水，调ph至7．6，过滤分装121℃，高压灭菌15分钟。

用途：

作普通琼脂平皿。

血琼脂平板（BA）

制法：

取营养琼脂（PH7．6），加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5-10毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用。

用途：

1． 一般棉拭子均接种此培养基。

      2．尿液，脓液

      3．分离细菌标本用。

基础培养基 （肉膏汤BB）

成份：

蛋白胨  10克       牛肉膏    5克     

      氯化钠   5克        水       1000毫升

制法：

将以上各物称好，加水煮沸溶解，用1NNOH校正PH至7．6，过滤分瓶，121℃高压灭菌，20分钟备用。

用途：

1 作耐药试验，增菌用分装小管。

      2 作普通琼脂斜面。

血液培养基（大管肉汤培养基）

成份：

1  新鲜牛肉浸液    1000毫升    

      2  PABA（对氨基苯甲酸〔相当于10mg/毫升〕）   1g%  1毫升

      3  MgSO4   [相当于0．493/100毫升]           49．3%  1毫升

      4  枸椽酸钠                                     0．3g

制法：

1  将1号，4号混合液，2号，3号液分装高压灭菌。

      2  取灭菌1，4号混合液用无菌法加入PABA，MgSO4，再分管，行无菌试验三天方可使用。

用途：

作血，骨髓培养用。

肠道杆菌培养基（伊红美兰琼脂）

成份：

  蛋白胨     10克            乳糖      10克

        氯化钠     5克             琼脂      25（22）克

        水         1000毫升        2%伊红溶液20毫升

        0．5%美兰溶液   20毫升

制法：

将蛋白胨，氯化钠琼脂称好，加水1000毫升使溶解，校正PH7．4过滤，补足失水，加入2%伊红溶液20毫升，0．5%美兰溶液20毫升，（115℃高压20分钟），冷却至50℃左右倾注平板，凝固后存冰箱备用。

