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无水氯化钙0.2g,K2HPO41.0g,KH2PO41.0g,MgSO4。

7H2O0.48g,NaCO310g,NaCL2g,蒸馏水1000mL,溶解后备用。

7.豆芽汁液体培养基

豆芽汁10mL,磷酸氢二铵1g,KCL0.2g,MgSO4.7H2O0.2g,琼脂20g。

将以上成分加入到蒸馏水中,加热使完全溶解,调pH至6.2~6.4,分装于三角瓶中,0.04%的溴甲酚紫酒精溶液(黄色5.2~6.8紫色)作为指示剂,115℃灭菌20min。

豆芽汁制备:

将黄豆芽或绿豆芽200g洗净,在1000mL中煮沸30min,纱布过滤得豆芽汁、补足水分至1000mL。

8.麦芽汁琼脂培养基

优质大麦或小麦,蒸馏水,碘液。

取优质大麦或小麦若干,浸泡6~12h,置于深约2cm的木盘上摊平,上盖纱布,每日早、中、晚各淋水一次,麦根伸长至麦粒两倍时,停止发芽晾干或烘干。

称取300g麦芽磨碎,加1000mL水,38℃保温2h,再升温至45℃,30min,再提高到50℃,30min,再升至60℃,糖化1~1.5h。

取糖化液少许,加碘液1~2滴,如不为蓝色,说明糖化完毕,用文火煮半小时,四层纱布过滤。

如滤液不清,可用一个鸡蛋清加水约20mL调匀,打至起沫,倒入糖化液中搅拌煮沸再过滤,即可得澄清麦芽汁。

用波美计检测糖化液浓度,加水稀释至10倍,调pH5~6,用于酵母菌培养;

稀释至5~6倍,调pH7.2,可用于培养细菌,121℃灭菌20min。

9.查(察)氏培养基

NaNO32g,K2HPO41g,MgSO4.7H2O0.5g,KCL0.5g,FeSO4.7H2O0.01g,蔗糖30g,琼脂15~20g,蒸馏水1000mL,pH值自然。

加热溶解,分装后121℃灭菌20min。

10.马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)

马铃薯(去皮)200g,葡萄糖(或蔗糖)20g,琼脂20g,水1000mL。

pH值自然。

将马铃薯去皮、洗净、切成小块,称取200g加入1000mL蒸馏水,煮沸20min,用纱布过滤,滤液补足水至1000mL,再加入糖和琼脂,溶化后分装,121℃灭菌20min。

另外,用少量乙醇溶解0.1g氯霉素,加入1000mL培养基中,分装灭菌后可用于食品中霉菌和酵母菌计数、分离。

11.PY基础培养基

蛋白胨0.5g,酵母提取物1.0g,胰酶解酪胨(Trypticase)0.5g,盐溶液Ⅱ4.0mL,蒸馏水1000mL。

盐溶液Ⅱ成分:

CaCL20.2g,MgSO4.7H2O0.48g,K2HPO41.0g,KH2PO41.0g,NaHCO310.0g,NaCL2.0g,蒸馏水1000mL。

12.甘露醇琼脂培养基(MSA)

牛肉浸膏1g,月示胨NO.3(Difco)10g,D-甘露醇10g,NaCL75g,琼脂约13g,酚红0.025g,水1000mL,pH7.2~7.6

按量将各成分(酚红除外)混合,加热使完全溶解,调pH至7.4±

0.2。

加1%的酚红溶液2.5mL,混匀。

121℃高压灭菌15min

13.高氏一号(淀粉琼脂)培养基(主用于放线菌、霉菌培养)

可溶性淀粉20g,KNO31g,NaCL0.5g,K2HPO40.5g,MgSO4.7H2O0.5g,FeSO4.7H2O0.01g,琼脂20g,蒸馏水1000mL,pH7.2~7.4,121℃灭菌20min。

14.淀粉铵盐培养基(主要用于霉菌、放线菌培养)

可溶性淀粉10g,(NH4)2SO42g,K2HPO4lg,MgSO4.H2Olg,NaCL1g,CaCO33g,蒸馏水1000mL,pH7.2~7.4,121℃灭菌20min。

若加入15~20g琼脂即成固体培养基。

15.麦氏培养基(醋酸钠琼脂培养基)

葡萄糖1.0g,KCL1.8g,酵母汁2.5g,醋酸钠8.2g,琼脂15g,蒸馏水1000mL,pH自然,0.7kg/cm2灭菌30min。

16.高盐察氏培养基(用于霉菌和酵母菌计数、分离用)

