家兔基础实验操作及注意事项总结.docx
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家兔基础实验操作及注意事项总结
家兔基础实验操作及注意事项总结
基本技能操作经验总结
(一)家兔的给药、基本手术及相关仪器的初步使用
1.家兔的捉拿
【实验方法】先轻轻打开笼门,勿使其受惊,随后手伸入笼内,从头前阻拦其跑动,一只手迅速抓住兔的颈背部的皮毛,慢慢提起家兔,然后用另一只手轻轻托住臀部,尽量使兔处在舒适、放松的状态。
【注意事项】避免抓住耳朵提拿家兔,这样不但会损伤家兔的耳朵,而且易引起家兔的紧张并激起挣扎和反抗。
抓取动物时手法不当,动作过激导致家兔惊吓,产生强烈挣扎而长时间处于激动状态,大脑皮层细胞兴奋阈值增加,肾上腺素的释放,大脑中枢电位频率增高,大脑皮层运动区过度兴奋,导致麻醉效果不佳。
2.家兔的称重与放置
【实验方法】兔笼放置在电子秤上,去皮。
将兔子脖子卡住兔笼头端的凹槽,盖上兔笼盖,使兔子呈趴伏状,记录数据。
压住兔笼盖和后座,将兔笼转移到操作台准备实验。
【注意事项】兔笼重量提前去皮;尽量避免头尾不对应;时刻注意压住兔笼盖,避免转移途中兔子挣脱。
3.耳缘静脉麻醉
【实验方法】穿刺前准备工作:
穿刺前应拔除待穿刺血管部位的兔毛,轻柔或以手指轻弹待穿刺的血管使其充血扩张,或用酒精棉球涂擦待穿刺的血管使血管扩张。
穿刺手法:
左手食指和中指夹住静脉的近端,拇指绷紧静脉的远端,无名指及小指垫在下面,右手持头皮针尽量从静脉的远端刺入。
若回抽注射器有暗红色血液流出或注射时若无阻力、无隆起现象,说明针头在血管内。
移动拇指于针头上以固定针头,放开食指和中指,将药液缓慢注入,然后拔出针头,用手压迫针眼片刻。
●注:
本实验所用麻醉药——乌拉坦用药剂量为1000mg/Kg。
【注意事项】1.进针部位宜选择在耳缘静脉远心端的血管段,若穿刺失败,可向近心端前移一段再进行穿刺;
2.可利用酒精棉球擦拭使耳缘静脉血管扩张,便于操作;
3.静脉注射必须缓慢(大概每分钟推送5ml),同时观察家兔肌肉紧张、角膜反射和对皮肤夹捏的反应,当这些活动明显减弱或消失时,应立即停止注射。
在注射麻醉药物时,可先用麻醉药物总量的三分之二,密切观察动物生命体征的变化,若已达到预计麻醉效果剩余药液可暂不注射,以避免麻醉过深抑制呼吸中枢导致动物死亡;
4.实验动物的固定
【实验方法】将动物麻醉后,仰卧位固定于手术台上,颈部伸直,口腔与气管成一直线,保持气管畅通。
用粗麻绳打类蝴蝶结固定家兔四肢,用棉麻线套住家兔上切牙固定在兔台头端,使家兔四肢和头部伸展并固定。
【注意事项】1.打结最好打利于捆缚的结,避免家兔挣脱。
2.尽量使颈部抻直,避免扭曲。
5.清理兔毛
【实验方法】使用弯头兔毛剪剪掉实验部位兔毛。
【注意事项】1.左手捏住要剪的兔毛,方便剪掉
图1执刀方法和组织切开方法
(4)组织的切开处应选择无重要血管及神经横贯的地方,以免将其损伤。
(5)选择切口时,应注意选择易于敷料或导管包扎和固定的部位。
避免术后动物活动时被碰撞、磨擦而脱落。
6.组织分离
【实验方法】分离目的在于充分显露深层的组织或血管,便于手术操作。
1.组织分离的一般原则
(1)根据不同部位手术的需要采用不同的分离方法。
常用的分离方法有两种:
①用刀或剪作锐性分离,用剪割的方式将组织分离。
该方法常用于致密组织,如皮肤、韧带、筋膜等的分离。
②用止血钳、手指或刀柄等将组织推开或牵拉开的钝性分离。
该法多用于皮下组织、肌肉筋膜间隙等疏松组织的分离。
(2)沿正常组织间隙分离。
这样易于分离,且出血少,视野干净、清楚。
【注意事项】
(1)肌肉的分离应顺肌纤维方向作钝性分离。
若需要横行切断分离,应在切断处上下端先夹两把血管钳,切断后结扎两断端以防止肌肉中血管出血。
(2)神经、血管的分离应顺其平行方向分离。
要求动作轻,柔,细心操作,不可避暴,切忌横向过分拉扯,以防断裂。
7.气管内插管
【实验操作】气管插管的目的主要是为了辅助呼吸、测定气道压力、通气量以及描记呼吸曲线等。
⑴气管的暴露和分离切开皮肤后,对肌肉、气管、血管和神经的分离应用止血钳进行钝性分离。
钝性分离皮下组织,暴露颈部肌肉,分开颈部正中肌群即可看到气管。
在甲状腺下1~1.5cm处,用止血钳将气管后的软组织稍加分离,在气管下穿二条较粗的结扎线,准备结扎固定气管插管之用。
⑵气管插管在甲状腺以下约1~2cm处,用手术剪将气管软骨环剪一倒“T”型切口,剪开气管口径约一半以上,用棉签向肺方向擦净气管内分泌物,然后再向肺方向插入气管插管。