（高压以后方可再加乳糖）

用途：

用作分离沙门氏，志贺氏菌属，也作菌群调查。

                                       1

罗文斯坦培养基

成份：

磷酸二氢钾       2．4克              硫酸镁   0．24克

      枸椽酸钠         0．6克              天门冬素  3．6克

      纯甘油（丙三醇） 12毫升              水       600毫升

      马铃薯粉         30克               鸡蛋    1000毫升（约3公斤）

      2%孔雀绿水溶液  20毫升       

制法：

1  除鸡蛋外（还有孔雀绿）。

可将其它物品称好，放入大三角瓶包扎好，高压灭菌。

      2  鸡蛋用75%酒精泡30分钟，灭菌法打蛋，倒入盛有玻璃珠的灭菌三角烧瓶内充分将鸡蛋摇散。

      3  将各成份按比例配好，分装每管约5毫升。

      4  间歇灭菌第一次90℃1小时，第二次80℃半小时，第三次80℃半小时（或放85℃烤箱内连续二次）。

质控标准：

 1  灭菌试验合格。

           2  接种结核杆菌要求两星期生长良好。

用途：

作结核分枝杆菌培养用。

结核半固体培养基

成份：

磷酸氢二钠      19克               硫酸镁      0．6克

      磷酸二氢钾      2．5克              天门冬素    5克

      1%孔雀绿       1．5克              甘油         20毫升

      吐温80（10%）  5毫升             水          1000毫升

      枸椽酸钠        2．5克              动物血清    100毫升

      琼脂            1．5克（80小时用甲醇去脂）

      1%孔雀绿       0．78毫升          吐温80（10%） 5毫升

      加动物血清      100毫升

制法：

 1  除血清外将上述药品均称好，放入煮沸溶解，调PH7。

2

       2  分管（每管约10毫升）包扎好，高压，121℃半小时灭菌。

       3  待冷后无菌法加无菌血清（绵羊血或兔血）每管约1毫升备用。

   4  去除琼脂方法：

取琼脂若干或于三角烧瓶中加甲醇于琼脂1毫升用塞密封，放37℃温浴80小时，每天摇动一次，冷却后到时取出用滤纸过滤，待琼脂自然冷却后备用。

质控标准：

1无菌实验合格。

          2琼脂硬度合适而清亮。

          3接种标准结核杆菌用，强度合适即可用。

用途：

培养结核杆菌用。

亚碲酸钾血琼脂平板

成份：

琼脂基础     100毫升         10%葡萄糖      2毫升

      1%亚碲酸钾  4．5毫升          绵羊血         10毫升

制法：

1将琼脂基础溶解好，加入羊血。

      2马上加热使成咖啡色后，稍冷再加入10%葡萄糖2毫升与1%亚碲酸4．5毫升混合后倒入无菌平板， 

                                       2

        凝固后存冰箱备用。

质控标准：

接种白喉杆菌生长良好，其它革兰氏阴性菌均抑制生长。

用途：

供培养及鉴别白喉杆菌用。

米培养基

成份：

白米         20克               水      1000毫升

      琼脂         20克              吐温80   10毫升

制法：

1将20克米加水200毫升煮沸45分钟，煮时将容器盖好。

      2用纱布过滤，只要米汤，不要饭，加水至1000毫升。

      3加琼脂20克，吐温-80 10毫升煮溶，分装中型管（每管约3毫升），包扎好，高压，121℃半小时，消毒备用。

质控标准：

1灭菌。

          2要求清亮。

          3接种白色念珠菌17-24小时生长良好，并产生厚膜孢子。

用途：

培养白色念珠菌用。

蛋白胨水培养基

成份：

蛋白胨     1克          氯化钠       0．5克

      水加至    100毫升        PH调至      7．8

制法：

把以上各物称好溶于水，调节PH7．6分装消毒备用。

质控标准：

1  放置37℃无菌生长。

          2  接种大肠杆菌24小时生长良好。

          3  可作中国兰平板基础液。

          可作靛基质基础液（作此试验需要色氨酸蛋白胨）。

血培养基

成份：

蛋白胨     10克           牛肉膏      5克

      氯化钠     5克            葡萄糖      3克

      枸椽酸钠   3克            MgSO4。

7H2O  20毫升

      0．5%PABA  10毫升       酵母浸液   10毫升   0．2克（2%过滤）

      *酚红0．4%   6毫升         水      1000毫升

       琼脂       0．5克       

*：

作大BB，小BB时，不要加酚红和琼脂。

制法：

1。

除PABA、硫酸镁、酚红外均称好煮化调PH7．4

      2。

调好PH后再加酚红。

      3。

硫酸镁、PABA另外无菌再加入（亚细，小BB）    

沙氏培养基

成份：

蛋白胨      1克                         水       100毫升

      琼脂        1．5克（琼脂粉1克%）      葡萄糖或麦芽糖   4克

                                       3

制法：

1将上述物质称好，放入水中煮沸溶解（不必调PH即有5左右）分中号试管（约4毫升）包扎，高压115℃20分钟。

      2 趁热斜好，凝固备用。

质控标准：

1无菌试验合格。

          2接种霉菌比在其它培养基上生长良好，其它菌生长不好。

 用途：

作分离培养霉菌用。

注意：

1  接种临床新鲜标本可先加1-2滴70%酒精让干后再接种于含12．5%氯霉素沙氏斜面培养基上。

     2  也可用蜂蜜8克代替葡萄糖或麦芽糖。

肉渣培养基

成份：

 牛肉渣             牛肉浸液（牛肉膏）

制法：

将做牛肉浸液的牛肉渣，装入试管，高约3毫米，加入牛肉浸液或牛肉膏汤（PH7．6）约5毫升，比肉渣高一倍，液面上加入已溶解的凡士林，高约0．5厘米（不加也可），121℃高压灭菌20-30分钟后保存于冰箱内备用 。

用途：

用于厌氧菌培养。

注意：

如无肉渣也可用牛、羊血等代替，将血块先放入水内煮沸，取出成小块，血块在加热后摇匀成碎颗粒状。

单糖发酵管培养基（半固体）成份：

 PH7．6-7．8蛋白胨水     1000毫升（0．3克/100毫升）

       1．2%酚红液          0．4毫升

       琼脂                  0．4 - 0．5克

       10%糖或醇            10毫升

制备：

把蛋白胨水，琼脂加热溶解，然后加1．2%酚红液0．4毫升，10%糖10毫升，混匀，分装试管，每管约2-3毫升，经115℃高压灭菌20分钟后，分置于试管架上，贴上各类糖或醇类标签备用。

质控标准：

细菌发酵糖类或醇而产生酸，能使培养基PH改变，指示剂由红变黄色，如因发酵产生气体则 

          半固体内产生气泡，如有动力则半固体由清亮变混浊。

明胶培养基

成份：

肉浸液        1000毫升（牛肉浸膏5克）

      明胶          12克

制法：

   100毫升肉浸液中，加入明胶12克，隔水加热煮化，校正PH7．2，分装小号试管，用阿诺氏间歇灭菌80℃30分钟，连续3日，或者108℃高压20分钟，冷却，贮存备用。

