脱氢酶活性测定.docx

1、脱氢酶活性测定实验(七)脱氢酶活性测定脱氢酶的正式命名应是 AH : B氧化还原酶，它能酶促自一定的基质中脱出 氢而进行氧化作用。脱氢酶广泛存在动植物组织和微生物细胞内。脱氢酶的种 类因电子供给体和接受体的特异性而有不同。单位时间内脱氢酶活化氢的能力 表现为它的酶活性。通过测定活性污泥或土壤中微生物的脱氢酶活性，可以了 解微生物对污泥或土壤中有机物氧化分解能力，即污泥酶或土壤酶的活性。利用已知受氢体能接受脱氢酶脱出的氢原子，如无色的氯化三苯基四氮唑(TTC, 2，3，5-triphenyl tetrazolium chloride)，俗称红四唑，接受氢后变成 红色的三苯基甲 臜(TF，trip

2、henyl formazan ),根据产生红色的色度进行比色定 量分析，以判断脱氢酶活性。TTC作为受氢体，其还原过程可用下式表示。HN-N-C6H5 C6H5-+N = N-C6H5 CI+2e-+2H +HC6H5N-N-C 6H5- +HCLN = N-C6H5（无色TTC）(红色TF)根据红色的深浅，测出相应的吸光值(A值)，求出脱氢酶的活性。通常A值越大(红色深)，脱氢酶活性越高。1.1 材料与方法(1)材料 活性污泥悬浮液或土壤悬浮液。(2)方法 分光度法。要点所有操作应当尽量在避光条件下进行。脱氢酶最适反应条件，温度30 37 C ,PH 值 7.4 8.5。2取用甲醛时要小心，

3、不要碰到皮肤上，如若沾到皮肤上要迅速用自来水 冲洗。2 . 2实验步骤（1） 绘制TTC标准曲线1配制系列浓度的TTC标准溶液。先取5支50mL带塞比色管，按顺序尽 快分别加入 0.36 % Na2S03溶液 2.5ml, Tris-HCl 缓冲液（pH 值 7.6） 7.5mL 在 分别吸取 0.4 % TTC 溶液 0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL,放入 5 支比 色管中，用蒸馏水定容至 50mL,使成8血mL-1、32mL-1、40mL-1系列浓 度。同时另取一支 50mL比色管，加入0.36 % Na2SO3溶液2.5mL,Tris-HCI缓 冲溶液（pH值7

4、.6） 7.5mL,加入蒸馏水至50mL,作为空白对照。2向每支比色管中各加入少许（十几粒）连二亚硫酸钠（ Na2SO4）混匀，使TTC全部还原成红色的TF（三苯基甲臜）。3向各管滴加5mL甲醛终止反应，摇匀后加入5mL丙酮振荡摇匀，37 C水 浴10分钟。4在485伽波长下测定吸光值 A。5以A值为纵坐标，TTC浓度为横坐标，绘制出TTC标准曲线。（2） 活性污泥脱氢酶活性的测定（略）1活性污泥悬浮液的制备 取50mL活性污泥液（约1.53g L-1）放入三 角瓶中，加入数粒玻璃珠剧烈摇动将污泥打碎。 40000r.min -1离心5min,弃去上 清液，再用生理盐水补充水分，悬浮，洗涤，离

5、心，反复三次。最后用生理盐水补至原体积。2取4个40mL据塞离心管（1个对照，3个平行），分别加入Na2SO3溶液 0.5ml, Tris-HCL 缓冲液（PH 值 7.6） 2.0ML，污泥悬浮液 2mL , 0.4 %TTC 液 0.5mL（对照管不加TTC液，以0.5mL蒸馏水取代），使最终体积都为5mL,盖紧 塞子。3将离心管摇匀，立即放入37 C水浴中培养10分钟（以显色为准）。4各管分别加入 0.5mL 甲醛终止反应。再向各管分别加入 5mL 丙酮振摇数 十次，37 C水浴保温10分钟。54000r.Min -1离心5分钟，取上清液在485nm波长下测定A值并在标准曲 线上查出相应

6、得 TTC 浓度。（ 3）土壤脱氢酶活性的测定1取 3 个 50mL 具塞比色管， 分别称取通过 2mm 筛的土样 5g ，加入比色管 中，再加入 5mL0.4 TTC 液，另取一个 50mL 具塞比色管加入同种土样的灭菌 土 5g，也加入5mL0.4 % TTC液，作为对照。2将以上4个具塞比色管避光，37 C水域锅中保温培养1224h。3培养结束后，加入5mL甲醛终止反应，再分别加入 5mL丙酮振荡并在 37C保温10分钟，转入离心管。44000r.min-1离心5分钟，取上清液在485nm波长下测定A值，在标准曲 线上查出相应的 TTC 浓度。33 结果与讨论（ 1 ）脱氢酶活性的计算脱