用已穿好的粗线扎紧后,再在插管的侧管上打结,以防插管脱出。
【注意事项】1.切忌粗暴操作,小心勿伤及甲状腺及气管两侧后方的静脉;
2.不要在软骨环之间的气管组织切开,因此处血管较多,如仍有出血,可用温湿纱布压拨迫片刻,同时将兔台后部抬高,使兔头位置低下,以防止血液流入气管造成窒息,出血停止后再做插管;
3.插管前注意检查气管内有无内分泌物,有的话先清理气管后插管;插管后,若气管内分泌物或血液较多,可用一细塑料管从插管的侧管处将液体吸出。
4.用已穿好的粗线扎紧后,再在插管的侧管上打结,以防插管脱出;
5.气管插管的过程中应随时注意观察动物的呼吸变化。
最好隔一段时间放开被夹闭的Y型管软管,避免人为性呼衰。
8.颈总动脉的分离及插管
【实验操作】沿胸锁乳突肌前缘分离胸骨舌骨肌与胸骨甲状肌之间的结缔组织,在肌缝下找到呈粉红色较粗血管,用手指触之有搏动感,即为颈总动脉。
分离颈总动脉时应选在距甲状腺以下较远地方开始,防止将甲状腺前动脉切断,用玻璃分针轻轻分离该动脉与神经之间结缔组织,切勿损伤血管和神经。
在分离好的颈总动脉下面穿过两根结扎线,先结扎远心端,再用动脉夹夹闭血管近心端。
于远心端结扎线前用眼科剪呈45°角做V型切口,剪开血管管径的1/3~1/2。
将准备就绪的动脉导管插入血管2cm~3cm,用备用线将导管与血管牢固结扎并与远心端结扎线连接扎紧,以防导管滑脱出血管。
取下动脉夹,可见导管中有动脉回血,并随心跳而搏动。
用少许肝素将回血推回血管内,实时观察血压。
【注意事项】1.分离颈总动脉时应选在距甲状腺以下较远地方开始,防止将甲状腺前动脉切断,并且切勿损伤血管和神经。
伴行血管的一束神经包括:
迷走神经最粗且明亮;交感神经次之,光泽较暗;最细的是减压神经;
2.为了便于动脉插管,颈总动脉应尽量分离得长一些。
一般家兔4cm~5cm,豚鼠和大鼠2cm~3cm;
3.结缔组织尽量分离干净,否则插管时容易插到膜内;
4.两根结扎线可通过一根线对折穿过动脉下后剪断获得。
远心端结扎线和备用结扎线一定要结扎紧,避免出血;
5.动脉夹操作时一定要小心避免磨破动脉,最好将动脉夹深入颈总动脉下于动脉夹中段夹闭血管,以防夹闭不完全;
6.插入血管内插管尽量长,此时易于固定。
但是一定不要插到动脉夹夹闭处,因为插管和动脉夹都是硬性材料,两厢触碰易使动脉管破裂;
7.喷血时,应迅速找到出血口,并及时夹闭近心端血管,并用棉球清理创面;若还是出血不止,则考虑是否是远心端结扎线未扎紧,这时夹闭远心端;若各种措施都不起效,则可以考虑完全结扎实验侧颈总动脉;
8.若是少量出血,则可能只是毛细血管受到损伤,这是可用棉球轻轻压迫创面即可止血。
10.输尿管插管
【实验方法】下腹部剪毛,普鲁卡因局麻,在耻骨联合向上沿中线做长约4cm的切口,沿腹白线切开腹膜,暴露出膀胱,并将膀胱翻向体外,在膀胱底部找到并分离两侧输尿管,在输尿管靠近膀胱处用线结扎,略等片刻,待输尿管略充盈后,用眼科剪剪一小口,向肾脏方向插入一根细塑料管,结扎,收集尿液。
【注意事项】1.家兔膀胱十分脆弱,分离时应用镊子探查,避免直接用手术刀或剪刀粗暴分离;
2.输尿管位置较深,分离和插管时需一人协助拨开肠子和拉扯膀胱,此时需注意用力大小,用力过大时膀胱会因尿液排出而迅速缩小(并不影响实验);
3.如果可以,分离输尿管时避免损伤伴行血管,否则会大出血影响视线;
4.输尿管近膀胱处结扎后,可略等片刻,待输尿管略充盈后在剪口插管,会容易很多;
5.插管的管子剪口需有一定锐度,但锐度过高易损伤输尿管;插管时,可转动插管,使斜面向下,否则易撕裂输尿管。
11.处死
【实验方法】空气栓塞法
【注意事项】判断家兔死亡的标准可以是呼吸停止,这是可能生物电还存在波动,可能原因是心脏自律细胞还在活动,但此时心脏功能细胞其实已经停止工作,故可以判定为死亡。
12.其他注意事项
1.创面长时间开放时,可撒些生理盐水或用生理盐水浸润的纱布覆盖,以防组织风干;
2.切开皮肤前,可少量多点注射局麻,避免家兔因损伤皮神经而剧烈反抗。
13.整体动物体征的观察及应对
1.兔耳耷拉,表示家兔饮水不足,这时需及时给家兔补充水分,否则会影响实验结果;
2.家兔呼吸急促并伴有鸣声,表示家兔呼吸系统有问题,气管插管时应注意清理气管,并在不需要呼吸频率数据的时段打开Y型管软管,使呼吸通畅。
时刻注意呼吸频率的变化。
3.当血压降低时,可能是失血过多,此时家兔可能已经休克。