碱性蛋白胨水

成份：

   蛋白胨      20克             氯化钠      5克

   硝酸钾       0．1克          结晶碳酸钠（NaclCO3．12H2O）  0．2克

   水          1000毫升

                                       4

制法：

将蛋白胨，Nacl，硝酸钾，结晶碳酸钠称好，溶于1000DW中，校正PH8．4分装试管，121℃高压

      灭菌15分钟后备用 。

用途：

用于霍乱弧菌培养。

葡萄糖蛋白胨水（M。

V用）

成份：

蛋白胨        5克             葡萄糖         5克

      K2HPO4       5克              水          1000毫升

制法：

将上述称好溶解分装试管，调PH7．4高压灭菌115℃ 灭菌20分钟 ，或者葡萄糖加热煮沸后再倒试管

标准：

灭菌试验合格。

      接种大肠杆菌VP阴性，M阳性；接种产气杆菌VP阳性，M阴性。

用途：

作鉴别肠道杆菌用。

枸椽酸盐培养基

成份：

磷酸二氢铵    0．1克           硫酸镁      0．02克

      磷酸氢二钾    0．1克           枸椽酸钠    0．23--0．5克（0．36）

      氯化钠        0．5克           琼脂        1．5克

      0．5%溴麝香草酚兰2毫升 （调PH6．8再加）

制法：

将上述称好，放入水中煮沸溶解，调PH6．8，然后分装中号试管，高压灭菌，趁热倒呈斜面，凝固

      后备用。

标准：

1灭菌试验合格，培养基呈果绿色适宜。

      2接种大肠杆菌，培养基上不生长，也不变色。

      3接种产气杆菌，培养基呈深兰色。

用途：

作鉴别大肠杆菌用。

双糖铁培养基

成份：

    下层：

蛋白胨    1克            氯化钠      0．5克   

          葡萄糖    0．2克         琼脂       0．3-0．5克

          水       100毫升

       将上述物质混匀调PH7．6后加1．2%酚红0．4毫升

    上层：

蛋白胨     1克         氯化钠      0．5克

          乳糖       1克         硫代硫酸钠   0．03克

          硫酸亚铁  0．02克      琼脂         1克

          水       100毫升

制法：

 1将下层配好，分装中号试管（1毫升），塞好包扎，15磅高压灭菌半小时，使凝固后备用。

       2制上层时，先将蛋白胨水制好，加入硫酸亚铁，硫代硫酸钠，加热溶解PH8．1，再加入酚红分瓶，（每瓶300毫升，称取琼脂包扎灭菌，趁热加入乳糖隔水煮沸30分钟或112℃消毒15分钟）。

