culture medium培养基大全.docx

1、culture medium培养基大全微生物培养基原理、制作和现象 食品微生物培养基及其成分 营养琼脂（普通琼脂） 成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤）100毫升 琼脂（视天气，琼脂质量而定） 制法：将上物加热溶解，补足水，调ph至76，过滤分装121，高压灭菌15分钟。 用途：作普通琼脂平皿。 血琼脂平板（BA） 制法：取营养琼脂（PH76），加热使其溶解待冷至45-50，以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5-10毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用。 用途：1一般棉拭子均接种此培养基。 2尿液，脓液 3分离细菌标本用。基础培养基（肉膏汤BB）

2、成份：蛋白胨10克牛肉膏5克 氯化钠5克水1000毫升 制法：将以上各物称好，加水煮沸溶解，用1NNOH校正PH至76，过滤分瓶，121高压灭菌，20分钟备用。 用途：1作耐药试验，增菌用分装小管。 2作普通琼脂斜面。 血液培养基（大管肉汤培养基） 成份：1新鲜牛肉浸液1000毫升 2PABA（对氨基苯甲酸相当于10mg/毫升）1g%1毫升 3MgSO4相当于0493/100毫升493%1毫升 4枸椽酸钠03g 制法：1将1号，4号混合液，2号，3号液分装高压灭菌。 2取灭菌1，4号混合液用无菌法加入PABA，MgSO4，再分管，行无菌试验三天方可使用。 用途：作血，骨髓培养用。 肠道杆菌培养

3、基（伊红美兰琼脂） 成份：蛋白胨10克乳糖10克 氯化钠5克琼脂25（22）克 水1000毫升2%伊红溶液20毫升 05%美兰溶液20毫升 制法：将蛋白胨，氯化钠琼脂称好，加水1000毫升使溶解，校正PH74过滤，补足失水，加入2%伊红溶液20毫升，05%美兰溶液20毫升，（115高压20分钟），冷却至50左右倾注平板，凝固后存冰箱备用。（高压以后方可再加乳糖） 用途：用作分离沙门氏，志贺氏菌属，也作菌群调查。 1 罗文斯坦培养基 成份：磷酸二氢钾24克硫酸镁024克 枸椽酸钠06克天门冬素36克 纯甘油（丙三醇）12毫升水600毫升 马铃薯粉30克鸡蛋1000毫升（约3公斤） 2%孔雀绿水溶

4、液20毫升 制法：1除鸡蛋外（还有孔雀绿）。可将其它物品称好，放入大三角瓶包扎好，高压灭菌。 2鸡蛋用75%酒精泡30分钟，灭菌法打蛋，倒入盛有玻璃珠的灭菌三角烧瓶内充分将鸡蛋摇散。 3将各成份按比例配好，分装每管约5毫升。 4间歇灭菌第一次901小时，第二次80半小时，第三次80半小时（或放85烤箱内连续二次）。 质控标准：1灭菌试验合格。 2接种结核杆菌要求两星期生长良好。 用途：作结核分枝杆菌培养用。 结核半固体培养基 成份：磷酸氢二钠19克硫酸镁06克 磷酸二氢钾25克天门冬素5克 1%孔雀绿15克甘油20毫升 吐温80（10%）5毫升水1000毫升 枸椽酸钠25克动物血清100毫升

5、琼脂15克（80小时用甲醇去脂） 1%孔雀绿078毫升吐温80（10%）5毫升 加动物血清100毫升 制法：1除血清外将上述药品均称好，放入煮沸溶解，调PH7。2 2分管（每管约10毫升）包扎好，高压，121半小时灭菌。 3待冷后无菌法加无菌血清（绵羊血或兔血）每管约1毫升备用。4去除琼脂方法：取琼脂若干或于三角烧瓶中加甲醇于琼脂1毫升用塞密封，放37温浴80小时，每天摇动一次，冷却后到时取出用滤纸过滤，待琼脂自然冷却后备用。 质控标准：1无菌实验合格。 2琼脂硬度合适而清亮。 3接种标准结核杆菌用，强度合适即可用。 用途：培养结核杆菌用。 亚碲酸钾血琼脂平板 成份：琼脂基础100毫升10%葡