7、氢酶活性 =ABC （ 6-5）式中，A为由标准曲线上查出的TTC浓度，（血.mL-1）;B为培养时间校正值 （h） ;C 为比色时稀释倍数，当 A 值大于 0.8 时，要适当稀释，使 A 值在 0.8 以下。（ 2）影响脱氢酶活性的因素有哪些？（3）已知乳酸脱氢酶（LDH ）在DAD+的递氢作用下，是乳酸脱氢生成别 丙酮酸。丙酮酸在碱性溶液中与 2 , 4-二硝基苯肼生成2 , 4-二硝基苯腙使溶液 呈棕色。颜色的深浅与丙酮酸浓度成正比。请设计一个测定动物肝脏乳酸脱氢 酶活性的实验。要点 丙酮酸标准溶液配制一一称取丙酮酸钠 11mg，用0.05mol丄-1硫酸溶解后，定容至100mL，置冰箱

8、中保存。测量学模拟试卷得分评卷人复查人一、单项选择题（每小题 1分，共20分）在下列每小题的四个备选答案中选出一个正确的答 案，并将其字母标号填入题干的括号内。1 经纬仪测量水平角时，正倒镜瞄准同一方向所读的水平方向值理论上应相差（A 180 B 0 C 90 D 270 2. 1: 5000地形图的比例尺精度是（ D ）。A 5 m B 0.1 mm C 5 cm D 50 cm3.以下不属于基本测量工作范畴的一项是（ C）。A高差测量 B距离测量 C导线测量 D角度测量4.已知某直线的坐标方位角为A 220 B 40 220 ,则其象限角为（D ）。C南西50 D南西405.由一条线段的边

9、长、方位角和一点坐标计算另一点坐标的计算称为（ A ）。A坐标正算 B坐标反算 C导线计算 D水准计算6.闭合导线在X轴上的坐标增量闭合差（ A ）oA为一不等于0的常数 B与导线形状有关C总为0 D由路线中两点确定7.在地形图中，表示测量控制点的符号属于（ D ）。A比例符号 B半依比例符号 C地貌符号 D非比例符号8.在未知点上设站对三个已知点进行测角交会的方法称为（ A ）oA后方交会 B前方交会 C侧方交会 D无法确定9.两井定向中不需要进行的一项工作是（C ）oA投点 B地面连接 C测量井筒中钢丝长度 D井下连接10.绝对高程是地面点到（ C A坐标原点 B任意水准面的铅垂距离。C大

10、地水准面D赤道面11.下列关于等咼线的叙述是 错误的是：（A ）A .高程相等的点在同一 等咼B.等高线必定是闭合曲线，即使本幅图没闭合，则在相邻的图幅闭合C.等高线不能分叉、相交或合并D .等高线经过山脊与山脊线正交12 下面关于非比例符号中定位点位置的叙述 错误的是（B ）A 几何图形符号，定位点在符号图形中心B 符号图形中有一个点，则该点即为定位点C.宽底符号，符号定位点在符号底部中心D 底部为直角形符号，其符号定位点位于最右边顶点处13 .下面关于控制网的叙述 错误的是（D ）A .国家控制网从高级到低级布设B. 国家控制网按精度可分为 A、B、C、D、E五等C.国家控制网分为平面控制

11、网和高程控制网D .直接为测图目的建立的控制网，称为图根控制网14.下图为某地形图的一部分，各等高线高程如图所视， A点位于线段MN上，点A到点M和点N的图上水平距离为 MA=3mm , NA=2mm，贝U A点高程为（A ）A .36.4mB .36.6mC .37.4mD .37.6m15如图所示支导线,B的坐标方位角:CD为（A.75 3030B.15 3030C.45 3030D . 25 293016.三角高程测量要求对向观测垂直角，计算往返高差，主要目的是（ A .有效地抵偿或消除球差和气差的影响B.有效地抵偿或消除仪器高和觇标高测量误差的影响C.有效地抵偿或消除垂直角读数误差的影

12、响D .有效地抵偿或消除读盘分划误差的影响17.下面测量读数的做法正确的是（ C ）A .用经纬仪测水平角，用横丝照准目标读数测量学试卷 第6页（共7页）B 用水准仪测高差，用竖丝切准水准尺读数C.水准测量时，每次读数前都要使水准管气泡居中 D 经纬仪测竖直角时，尽量照准目标的底部18水准测量时对一端水准尺进行测量的正确操作步骤是（ D ）。1921水准测量中，为了进行测站检核，在一个测站要测量两个高差值进行比较，通常采用的 测量检核方法是双面尺法和 。22直线定向常用的标准方向有真子午线方向、 磁北方向 和坐标纵线方向。23地形图符号一般分为比例符号、 _半依比例符号 和不依比例符号。24井

13、下巷道掘进过程中，为了保证巷道的方向和坡度，通常要进行中线和 的标定工作。25测量误差按其对测量结果的影响性质，可分为系统误差和 _偶然误差 。26地物注记的形式有文字注记、 _ _ 和符号注记三种。27象限角的取值范围是： 。28经纬仪安置通常包括整平和 中 。29为了便于计算和分析， 对大地水准面采用一个规则的数学曲面进行表示， 这个数学曲面称为 参考托球面差分30光电测距仪按照测量时间的方式可以分为相位式测距仪和得分评卷人复查人31 竖盘指标差竖盘分划误差、名词解释（每小题 5分，共20 分）32.水准测量利用水准仪测定两点间的高差33.系统误差由客观原因造成的具有统计规律性的误差34.