       3取已制的下层管，每管用无菌法倒入上层液约1。

5毫升，边斜放置使成斜面，凝固后备用。

标准：

无菌试验合格，接种大肠杆菌下层产酸产气，上层产酸。

尿素培养基

成份：

蛋白胨       0．1克         氯化钠      0．5克

      磷酸二氢钾   0．2克         尿素        0．2克（或10%2毫升）

      葡萄糖      0．01克（或10%葡萄糖0．1毫升）

       H2O       100毫升         酚红（0．2%）    0．4毫升制法：

1除葡萄糖，尿素外把其它药品称好放入水中煮沸，使溶解，调PH7．2过滤，15磅高压灭菌15分钟．

      2配制尿素（灭菌）液：

每100毫升基液内加2毫升．

      3配制10%葡萄糖（灭菌）每100毫升加0．1毫升．

      4分装小试管待用．

标准：

     1灭菌试验合格．

     2接种变形杆菌24小时呈红色．

用途：

鉴定变形杆菌用．

胆盐中性红琼脂

成份：

蛋白胨琼脂PH7．2-7．4       5000毫升

      胆  盐                        2．5克

      乳糖                          5．0克

      对氨基苯甲酸                  25毫克

      1%中性红溶液                 25毫升

制法：

    将胆盐，对氨基苯甲酸，乳糖趁热加入已灭菌之蛋白胨琼脂中，待冷至50-60℃时，加入1%中性红液2．5毫升，混合后即倾注平皿，凝固待用．

*：

1%中性红：

1克中性红加酒精60毫升，加水40毫升

丙二酸盐培养基（缩苹果酸钠）

成份：

丙二酸钠      0．3克        酵母浸膏        0．1克

      Nacl          0．2克        硫酸铵          0．2克

      K2HPO4      0．06克       KH2PO4         0．04克

      水            100毫升

      PH6．8，高压灭菌备用．

      0．2%溴麝香酚兰乙醇  1．25毫升

制法：

与枸椽酸盐利用试验相类似，是测定细菌能否利用丙二酸盐与碳源．无机铵盐为氨源而生长，生长者使培养基变成碱呈兰色．

鉴定：

   克氏杆菌     （+）            赫夫尼亚     （+）

         沙门氏菌      （—）          痢疾杆菌      （—）

苯丙氨酸培养基

成份：

酵母浸液   1．5克          DL--苯丙氨酸     1克

      磷酸氢二钠（无水）0．5克（或L-苯丙氨酸     0．5克）

      氯化钠     2．5克               琼脂           6克

      水         500毫升               PH7．4

制法：

1  将上述成份加热溶解，分装于12*125mm口径的试管中，每管约4毫升．

      2  高压灭菌15磅10分钟，趁热使试管斜置凝固后备用．

      3  接种时划斜面．

用途：

鉴定沙门氏菌用．苯丙氨酸脱氨酶试验沙门氏菌阴性．

双抗培养基

成份：

     蛋白胨      10克            牛肉膏      5克     

     氯化钠      5克             无水亚硫酸钠  3克

     柠檬酸钠   10克             蔗糖       10克

     琼脂粉     20克             水         1000毫升

制法：

    1将上物称好，加热溶于水中．

    2调PH8．2—8．4

    3 分装高压灭菌后备用．

    倾注平板前先加热溶解琼脂等冷至50℃左右，按无菌操作加入多、庆抗菌素充分摇匀， 倾注平板，凝固后备用．

    （庆大霉素：

150u/毫升，多粘菌素：

1500u/毫升, 2毫升加至1000毫升培养基内，此相当于庆大霉素0.3u/毫升, 多粘菌素3u/毫升）

O2培养基

保存液：

（文—腊氏液）

A液：

硼酸    12．405克           KCL    14．912克

      水      1000毫升   

   取A液250毫升 0．8%NAOH    133．5毫升

     NACL       20克               水       1000毫升

     分装高压灭菌．

硝酸盐胨水

成份：

     蛋白胨     1克

     硝酸钾（无NO2）    0．1克  

     H2O        100毫升

      PH7．4，高压灭菌分装备用．

（如无硝酸钾也可用硝酸钠0．02克，NACL0．05克，H2O100毫升）

用途：

硝酸盐还原试验用．

原理：

测定细菌能否还原硝酸盐为亚硝酸盐，后者在酸性条件下与a—萘胺和对氨基苯磺酸发生重氮反应，生成红色的1-萘-4偶氮苯对磺酸．

制法：

试剂甲液A对氨基苯磺酸0．8克溶于5N的醋酸100毫升．

    B：

乙液a-萘酚0．5克溶于5N的醋酸100毫升中

    将细菌接种于硝酸盐水中37℃培养24--96小时，加入甲液0．1毫升，再加入乙液数滴，立即呈现红或紫色为阳性king氏培养基（能促进绿脓菌绿色素产生）

成分：

      蛋白胨         2克                   K2SO4        1克

      甘油           1克                   MGCL2       0.14克 

      琼脂           1.5克                  H2O         100毫升

               KING氏培养基（能促进绿脓菌荧光色产生）

成分：

      蛋白胨         2克                   甘油          1克

      K2SO4         0.15克                 MGSO4       4.7克           H2O      0.15克

      琼脂           1.5克                  H2O          100毫升

      调PH7.2       15磅20分钟消毒后使成斜面备用．

               七叶苷水解试验

原理：

     粪链球菌能分解七叶苷（Escalin）其代谢产物与铁离子结合产生黑色沉淀，使培养基变黑．

方法：

     将菌种接种在七叶苷或琼脂上37℃18小时，观察结果，培养基变黑色，其他链球菌能生长但不变黑色，肺炎链球菌不长．

成分：

     七叶苷       0.1克                     胰胨           1.5克

     枸橼酸铁     0.2克                     琼脂           2.0克（0.5克/50毫升）

     胆汁         2.5毫升                     H2O            100毫升

     PH7.0分装小试管内高压灭菌后备用（10磅20分钟）

     七叶苷又名桑树皮甙，七叶灵，Aesclin  Escnlim  Bicolorin等．为白色针状结晶．水溶液兰色荧光．）

葡萄糖氧化发酵培养基（O/F）

成份：

    蛋白胨        2．7克                  氯化钠      5．0克

    0．2%溴麝香酚兰   0．03克            琼脂         3克

    KH2PO4       0．3克                 葡萄糖        10．0克

    水             1000毫升

制法：

以上成份除糖外，溶解调PH7．0，10磅高压灭菌20分钟后备