6、萄糖2毫升 1%亚碲酸钾45毫升绵羊血10毫升 制法：1将琼脂基础溶解好，加入羊血。 2马上加热使成咖啡色后，稍冷再加入10%葡萄糖2毫升与1%亚碲酸45毫升混合后倒入无菌平板， 2 凝固后存冰箱备用。 质控标准：接种白喉杆菌生长良好，其它革兰氏阴性菌均抑制生长。 用途：供培养及鉴别白喉杆菌用。 米培养基 成份：白米20克水1000毫升 琼脂20克吐温8010毫升 制法：1将20克米加水200毫升煮沸45分钟，煮时将容器盖好。 2用纱布过滤，只要米汤，不要饭，加水至1000毫升。 3加琼脂20克，吐温-8010毫升煮溶，分装中型管（每管约3毫升），包扎好，高压，121半小时，消毒备用。 质控标

7、准：1灭菌。 2要求清亮。 3接种白色念珠菌17-24小时生长良好，并产生厚膜孢子。 用途：培养白色念珠菌用。 蛋白胨水培养基 成份：蛋白胨1克氯化钠05克 水加至100毫升PH调至78 制法：把以上各物称好溶于水，调节PH76分装消毒备用。 质控标准：1放置37无菌生长。 2接种大肠杆菌24小时生长良好。 3可作中国兰平板基础液。 可作靛基质基础液（作此试验需要色氨酸蛋白胨）。 血培养基 成份：蛋白胨10克牛肉膏5克 氯化钠5克葡萄糖3克 枸椽酸钠3克MgSO4。7H2O20毫升 05%PABA10毫升酵母浸液10毫升02克（2%过滤） *酚红04%6毫升水1000毫升 琼脂05克 *：作大

8、BB，小BB时，不要加酚红和琼脂。 制法：1。除PABA、硫酸镁、酚红外均称好煮化调PH74 2。调好PH后再加酚红。 3。硫酸镁、PABA另外无菌再加入（亚细，小BB） 沙氏培养基 成份：蛋白胨1克水100毫升 琼脂15克（琼脂粉1克%）葡萄糖或麦芽糖4克 3 制法：1将上述物质称好，放入水中煮沸溶解（不必调PH即有5左右）分中号试管（约4毫升）包扎，高压11520分钟。 2趁热斜好，凝固备用。 质控标准：1无菌试验合格。 2接种霉菌比在其它培养基上生长良好，其它菌生长不好。 用途：作分离培养霉菌用。 注意：1接种临床新鲜标本可先加1-2滴70%酒精让干后再接种于含125%氯霉素沙氏斜面培养

9、基上。 2也可用蜂蜜8克代替葡萄糖或麦芽糖。 肉渣培养基 成份：牛肉渣牛肉浸液（牛肉膏） 制法：将做牛肉浸液的牛肉渣，装入试管，高约3毫米，加入牛肉浸液或牛肉膏汤（PH76）约5毫升，比肉渣高一倍，液面上加入已溶解的凡士林，高约05厘米（不加也可），121高压灭菌20-30分钟后保存于冰箱内备用。 用途：用于厌氧菌培养。 注意：如无肉渣也可用牛、羊血等代替，将血块先放入水内煮沸，取出成小块，血块在加热后摇匀成碎颗粒状。 单糖发酵管培养基（半固体）成份：PH76-78蛋白胨水1000毫升（03克/100毫升） 12%酚红液04毫升 琼脂04-05克 10%糖或醇10毫升 制备：把蛋白胨水，琼脂加

10、热溶解，然后加12%酚红液04毫升，10%糖10毫升，混匀，分装试管，每管约2-3毫升，经115高压灭菌20分钟后，分置于试管架上，贴上各类糖或醇类标签备用。 质控标准：细菌发酵糖类或醇而产生酸，能使培养基PH改变，指示剂由红变黄色，如因发酵产生气体则 半固体内产生气泡，如有动力则半固体由清亮变混浊。 明胶培养基 成份：肉浸液1000毫升（牛肉浸膏5克） 明胶12克 制法： 100毫升肉浸液中，加入明胶12克，隔水加热煮化，校正PH72，分装小号试管，用阿诺氏间歇灭菌8030分钟，连续3日，或者108高压20分钟，冷却，贮存备用。 碱性蛋白胨水 成份： 蛋白胨20克氯化钠5克 硝酸钾01克结晶

