脱氢酶活性测定.docx
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脱氢酶活性测定
实验（七）脱氢酶活性测定
脱氢酶的正式命名应是AH:
B氧化还原酶，它能酶促自一定的基质中脱出氢而进行氧化作用。
脱氢酶广泛存在动植物组织和微生物细胞内。
脱氢酶的种类因电子供给体和接受体的特异性而有不同。
单位时间内脱氢酶活化氢的能力表现为它的酶活性。
通过测定活性污泥或土壤中微生物的脱氢酶活性，可以了解微生物对污泥或土壤中有机物氧化分解能力，即污泥酶或土壤酶的活性。
利用已知受氢体能接受脱氢酶脱出的氢原子，如无色的氯化三苯基四氮唑
（TTC,2，3，5-triphenyltetrazoliumchloride），俗称红四唑，接受氢后变成红色的三苯基甲臜（TF，triphenylformazan）,根据产生红色的色度进行比色定量分析，以判断脱氢酶活性。
TTC作为受氢体，其还原过程可用下式表示。
H
N-N-C6H5C6H5-
+
N=N-C6H5CI
+2e-
+2H+
H
C6H5
N-N-C6H5
-+HCL
N=N-C6H5
（无色TTC）
（红色TF）
根据红色的深浅，
测出相应的吸光值（
A值），求出脱氢酶的活性。
通常A
值越大（红色深），脱氢酶活性越高。
1.1材料与方法
（1）材料活性污泥悬浮液或土壤悬浮液。
（2）方法分光度法。
要点①所有操作应当尽量在避光条件下进行。
脱氢酶最适反应条件，温度
30〜37°C,PH值7.4〜8.5。
2取用甲醛时要小心，不要碰到皮肤上，如若沾到皮肤上要迅速用自来水冲洗。
2.2实验步骤
（1）绘制TTC标准曲线
1配制系列浓度的TTC标准溶液。
先取5支50mL带塞比色管，按顺序尽快分别加入0.36%Na2S03溶液2.5ml,Tris-HCl缓冲液（pH值7.6）7.5mL在分别吸取0.4%TTC溶液0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL,放入5支比色管中，用蒸馏水定容至50mL,使成8血mL-1、32⑷mL-1、40⑷mL-1系列浓度。
同时另取一支50mL比色管，加入0.36%Na2SO3溶液2.5mL,Tris-HCI缓冲溶液（pH值7.6）7.5mL,加入蒸馏水至50mL,作为空白对照。
2向每支比色管中各加入少许（十几粒）连二亚硫酸钠（Na2SO4）混匀，
使TTC全部还原成红色的TF（三苯基甲臜）。
3向各管滴加5mL甲醛终止反应，摇匀后加入5mL丙酮振荡摇匀，37C水浴10分钟。
4在485伽波长下测定吸光值A。
5以A值为纵坐标，TTC浓度为横坐标，绘制出TTC标准曲线。
（2）活性污泥脱氢酶活性的测定（略）
1活性污泥悬浮液的制备取50mL活性污泥液（约1.5〜3gL-1）放入三角瓶中，加入数粒玻璃珠剧烈摇动将污泥打碎。
40000r.min-1离心5min,弃去上清液，再用生理盐水补充水分，悬浮，洗涤，离心，反复三次。
最后用生理盐
水补至原体积。
2取4个40mL据塞离心管（1个对照，3个平行），分别加入Na2SO3溶液0.5ml,Tris-HCL缓冲液（PH值7.6）2.0ML，污泥悬浮液2mL,0.4%TTC液0.5mL（对照管不加TTC液，以0.5mL蒸馏水取代），使最终体积都为5mL,盖紧塞子。
3将离心管摇匀，立即放入37C水浴中培养10分钟（以显色为准）。
4各管分别加入0.5mL甲醛终止反应。
再向各管分别加入5mL丙酮振摇数十次，37C水浴保温10分钟。
54000r.Min-1离心5分钟，取上清液在485nm波长下测定A值并在标准曲线上查出相应得TTC浓度。
（3）土壤脱氢酶活性的测定
1取3个50mL具塞比色管，分别称取通过2mm筛的土样5g，加入比色管中，再加入5mL0.4％TTC液，另取一个50mL具塞比色管加入同种土样的灭菌土5g，也加入5mL0.4%TTC液，作为对照。
2将以上4个具塞比色管避光，37C水域锅中保温培养12〜24h。
3培养结束后，加入5mL甲醛终止反应，再分别加入5mL丙酮振荡并在37C保温10分钟，转入离心管。
44000r.min-1离心5分钟，取上清液在485nm波长下测定A值，在标准曲线上查出相应的TTC浓度。
3．3结果与讨论
（1）脱氢酶活性的计算
脱氢酶活性=ABC（6-5）
式中，A为由标准曲线上查出的TTC浓度，（血.mL-1）;B为培养时间校正值（h）;C为比色时稀释倍数，当A值大于0.8时，要适当稀释，使A值在0.8以下。
（2）影响脱氢酶活性的因素有哪些？