硝酸钠2g,磷酸二氢钾1g,硫酸镁(MgSO47H2O)0.5g,氯化钾0.5g,硫酸亚铁0.01g,氯化钠60g,蔗糖30g,琼脂20g,蒸馏水1000mL,115℃灭菌30min。

注:

①分离食品和饮料中的霉菌和酵母可选用马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基和/或孟加拉红培养基。

②分离粮食中的霉菌可用高盐察氏培养基。

17.糖、醇类发酵基础培养基

(1)一般细菌常以休和利夫森二氏培养基

蛋白胨5g,NaCL5g,K2HPO40.2g,糖醇(葡萄糖或其它糖、醇)10g,琼脂5~6g,1%溴甲酚紫(溴百里香草酚蓝)3mL,蒸馏水1000mL,pH7.0~7.2,分装试管,培养基高度约4.5cm,115℃灭菌20min。

(2)芽孢菌培养基

(NH4)2HPO41.0g,KCL0.2g,MgSO4.7H2O0.2g,酵母膏0.2g,琼脂5~6g,糖或醇类10.0g,蒸馏水1000mL,溴甲酚紫(0.04%)15mL,pH7.0~7.2,分装试管,培养基高度约4~5cm,112℃灭菌30min。

(3)乳酸菌培养基

蛋白胨5g,牛肉膏5g,酵母膏5g,吐温80(Tween80)0.5mL,糖或醇10g,琼脂5~6g,蒸馏水(自来水)1000mL,加入1.6%溴甲酚紫溶液约1.4mL。

以上调pH6.8~7.0,分装试管,112℃灭菌30min。

18.硝酸盐培养基(硝酸盐还原试验用)

蛋白胨5.0g,KNO30.2g,蒸馏水1000mL,pH7.4,每管分装4~5mL,121℃灭菌15~20min。

吲哚实验培养基:

1%胰蛋白胨,调pH7.2~7.6,分装1/3~1/4试管,115℃灭菌30min。

19.硫化氢试验(纸条法)培养基

蛋白胨10g,NaCL5g,牛肉膏10g,半胱氨酸0.5g,蒸馏水1000mL,pH7.0~7.4,分装试管,每管液层高度4~5cm,112℃灭菌20~30min。

另外将普通滤纸剪成0.5~1cm宽的纸条,长度根据试管与培养基高度而定。

用5%~10%的醋酸铅将纸条浸透,然后用烘箱烘干,放于培养皿中灭菌备用。

20.尿素培养基(尿酶试验)

蛋白胨1.0g,葡萄糖1.0g,NaCL5.0g,KH2PO42.0g,0.4%酚红3.0mL,琼脂20.0g,20%尿素100.0mL,pH7.1~7.4。

将除尿素和琼脂以外的成分配好,并校正pH值,加入琼脂,加热熔化并分装于三角瓶,121℃灭菌15min,冷却至50~55℃,加入过滤除菌的尿素溶液,分装于灭菌试管内,摆成琼脂斜面备用。

21.氮源利用基础培养基

KH2PO41.36g,NaH2PO42.13g,MgSO47H2O0.2g,FeSO4.7H2O0.2g,CaCL20.5g,葡萄糖10.0g,蒸馏水1000mL。

将需要测定的氨基酸、氨态氮(如磷酸氢二氨)、硝态氮(如硝酸钾)加入到上述基础培养基中,使其终浓度为0.05~0.1%,如测定菌不能利用葡萄糖为碳源,可用其它碳源代替(终浓度为0.2~0.5%),另做一份不加氮源的空白对照,调pH7.0~7.2,分装于试管,每管4~5mL,112℃灭菌20~30min,制备出的培养基要求无沉淀。

22.甲基红培养基(M.R及V-P试验用)

蛋白胨7.0g,葡萄糖5.0g,K2HPO4(或NaCL)5g,水1000mL,pH7.0~7.2,每管分装4~5mL,115℃灭菌30min。

23.动力、靛基质、尿素(MIU)综合培养基(用于检验细菌运动性、吲哚、尿素酶用)

蛋白胨(含色氨酸)30g,KH2PO42g、NaCL5g、琼脂3g、0.2%酚红酒精溶液2mL、尿素20g、蒸馏水1000mL。

分装于小试管,112℃灭菌15min,灭菌后液体应呈淡黄色。

24.半固体培养基(用于细菌的动力试验)