11、碳酸钠（NaclCO312H2O）02克 水1000毫升 4 制法：将蛋白胨，Nacl，硝酸钾，结晶碳酸钠称好，溶于1000DW中，校正PH84分装试管，121高压 灭菌15分钟后备用。 用途：用于霍乱弧菌培养。 葡萄糖蛋白胨水（M。V用） 成份：蛋白胨5克葡萄糖5克 K2HPO45克水1000毫升 制法：将上述称好溶解分装试管，调PH74高压灭菌115灭菌20分钟，或者葡萄糖加热煮沸后再倒试管 标准：灭菌试验合格。 接种大肠杆菌VP阴性，M阳性；接种产气杆菌VP阳性，M阴性。 用途：作鉴别肠道杆菌用。 枸椽酸盐培养基 成份：磷酸二氢铵01克硫酸镁002克 磷酸氢二钾01克枸椽酸钠023-05

12、克（036） 氯化钠05克琼脂15克 05%溴麝香草酚兰2毫升（调PH68再加） 制法：将上述称好，放入水中煮沸溶解，调PH68，然后分装中号试管，高压灭菌，趁热倒呈斜面，凝固 后备用。 标准：1灭菌试验合格，培养基呈果绿色适宜。 2接种大肠杆菌，培养基上不生长，也不变色。 3接种产气杆菌，培养基呈深兰色。 用途：作鉴别大肠杆菌用。 双糖铁培养基 成份： 下层：蛋白胨1克氯化钠05克 葡萄糖02克琼脂03-05克 水100毫升 将上述物质混匀调PH76后加12%酚红04毫升 上层：蛋白胨1克氯化钠05克 乳糖1克硫代硫酸钠003克 硫酸亚铁002克琼脂1克 水100毫升 制法：1将下层配好，分

13、装中号试管（1毫升），塞好包扎，15磅高压灭菌半小时，使凝固后备用。 2制上层时，先将蛋白胨水制好，加入硫酸亚铁，硫代硫酸钠，加热溶解PH81，再加入酚红分瓶，（每瓶300毫升，称取琼脂包扎灭菌，趁热加入乳糖隔水煮沸30分钟或112消毒15分钟）。 3取已制的下层管，每管用无菌法倒入上层液约1。5毫升，边斜放置使成斜面，凝固后备用。 标准：无菌试验合格，接种大肠杆菌下层产酸产气，上层产酸。 尿素培养基 成份：蛋白胨01克氯化钠05克 磷酸二氢钾02克尿素02克（或10%2毫升） 葡萄糖001克（或10%葡萄糖01毫升） H2O100毫升酚红（02%）04毫升制法：1除葡萄糖，尿素外把其它药品称

14、好放入水中煮沸，使溶解，调PH72过滤，15磅高压灭菌15分钟 2配制尿素（灭菌）液：每100毫升基液内加2毫升 3配制10%葡萄糖（灭菌）每100毫升加01毫升 4分装小试管待用 标准： 1灭菌试验合格 2接种变形杆菌24小时呈红色 用途：鉴定变形杆菌用 胆盐中性红琼脂 成份：蛋白胨琼脂PH72-745000毫升 胆盐25克 乳糖50克 对氨基苯甲酸25毫克 1%中性红溶液25毫升 制法： 将胆盐，对氨基苯甲酸，乳糖趁热加入已灭菌之蛋白胨琼脂中，待冷至50-60时，加入1%中性红液25毫升，混合后即倾注平皿，凝固待用 *：1%中性红：1克中性红加酒精60毫升，加水40毫升 丙二酸盐培养基（缩