（3）已知乳酸脱氢酶（LDH）在DAD+的递氢作用下，是乳酸脱氢生成别丙酮酸。
丙酮酸在碱性溶液中与2,4-二硝基苯肼生成2,4-二硝基苯腙使溶液呈棕色。
颜色的深浅与丙酮酸浓度成正比。
请设计一个测定动物肝脏乳酸脱氢酶活性的实验。
要点丙酮酸标准溶液配制一一称取丙酮酸钠11mg，用0.05mol丄-1硫酸
溶解后，定容至100mL，置冰箱中保存。
《测量学》模拟试卷
得分
评卷人
复查人
一、单项选择题（每小题1分，共20分）
在下列每小题的四个备选答案中选出一个正确的答案，并将其字母标号填入题干的括号内。
1•经纬仪测量水平角时，正倒镜瞄准同一方向所读的水平方向值理论上应相差（
A180°B0°C90°D270°
2.1:
5000地形图的比例尺精度是（D）。
A5mB0.1mmC5cmD50cm
3.以下不属于基本测量工作范畴的一项是（C）。
A高差测量B距离测量C导线测量D角度测量
4.已知某直线的坐标方位角为
A220°B40°
220°,则其象限角为（D）。
C南西50°D南西40
5.由一条线段的边长、方位角和一点坐标计算另一点坐标的计算称为（A）。
A坐标正算B坐标反算C导线计算D水准计算
6.闭合导线在X轴上的坐标增量闭合差（A）o
A为一不等于0的常数B与导线形状有关
C总为0D由路线中两点确定
7.在地形图中，表示测量控制点的符号属于（D）。
A比例符号B半依比例符号C地貌符号D非比例符号
8.在未知点上设站对三个已知点进行测角交会的方法称为（A）o
A后方交会B前方交会C侧方交会D无法确定
9.两井定向中不需要进行的一项工作是（C）o
A投点B地面连接C测量井筒中钢丝长度D井下连接
10.绝对高程是地面点到（CA坐标原点B任意水准面
的铅垂距离。
C大地水准面
D赤道面
11.下列关于等咼线的叙述是错误的是：
（A）
A.高程相等的点在同一」等咼
B.等高线必定是闭合曲线，即使本幅图没闭合，则在相邻的图幅闭合
C.等高线不能分叉、相交或合并
D.等高线经过山脊与山脊线正交
12•下面关于非比例符号中定位点位置的叙述错误的是（B）
A•几何图形符号，定位点在符号图形中心
B•符号图形中有一个点，则该点即为定位点
C.宽底符号，符号定位点在符号底部中心
D•底部为直角形符号，其符号定位点位于最右边顶点处
13.下面关于控制网的叙述错误的是（D）
A.国家控制网从高级到低级布设
B.国家控制网按精度可分为A、B、C、D、E五等
C.国家控制网分为平面控制网和高程控制网
D.直接为测图目的建立的控制网，称为图根控制网
14.下图为某地形图的一部分，各等高线高程如图所视，A点位于线段MN上，点A到点
M和点N的图上水平距离为MA=3mm,NA=2mm，贝UA点高程为（A）
A.
36.4m
B.
36.6m
C.
37.4m
D.
37.6m
15•如图所示支导线,
B
的坐标方位角:
CD为（
A.7530'30''
B.1530'30''
C.4530'30''
D.252930''
16.三角高程测量要求对向观测垂直角，计算往返高差，主要目的是（A.有效地抵偿或消除球差和气差的影响
B.有效地抵偿或消除仪器高和觇标高测量误差的影响
C.有效地抵偿或消除垂直角读数误差的影响
D.有效地抵偿或消除读盘分划误差的影响
17.下面测量读数的做法正确的是（C）
A.用经纬仪测水平角，用横丝照准目标读数
测量学试卷第6页（共7页）
B•用水准仪测高差，用竖丝切准水准尺读数
C.水准测量时，每次读数前都要使水准管气泡居中D•经纬仪测竖直角时，尽量照准目标的底部
18
•水准测量时对一端水准尺进行测量的正确操作步骤是（D）。
19
21水准测量中，为了进行测站检核，在一个测站要测量两个高差值进行比较，通常采用的测量检核方法是双面尺法和。
22直线定向常用的标准方向有真子午线方向、磁北方向和坐标纵线方
向。
23地形图符号一般分为比例符号、_半依比例符号和不依比例符号。
24井下巷道掘进过程中，为了保证巷道的方向和坡度，通常要进行中线和
的标定工作。
25测量误差按其对测量结果的影响性质，可分为系统误差和_偶然误差。
26地物注记的形式有文字注记、__和符号注记三种。
27象限角的取值范围是：
。
28经纬仪安置通常包括整平和中。
29为了便于计算和分析，对大地水准面采用一个规则的数学曲面进行表示，这个数学曲面
称为参考托球面
差分
30光电测距仪按照测量时间的方式可以分为相位式测距仪和
得分
评卷人
复查人
31•竖盘指标差
竖盘分划误差
、名词解释（每小题5分，共20分）
32.水准测量
利用水准仪测定两点间的高差
33.系统误差
由客观原因造成的具有统计规律性的误差
