畜禽血液和病料采集技术.docx

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畜禽血液和病料采集技术

第一章 畜禽血液和病料采集技术Kgbm/L0XR* 

第一节畜禽血液采集技术y~S_V

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一、要求:

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1、所有采血用具均应事先以消毒、干燥处理;~_4~`_bT9 

2、采血部位要进行剪毛、清拭并按常规进行消毒(先碘酊后酒精)。

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3、怀疑传染病时,采血过程要防止到处流散,检后的残余血液及所用器皿要进行消毒处理。

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4、需抗凝的要加入抗凝剂。

常用的抗凝剂有:

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①双草酸盐抗凝剂:

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 草酸钾   0.6克;草酸铵   1.2克;蒸馏水 加至100毫升;溶解后,吸取0.5毫升,加入供采血用的试管或小瓶中,置干燥箱内(温度不能超过80℃),烘干备用(实际含草酸盐10毫克,可供5毫升全血抗凝用)m_D_B_ 

②枸橼酸钠6mg可使1ml血液不凝固,或配成3.8%的溶液。

适用于血钙的测定和血沉测定时的抗凝。

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③乙二胺四乙酸二钠(EDTA二钠)每10毫克可使5毫升全血抗凝;或配成10%的溶液,每2滴可使5毫升全血抗凝。

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④肝素对血中有机成分和无机成分测定均无影响,多用于科研。

常用肝素钠配成1ml内含1mg(0.1%)的水溶液,取0.1ml分装于小试管或小青霉素瓶中,在80℃以下烤干后备用,可使5~10ml血液不凝固。

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5、需分离血清的血液(不抗凝),试管要静置、斜放,便于血清晰出。

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6、注意安全。

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二、家禽血样的采集{zdMm_p_QF 

(一)鸡翅内侧静脉采血d__UI5,3_* 

1、器械准备:

酒精棉球;小试管或细塑料管,试管架;镊子;配5~7#针尖的一次性注射器。

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2、保定:

手提保定。

助手一手抓住两只鸡腿,一手抓鸡翅根部,以拇指按压静脉管。

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3、部位确定:

鸡翅内侧腋静脉,肉眼可见。

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4、操作:

助手抓住鸡翅根部,以拇指按压静脉管,使之充盈。

术者左手大拇指捏住鸡翅内侧,余四指捏住鸡翅外侧,展平鸡翅,右手持针,沿血管方向,于血管傍先刺入皮下,然后再斜刺向血管,抽取血液(此法避免拔针后出血过多)。

也可直接刺向血管,抽取血液(采用此法,拔针后要用干棉球按压数分钟止血)。

或者将鸡翅摆平,直接先将静脉用针刺破,待血液流出后,用细塑料管利用虹吸的原理吸取血液,事毕,用火将细塑料管一头封闭。

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(二)鸡心脏采血sDY~jP[_Oa 

方法1U|(_+_-R8Z 

操作要点:

鸡左侧向上横卧保定,拔去胸上部部分羽毛,寻找由胸骨走向肩胛的皮下大静脉,心脏约在该静脉的分支下侧,有时用食指可摸到心脏跳动。

用酒精消毒后,以碘酊标记部位。

针头(7#)刺入时,如触及胸骨可稍拔出,使针头稍向右偏,避开胸骨,再将针头向里刺入,边刺边抽动活塞,若刺入心脏,便有血液涌入注射器,术毕,局部消毒。

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方法2{Kz__,_bo 

操作要点:

鸡仰卧保定,鸡头部朝向术者,拔去胸上部少许羽毛,用手指在胸骨上方、嗉囊下方摸得一凹窝,右手持针(7#),自胸骨上方凹窝斜向前下方心脏方向(鸡的左侧、术者的右侧)刺入,边刺边抽动活塞,若刺入心脏,便有血液涌入注射器,术毕,局部消毒。

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注意:

此法(含方法1、2)采血后,多会引起鸡只死亡,仅适用于淘汰鸡的采血。

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(三)鸡头部静脉窦采血H}@:

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1、器械准备:

酒精或碘酊棉球;小试管,试管架;镊子;配5-7#短针尖的一次性注射器。

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2、保定:

助手一手抓鸡的两只腿,一手抓鸡的两翅,使头部向上。

术者左手食指和中指夹住鸡喙,大拇指压住颈上部,以此固定头部。

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3、部位确定:

鸡头后部,枕骨大孔为刺入点。

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4、操作:

鸡只如上述方法确切保定后,枕骨大孔部少许拔毛,消毒,术者右手持针,自枕骨大孔进针,针头对准喙尖,约与颈椎纵轴成45°角,刺入约0.5~0.8cm(视鸡只大小),刺入静脉窦后,针头感觉无阻力,抽取血液,术毕消毒。

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注意:

此法采血后,亦会引起鸡只死亡,故适用于淘汰鸡的采血。

苗鸡采血亦可用此法。

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第二节畜禽病料采集技术gT+/n_SrLV 

一、样品采集的原则7u_bz7__* 

采集检测样品是诊断检测工作的重要内容。

采样的时机是否适宜,样品是否具有代表性,样品处理、保存、运送是否合适及时,与检验结果的准确性、可靠性关系极大。

采集样品时,需要符合以下规定:

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1、适时采样。

根据检测要求及检测对象和检验项目的不同,选择适当的采样时机十分重要。

样品是有时间要求的,应严格按规定时间采样,有临床症状需要作病原分离的,样品必须在病初的发热期或症状典型时采样,病死的动物,应立即采样。

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Ss__pu_V 

2、合理采样。

根据诊断检测的要求,须严格按照规定采集各种足够数量的样品外,不同疫病的需检样品各异,应按可能的疫病侧重采样。

对未能确定为何种疫病的,应全面采样。

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3、典型采样。

选取未经药物治疗、症状最典型或病变最明显的样品,如有并发症,还应兼顾采样。

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4、无菌采样。

采集检验样品除供病理组织学检验外还供病原学及血清学检验,供病原学及血清学检验的样品,必须无菌操作采样,采样用具、容器均须无菌处理,尸体剖检需采集样品的,先采样后检查,以免人为污染样品。

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5、适量采样。

采集样品的数量要满足诊断检测的需要,并留有余地,以备必要时复检使用。

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6、样品处理。

采集的样品应一种样品一个容器,立即密封,根据样品的性状检验要求的不同,作暂时的冷藏、冷冻或其它处理。

供病毒学检验的样品,数小时内要送到实验室,只作冷藏处理,超过数小时的要冷冻处理,(冻结方法:

可将样品放入-30℃冰箱内冻结,然后再装入有大小冰块或干冰的冷藏瓶(箱)内运送,亦可将装入样品的容器放入隔热保温瓶内,再放入冰块,然后按100g冰块加入食盐约35克,立即将隔热保温瓶瓶口塞紧。

瓶内温度可达-21℃左右)。

供细菌学检验或血清学检验的样品,冷藏送实验室即可。

装样品的容器应贴上标签,标签要防止因冻结而脱落,标签标明采集的时间、地点、号码和样品名称,并附上发病、死亡等相关资料,尽快送实验室。

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7、安全采样。

既要保护采样人员,以要防止病原外泄,还要防止样品受到污染。

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8、样品包装。

主要是密闭,防止样品损坏、污染和外泄等意外发生。

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迅速送检。

应尽快送实验室进行检测,延误送检时间,会影响到检测质量和结果的可靠性。

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二、血液样品的采集'_U@o!