15、苹果酸钠） 成份：丙二酸钠03克酵母浸膏01克 Nacl02克硫酸铵02克 K2HPO4006克KH2PO4004克 水100毫升 PH68，高压灭菌备用 02%溴麝香酚兰乙醇125毫升 制法：与枸椽酸盐利用试验相类似，是测定细菌能否利用丙二酸盐与碳源无机铵盐为氨源而生长，生长者使培养基变成碱呈兰色 鉴定：克氏杆菌（+）赫夫尼亚（+） 沙门氏菌（）痢疾杆菌（） 苯丙氨酸培养基 成份：酵母浸液15克DL-苯丙氨酸1克 磷酸氢二钠（无水）05克（或L-苯丙氨酸05克） 氯化钠25克琼脂6克 水500毫升PH74 制法：1将上述成份加热溶解，分装于12*125mm口径的试管中，每管约4毫升 2高压灭

16、菌15磅10分钟，趁热使试管斜置凝固后备用 3接种时划斜面 用途：鉴定沙门氏菌用苯丙氨酸脱氨酶试验沙门氏菌阴性 双抗培养基 成份： 蛋白胨10克牛肉膏5克 氯化钠5克无水亚硫酸钠3克 柠檬酸钠10克蔗糖10克 琼脂粉20克水1000毫升 制法： 1将上物称好，加热溶于水中 2调PH8284 3分装高压灭菌后备用 倾注平板前先加热溶解琼脂等冷至50左右，按无菌操作加入多、庆抗菌素充分摇匀，倾注平板，凝固后备用 （庆大霉素：150u/毫升，多粘菌素：1500u/毫升,2毫升加至1000毫升培养基内，此相当于庆大霉素0.3u/毫升,多粘菌素3u/毫升） O2培养基 保存液：（文腊氏液） A液：硼酸1

17、2405克KCL14912克 水1000毫升 取A液250毫升08%NAOH1335毫升 NACL20克水1000毫升 分装高压灭菌 硝酸盐胨水 成份： 蛋白胨1克 硝酸钾（无NO2）01克 H2O100毫升 PH74，高压灭菌分装备用 （如无硝酸钾也可用硝酸钠002克，NACL005克，H2O100毫升） 用途：硝酸盐还原试验用 原理：测定细菌能否还原硝酸盐为亚硝酸盐，后者在酸性条件下与a萘胺和对氨基苯磺酸发生重氮反应，生成红色的1-萘-4偶氮苯对磺酸 制法：试剂甲液A对氨基苯磺酸08克溶于5N的醋酸100毫升 B：乙液a-萘酚05克溶于5N的醋酸100毫升中 将细菌接种于硝酸盐水中37培养

18、24-96小时，加入甲液01毫升，再加入乙液数滴，立即呈现红或紫色为阳性king氏培养基（能促进绿脓菌绿色素产生） 成分： 蛋白胨2克K2SO41克 甘油1克MGCL20.14克 琼脂1.5克H2O100毫升 KING氏培养基（能促进绿脓菌荧光色产生） 成分： 蛋白胨2克甘油1克 K2SO40.15克MGSO44.7克H2O0.15克 琼脂1.5克H2O100毫升 调PH7.215磅20分钟消毒后使成斜面备用 七叶苷水解试验 原理： 粪链球菌能分解七叶苷（Escalin）其代谢产物与铁离子结合产生黑色沉淀，使培养基变黑 方法： 将菌种接种在七叶苷或琼脂上3718小时，观察结果，培养基变黑色，其他链球菌能生长但不变黑色，肺炎链球菌不长 成分： 七叶苷0.1克胰胨1.5克 枸橼酸铁0.2克琼脂2.0克（0.5克/50毫升） 胆汁2.5毫升H2O100毫升 PH7.0分装小试管内高压灭菌后备用（10磅20分钟） 七叶苷又名桑树皮甙，七叶灵，AesclinEscnlimBicolorin等为白色针状结晶水溶液兰色荧光） 葡萄糖氧化发酵培养基（O/F） 成份： 蛋白胨27克氯化钠50克 02%溴麝香酚兰003克琼脂3克 KH2PO403克葡萄糖100克 水1000毫升 制法：以上成份除糖外，溶解调PH70，10磅高压灭菌20分钟后备