14、视准轴仪器望远镜物镜和目镜中心的连线35.简述测回法测量水平角时一个测站上的工作步骤和角度计算方法。 对中，整平，定向，测角。观测角度值减去定向角度值36什么叫比例尺精度？它在实际测量工作中有何意义？图上 0.1 毫米在实地的距离。可以影响地物取舍37简述用极坐标法在实地测设图纸上某点平面位置的要素计算和测设过程。38高斯投影具有哪些基本规律。测量学试卷 第 9 页（共 7 页）得分评卷人复查人五、计算题（每小题 10分，共20分）39.在 1: 2000 图幅坐标方格网上，量测出 ab = 2.0cm, ac = 1.6cm, ad = 3.9cm, ae = 5.2cm。试计算AB长度Da

15、b及其坐标方位角 a ab。40.从图上量得点 M 的坐标 XM=14.22m, YM=86.71m ;点 A的坐标为 XA=42.34m,YA=85.00m。试计算M、A两点的水平距离和坐标方位角。测量学 标准答案与评分说明一、 一、 单项选择题（每题 1 分）1 A； 2 D； 3 C； 4 D； 5 A； 6 C； 7 D； 8 A； 9 C； 10 C；11 A；12 D；13 B；14 A； 15 B；16 A；17 C；18 D； 19 A；20 A二、 二、 填空题 （每空 2 分，共 20 分）21变更仪器高法22磁北方向23半依比例符号（或线状符号）24腰线25偶然误差26数

16、字注记27大于等于 0度且小于等于 90度（或0 , 90 ）28对中29旋转椭球体面30脉冲式测距仪三、 三、 名词解释（每题 5 分，共 20 分）31竖盘指标差：在垂直角测量中，当竖盘指标水准管气泡居中时，指标并不恰好指向其正 确位置 90 度或 270 度，而是与正确位置相差一个小角度 x, x 即为竖盘指标差。32水准测量： 利用一条水平视线并借助于水准尺， 测量地面两点间的高差， 进而由已知点 的高程推算出未知点的高程的测量工作。33系统误差： 在相同的观测条件下， 对某量进行了 n 次观测， 如果误差出现的大小和符号 均相同或按一定的规律变化，这种误差称为系统误差。34视准轴：望

17、远镜物镜光心与十字丝中心（或交叉点）的连线。四、 四、 简答题（每题 5 分，共 20分）35（1 ）在测站点0上安置经纬仪，对中，整平 （1分）（2）盘左瞄准 A点，读数La，顺时针旋转照准部到 B点，读数Lb,计算上半测回角度 01=L B-LA；（ 2 分）（3） 旋转望远镜和照准部，变为盘右方向，瞄准 B点读数Rb，逆时针旋转到 A点, 读数Ra，计算下半测回角度 02=Rb-Ra ；（ 3 分）（4） 比较 01和 0 2的差,若超过限差则不符合要求,需要重新测量,若小于限差,则取平均值为最终测量结果 0 = （ 01+02） /2（ 5 分）其作用主要在于：一是根据地形图比例尺确定

18、实地量测精度；二是根据地形图上需要表示地物地貌的详细程度，确定所选用地形图的比例尺。 （ 5 分）37 要素计算：从图纸上量算待测设点的坐标，然后结合已有控制点计算该点与控制点连 线之间的方位角，进而确定与已知方向之间所夹的水平角，计算待测设点到设站控制点之 间的水平距离。（3 分） 测设过程：在设站控制点安置经纬仪，后视另一控制点，置度盘为 0 度，根据待定方 向与该方向夹角确定方向线，根据距离确定点的位置。（ 5 分）38高斯投影的基本规律是：（1）（1） 中央子午线的投影为一直线，且投影之后的长度无变形；其余子午线的投 影均为凹向中央子午线的曲线，且以中央子午线为对称轴，离对称轴越远，其

19、长度变形也 就越大；（2） （2） 赤道的投影为直线，其余纬线的投影为凸向赤道的曲线，并以赤道为对称 轴；（3） （3） 经纬线投影后仍保持相互正交的关系，即投影后无角度变形；（4） （4） 中央子午线和赤道的投影相互垂直。 评分说明：答对一条得 2 分，答对三条即可得满分。五、 五、 计算题（每题 10 分，共 20 分）39bd = ad -ab = 1.9cm, 因此 X = -38m ;ce = ae -ac = 3.6cm,因此 Y = -72m; （3 分）（或由图根据比例尺和距离计算 A、B 两点的坐标 ）因此距离为： 81.413m （6分）AB的方位角为：242 10 33 （10分）（方位角计算应说明具体过程，过程对结果错扣 2分） 40X = XA-XM = 28.12m, Y = YA-YM = -1.71m （2分）2 2 1/2距离 d = （X2 + Y2）1/2 = 28.17m （5分）方位角为： 356 31 12 （应说明计算过程与主要公式） （10分）可通过不同方法计算，如先计算象限角，再计算方位角。说明：在距离与方位角计算中，算法公式对但结果错各 1 分