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1、病毒检验用血液样品。

应在动物发病初体温升高期采集。

血液样品必须是脱纤血或是抗凝血。

抗凝剂可选用肝素或EDTA,枸缘酸钠对病毒有轻微毒性,一般不宜采用。

采血前,在真空采血管或其它容器内按每毫升血液加入0.1%肝素1ml或EDTA20mg。

采集的血液立即与抗凝剂充分混合,防止凝固。

采脱纤血时,先在容器内加入适量小玻璃珠,加入血液后,反复振荡,以便脱去血液纤维。

采集的血液经密封后贴上标签,以冷藏状态立即送实验室。

必要时,可在血液中按每毫升加入青霉素和链霉素各500~1000IU,以抑制血源性可采血中污染的细菌。

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2、细菌检验样品。

采血应在动物发病初体温升高或发病期,未经药物治疗期间采集。

血液应脱纤或加肝素抗凝剂(或EDTA或枸缘酸钠),但不可加入抗生素。

采集的血液经密封后贴上标签,以冷藏状态立即送实验室,否则须置4℃冰箱内暂时保存,但时间不宜过久,以免溶血。

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3、血清学检验样品。

用作血清学检验的样品不加抗凝剂或脱纤处理。

为保障血清质量,一般情况下,空腹采血较好。

采集的血液贴上标签,室温静置待凝固后送实验室,并尽快将自然析出的血清或经离心分离出的血清吸出,按需要分装,再贴上标签冷藏保存备检。

较长时间才检验的,应冻结保存,但不能反复冻融,否则抗体效价下降。

作血清学检验的血液,在采血、运送、分离血清过程中,应避免溶血,以免影响检验结果。

采集双份血清检测比较抗体效价变化的,第一份血清采于发病的初期并作冻结保存,第二份血清采于第一份血清后3~4周,双份血清同时送实验室。

4、寄生虫检验样品。

因不同的血液寄生虫在血液中出现的时机及部位各不相同,因此需要根据各种血液寄生虫病的特点,取相应时机及部位的血液制成血涂片,送实验室。

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三、组织样品的采集7_#8G_n=g 

组织样品一般由扑杀动物或病死尸体剖中采集。

从尸体采样时,先剥去动物胸腹部皮肤,以无菌器械将腹腔打开,根据检验目的和生前疫病的初步诊断,无菌采集不同的组织。

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1、病毒检验样品。

作病毒检验的组织,必须以无菌技术采集,组织应分别放入灭菌的容器内并立即密封,贴上标签,放入冷藏容器立即送实验室。

如果时间较长,可作冻结状态运送,也可将组织块浸泡在PH7.4左右的乳汉液或磷酸缓冲肉汤保护液内,并按每毫升保护液加入青霉素、链霉素各1000IU,然后放入冷藏容器内送实验室。

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2、细菌检验样品。

供细菌检验的组织样品,应新鲜并以无菌技术采集。

如遇尸体已经腐败,某些疫病的致病菌仍可采集于长骨或肋骨,从骨髓中分离细菌。

采集的所有组织分别放入灭菌的容器内并立即密封,贴上标签,放入冷藏容器立即送实验室。

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四、粪便样品的采集.UyE|t4_ 

1、病毒检验样品。

分离病毒的粪便必须新鲜。

少量采集时,以灭菌的棉拭子从直肠深处或泄殖腔粘膜上蘸取粪便,并立即投入灭菌的试管内密封,或在试管内加入少量PH7.4的保护液再密封。

贴上标签冷藏送实验室。

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2、细菌检验样品。

作细菌检验的粪便,最好在动物使用抗菌药物之前,从直肠或泄殖腔粘膜上采集,采样方法与供病毒检验的相同。

可投入无菌缓冲盐水或肉汤的指形管内,贴上标签冷藏送实验室。

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3、寄生虫检验样品。

粪便样品应选取新排出的或直接从直肠内采得,以保持虫体或虫体节片及虫卵的固有形态,一般寄生虫检验的粪便用量较多。

采得的粪便以冷藏不冻结状态送实验室。

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第三节 几种畜禽疫病的样品采集Ts_i_JK 

一、禽流感的样品采集、保存和运输P<<$__o-a" 

病毒主要在呼吸道粘膜细胞内增殖。

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(一)病禽N(__/_)_e 

1、至少从5只濒死禽采集样品。

样品包括:

泄殖腔拭子和气管拭子(置于缓冲液中)各5个(小珍禽可采集新鲜粪便);气管和肺的混样5个,肠管及内容物的混样5个;肝、脾、肾和脑等组织样品(不能混样)各5个。

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采集方法:

1)泄殖腔棉拭子:

将棉拭子插入肛门并旋转,使粪便沾在拭子上,后放在运输缓冲液中。

2)气管棉拭子:

活鸡采样时,将棉拭子插入活鸡的气管内,轻轻擦拭气管壁并放入缓冲液中。

死亡动物采气管样品时,可在肺和气管离体情况下进行采集,应将棉拭子插入较深部位用力擦拭,并按上述方法将棉拭子放在运输缓冲液中。

3)粪便样品:

可从活禽市场采取新鲜粪便,用棉拭子沾取粪便,并将采好的样品放在运输缓冲液中。

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2、分别采集至少10个病鸡的血样(急性发病期血清)。

采集10只病禽的血样,使用一次性采血器,心脏或翅静脉采血,每只禽采血样2ml~3ml,经离心或自然析出血清后,将血清移到指形管中。

封好口,贴好标签。

不同禽只的血样不能混合。

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(二)病死禽MqmQ5__2HR 

无发病禽时,可从死亡不久的病禽采样,采样要求同病禽。

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棉拭子单独放入容器,容器中盛放含有抗菌素的PH值为7.0~7.4的PBS液。

抗生素的选择视当地情况而定,组织和气管拭子悬液中加入青霉素(20001U/mL)、链霉素(2mg/mL)、庆大霉素(50цg/mL)、制霉菌素(100001U/mL)。

但粪便和泄殖腔拭子所用的抗生素浓度应提高5倍。

加入抗生素后pH值应调至7.4。

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(三)样品的保存和运输T_^bAO-d# 

1、血样要单独存放,不能混合。

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2、样品应密封于塑料袋或瓶中,置于有制冷剂的容器中运输,容器必须密封,防止渗漏。

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3、样品若能在24小时内送到实验室,冷藏运输。

否则,应冷冻运输。

若样品暂时不用,则应冷冻(最好-70℃或以下)保存。

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二、新城疫]>_3_Y~KH( 

新城疫病毒存在于病鸡所有器官、体液、分泌物和排泄物,以脑、脾和肺含毒量最高,骨髓含毒时间最长。

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样品:

眼分泌物、泄殖腔拭子、脾脏、气管粘膜、脑等。

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