34.视准轴
仪器望远镜物镜和目镜中心的连线
35.简述测回法测量水平角时一个测站上的工作步骤和角度计算方法。
对中，整平，定向，测角。
观测角度值减去定向角度值
36．什么叫比例尺精度？
它在实际测量工作中有何意义？
图上0.1毫米在实地的距离。
可以影响地物取舍
37．简述用极坐标法在实地测设图纸上某点平面位置的要素计算和测设过程。
38．高斯投影具有哪些基本规律。
测量学试卷第9页（共7页）
得分
评卷人
复查人
五、计算题（每小题10分，共20分）
39.在1:
2000图幅坐标方格网上，量测出ab=2.0cm,ac=1.6cm,ad=3.9cm,ae=5.2cm。
试计算AB长度Dab及其坐标方位角aab。
40.从图上量得点M的坐标XM=14.22m,YM=86.71m;点A的坐标为XA=42.34m,
YA=85.00m。
试计算M、A两点的水平距离和坐标方位角。
测量学标准答案与评分说明
一、一、单项选择题（每题1分）
1A；2D；3C；4D；5A；6C；7D；8A；9C；10C；
11A；12D；13B；14A；15B；16A；17C；18D；19A；20A
二、二、填空题（每空2分，共20分）
21变更仪器高法
22磁北方向
23半依比例符号（或线状符号）
24．腰线
25．偶然误差
26．数字注记
27大于等于0度且小于等于90度（或［0°,90°］）
28对中
29旋转椭球体面
30脉冲式测距仪
三、三、名词解释（每题5分，共20分）
31竖盘指标差：
在垂直角测量中，当竖盘指标水准管气泡居中时，指标并不恰好指向其正确位置90度或270度，而是与正确位置相差一个小角度x,x即为竖盘指标差。
32水准测量：
利用一条水平视线并借助于水准尺，测量地面两点间的高差，进而由已知点的高程推算出未知点的高程的测量工作。
33系统误差：
在相同的观测条件下，对某量进行了n次观测，如果误差出现的大小和符号均相同或按一定的规律变化，这种误差称为系统误差。
34视准轴：
望远镜物镜光心与十字丝中心（或交叉点）的连线。
四、四、简答题（每题5分，共20分）
35
（1）在测站点0上安置经纬仪，对中，整平（1分）
（2）盘左瞄准A点，读数La，顺时针旋转照准部到B点，读数Lb,计算上半测回
角度01=LB-LA；
（2分）
（3）旋转望远镜和照准部，变为盘右方向，瞄准B点读数Rb，逆时针旋转到A点,读数Ra，计算下半测回角度02=Rb-Ra；
（3分）
（4）比较01和02的差,若超过限差则不符合要求,需要重新测量,若小于限差,则
取平均值为最终测量结果0=（01+02）/2
（5分）
其作用主要在于：
一是根据地形图比例尺确定实地量测精度；二是根据地形图上需要
表示地物地貌的详细程度，确定所选用地形图的比例尺。
（5分）
37要素计算：
从图纸上量算待测设点的坐标，然后结合已有控制点计算该点与控制点连线之间的方位角，进而确定与已知方向之间所夹的水平角，计算待测设点到设站控制点之间的水平距离。
（3分）测设过程：
在设站控制点安置经纬仪，后视另一控制点，置度盘为0度，根据待定方向与该方向夹角确定方向线，根据距离确定点的位置。
（5分）
38
高斯投影的基本规律是：
（1）
（1）中央子午线的投影为一直线，且投影之后的长度无变形；其余子午线的投影均为凹向中央子午线的曲线，且以中央子午线为对称轴，离对称轴越远，其长度变形也就越大；
（2）
（2）赤道的投影为直线，其余纬线的投影为凸向赤道的曲线，并以赤道为对称轴；
（3）（3）经纬线投影后仍保持相互正交的关系，即投影后无角度变形；
（4）（4）中央子午线和赤道的投影相互垂直。
评分说明：
答对一条得2分，答对三条即可得满分。
五、五、计算题（每题10分，共20分）
39
bd=ad-ab=1.9cm,因此△X=-38m;
ce=ae-ac=3.6cm,因此△Y=-72m;（3分）
（或由图根据比例尺和距离计算A、B两点的坐标）
因此距离为：
81.413m（6分）
AB的方位角为：
242°10'33〃（10分）
（方位角计算应说明具体过程，过程对结果错扣2分）40
△X=XA-XM=28.12m,△Y=YA-YM=-1.71m（2分）
221/2
距离d=（△X2+△Y2）1/2=28.17m（5分）
方位角为：
356°31'12〃（应说明计算过程与主要公式）（10分）
可通过不同方法计算，如先计算象限角，再计算方位角。
说明：
在距离与方位角计算中，算法公式对但结果错各1分
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