牛肉膏5.0g,蛋白胨10.0g,琼脂3~5g,蒸馏水1000mL,pH7.2~7.4,熔化后分装试管(8mL)121℃灭菌15min,取出直立试管待凝固。

25.M17琼脂培养基(分离、培养乳球菌等的选择培养基)

植物蛋白胨5g,酵母粉5g,聚蛋白胨5g,抗坏血酸0.5g,牛肉膏2.5g,MgSO47H2O0.01g,&

szlig;

-甘油磷酸二钠19g,蒸馏水1000mL,121℃灭菌15min。

26.蛋白胨水溶液(靛基质试验用)

蛋白胨20.0g,NaCL5.0g,蒸馏水1000mL,pH7.4,121℃灭菌15min。

27.精氨酸双水解酶实验培养基

蛋白胨1g,氯化钠5g,K2HPO40.3g,L-精氨酸10g,琼脂10g,酚红0.01g,蒸馏水1000mL。

除酚红外,将以上各成分溶解,调节pH7.0~7.2,加入指示剂,分装试管,培养基高约4~5cm,121℃灭菌20min备用。

28.葡萄糖氧化发酵培养基

蛋白胨2g,氯化钠5g,1%溴百里酚蓝水溶液3mL,琼脂5~6g,K2HPO40.2g,葡萄糖1%,蒸馏水1000mL。

除溴百里酚蓝外,溶解以上各成分,调节pH值为6.8~7.0,分装试管,用115℃灭菌20min备用。

29.假单胞菌选择培养基(PSA)

基础成分:

多价胨16g,水解酪蛋白10g,硫酸钾10g,氯化镁1.4g,琼脂11g,甘油10mL,蒸馏水1000mL,pH7.1±

CFC选择添加物:

溴化十六烷基三甲胺10mg/L,梭链孢酸钠10mg/L,头孢菌素50mg/L。

先将基础成分加热煮沸使之完全溶解,121℃,15min条件下灭菌。

冷却到50℃备用。

当基础培养基冷却到50℃后加入溶解后过滤除菌的CFC补充物,完全混合后倒平板备用。

30.乳糖胆盐发酵培养基

蛋白胨20g,猪胆盐(或牛、羊胆盐)5g,乳糖10g,0.04%溴甲酚紫水溶液25mL,蒸馏水1000mL,pH7.4。

将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,分装每管10mL,并放入一个小倒管,115℃,15min高压灭菌.

双料乳糖胆盐培养基除蒸馏水外,其他成分加倍。

31.伊红美兰琼脂培养基

蛋白胨20g,乳糖10g,磷酸氢二钾2g,琼脂17g,2%伊红Y溶液20mL,0.65%美兰溶液10mL,蒸馏水1000mL,pH7.1。

将蛋白胨、磷酸氢二钾和琼脂溶解于蒸馏水中,校正pH,分装于烧瓶内,高压灭菌121℃,15min备用。

临用时,加入乳糖,并加热溶化琼脂,冷至50~55℃,加入伊红和美兰溶液,摇匀,倾注平板。

32.乳糖发酵培养基

蛋白胨20g,乳糖10g,0.04%溴甲酚紫水溶液25mL,蒸馏水1000mL,pH7.4。

将蛋白胨、乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,按检验要求分装30mL、10mL或3mL,并放入一个小倒管,115℃,15min高压灭菌。

33.胰酪胨大豆肉汤

胰酪胨(或胰蛋白胨)17g,植物蛋白胨(或大豆蛋白胨)3g,氯化钠100g,磷酸氢二钾2.5g,葡萄糖2.5g,蒸馏水1000mL。

将上述成分混合,加热并轻轻搅拌溶液,分装后121℃15min高压灭菌。

最终pH7.3±

34.7.5%氯化钠肉汤

蛋白胨10g,牛肉膏3g,氯化钠75g,蒸馏水1000mL,pH7.4。

将上述成分加热溶解,校正pH,分装试管,121℃15min高压灭菌。

35.豆粉琼脂

牛心消化汤1000mL,琼脂20g,黄豆粉浸液50mL,pH7.4~7.6。

将琼脂加在牛心消化汤中,加热溶解,过滤。

加入黄豆粉浸液,分装每瓶100mL,121℃15min高压灭菌。

36.血琼脂平板

豆粉琼脂100mL,脱纤维羊血(或兔血)5~10mL。

加热融化琼脂,冷至50℃,以无菌操作加入脱纤维羊血或兔血,摇匀,倾注平板。

或分装灭菌试管,摆成斜面。

37.aird-Parker氏琼脂平板

胰蛋白胨10g,牛肉膏5g,酵母膏1g,丙酮酸钠10g,甘氨酸12g,氯化锂(LiCL·

6H2O)5g,琼脂20g,蒸馏水950mL,pH7.5。

增菌剂的配法:

30~50%卵黄盐水50mL与除菌过滤的1%亚碲酸钾溶液10mL混合,保存在冰箱内。

将各成分加到蒸馏水中,加热煮沸至完全溶解。

冷至25℃,矫正pH。

分装每瓶95mL,121℃高压灭菌15min。

临用时,加热融化琼脂,冷至50℃,每95mL加入预热至50℃的卵黄-亚碲酸钾增菌剂5mL,摇匀后倾注平板。

培养基应是致密不透明的。

使用前在冰箱储存不得超过48h。

38.肉浸液

绞碎牛肉500g,氯化钠5g,蛋白胨10g,磷酸氢二钾2g,蒸馏水1000mL,pH7.4~7.6。

将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g,混合后放冰箱24h,除去液面之浮油,隔水煮沸半小时,使肉渣完全凝结成块,用绒布过滤,并挤压收集全部滤液,加水补足原量。

加入蛋白胨、氯化钠和磷酸盐,溶解后矫正pH7.4~7.6煮沸并过滤,分装烧瓶,121℃,30min高压灭菌。

39.兔血浆

柠檬酸钠0.106mol/L(31.3gNa3C6H5O7·

2H2O溶于1L蒸馏水中)

一份加兔血9份混合后离心2000rpm,10min吸取上清液即为兔血浆。

40.肠毒素产毒培养基

蛋白胨20g,胰消化酪蛋白200mg,氯化钠5g,磷酸二氢钾1g,氯化钙0.1g,硫酸镁0.2g,菸酸0.01g,蒸馏水1000mL,琼脂10~12g(固体透析培养用),pH7.2~7.4。

41.葡萄糖肉浸液肉汤

绞碎牛肉500g,氯化钠5g,蛋白胨10g,磷酸氢二钾2g,葡萄糖10g,蒸馏水1000mL,pH7.4~7.6。

加入蛋白胨、葡萄,氯化钠和磷酸盐,溶解后校正pH,煮沸并过滤、分装,121℃30min高压灭菌。

42.牛心浸液

绞碎牛心500g,氯化钠5g,蛋白胨10g,磷酸氢二钾2g,蒸馏水1000mL,pH7.4~7.6。

将绞碎牛心500g,混合后放冰箱24h,除去液面之浮油,隔水煮沸半小时,使肉渣完全凝结成块,用绒布过滤,并挤压收集全部滤液,加水补足原量。

加入蛋白胨、氯化钠和磷酸盐,溶解后校正pH,煮沸并过滤、分装,121℃,30min高压灭菌。

43.匹克氏肉汤

含1%胰蛋白胨的牛心浸液200mL,1:

25000结晶紫盐水溶液10mL,1:

800三氮化钠溶液10mL,脱纤维兔血(羊血)10mL。

将上述已灭菌的各种成分,无菌依次混合,分装于无菌试管内,每管2mL,保存冰箱内备用。

44.胰蛋白胨大豆胨琼脂(TSA)

胰蛋白胨15g,大豆胨5g,氯化钠5g,琼脂约13g,蒸馏水1000mL,pH7.1~7.5。

按量将各成分溶解,加热使完全溶解,调pH值,121℃,15min灭菌。

45.缓冲蛋白胨水(BP)培养基

蛋白胨l0g,NaCL5g,Na2HPO4.12H209g,H2PO41.5g,蒸馏水1000mL,pH7.2。

121℃灭菌15min,沙门氏菌前增菌使用。

46.氯化镁孔雀绿(MM)增菌液

甲液:

胰蛋白胨5g,NaCL8g,KH2P041.6g,蒸馏水1000m1

乙液:

MgCL240g,蒸馏水100mL

丙液:

0.4%孔雀绿水溶液

分别按上述成分配好后,121℃灭菌15min备用。

临用时取甲液90mL、乙液9mL、丙液0.9mL以无菌操作混合即成。

47.四硫磺酸钠煌绿(TTB)增菌液

多胨或胨1g,CaCO310g,Na2S20330g,蒸馏水1000m1。

将各成分加入蒸馏水中,加热溶解,分装每瓶100m1。

分装时应随时振荡,使其中的CaCO3混匀。

121℃灭菌15min备用。

临用时每100m1培养基中加入碘溶液2m1、0.1%煌绿1m1。

48.亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液

蛋白胨5g,乳糖4g,亚硒酸氢钠4g,Na2HPO45.5g,KH2PO44.5g,L—胱氨酸0.01g,蒸馏水1000m1,pH7.0。

将除亚硒酸氢钠和胱氨酸以外的各种成分溶解于900mL蒸馏水中,加热煮沸,冷却备用。

另将亚硒酸氢钠溶解于100mL蒸馏水中,加热煮沸,冷却,以无菌操作与上液混合。

再加入1%L-胱氨酸—氢氧化钠溶液1m1。

分装于灭菌瓶中,每瓶l00mL。

49.亚硫酸铋琼脂(BS)培养基

蛋白胨10g,牛肉膏5g,葡萄糖5g,FeSO40.3g,Na2HPO44g,煌绿0.025g,柠檬酸铋铵2g,Na2SO46g,琼脂20g,蒸馏水1000mL,pH7.5。

将前5种成分溶解于300mL蒸馏水中,再将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠另用50m1蒸馏水溶解。

将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解,冷至80℃左右。

将以上三液合并,补充蒸馏水至1000m1,校正pH,加0.5%煌绿水溶液5mL;

摇匀。

冷却至50~55℃,倾注平板。

此培养基不需高压灭菌。

制备过程中不宜过分加热,以免降低其选择性。

应在临用前一天制备,贮存于室温暗处。

超过48h不宜使用。

50.DHL琼脂培养基

成份:

蛋白胨20g,牛肉膏3g,乳糖10g,蔗糖10g,去氧胆酸钠1g,Na2S2032.3g,柠檬酸钠1g,柠檬酸铁铵1g,中性红0.03g,琼脂20g,蒸馏水1000mL,pH7.3。

除中性红和琼脂外,将其他成分溶解于400m1蒸馏水中,校正pH值。

再将琼脂溶于600mL蒸馏水中,两液合并,加0.5%中性红水溶液6mL,待冷至50~55℃,倾注平板。

51.HE琼脂培养基

月示胨12g,牛肉膏3g,乳糖12g,蔗糖2g,水杨素2g,胆盐20g,NaCL5g,琼脂20g,蒸馏水1000m1,0.4%溴麝香草酚蓝溶液16mL,Andrade指示剂20mL,甲液20mL,乙液20m1。

将前七种成分溶解于400mL蒸馏水中。

作为基础液,加入甲液和乙液,校正pH值为7.5,再加入指示剂;

将琼脂溶于600m1蒸馏水中。

二者合并,待冷至50~55℃,倾注平板。

①此培养基不可高压灭菌;

②Andrade指示剂:

酸性复红0.5g,1MNaOH溶液16m1,蒸馏水100mL。

制法为:

将复红溶解于蒸馏水中,加入氢氧化钠溶液。

数小时后如果复红退色不全,再加氢氧化钠溶液1~2mL。

③甲液:

Na2S20334g,柠檬酸铁铵4g,蒸馏水100m1。

④乙液:

去氧胆酸钠10g,蒸馏水100mL。

52.S.S.琼脂

(1)基础培养基

牛肉膏5g,月示胨5g,三号胆盐3.5g,琼脂17g,蒸馏水1000mL。

将牛肉膏、月示胨和胆盐溶解于400mL蒸馏水中,将琼脂溶于500m1蒸馏水中,二液混合,121℃灭菌15min备用。

(2)完全培养

基础培养基1000mL,乳糖10g,柠檬酸钠8.5g,Na2S2038.5g,10%柠檬酸铁溶液10m1,1%中性红溶液2.5m1,0.1%煌绿溶液0.33m1。

加热熔化基础培养基,按比例加入上述染料以外的各成分,充分混合均匀,校正pH值为7.0,加入中性红和煌绿溶液,倾注平板。

制好的培养基宜当日使用,或保存于冰箱内于48h内使用;

煌绿溶液配好后应在10d以内使用。

53.靛基质试验培养基

蛋白胨10g,氯化钠5g,水1000mL,pH7.3~7.5。

称取各成分,加入水中加热溶化。

用1mol/LNaOH调至pH7.4~7.5。

分装小试管,每管约3mL,116℃,15min高压灭菌后4~10℃保存备用。

54.三糖铁琼脂(TSI)

蛋白胨20g,硫代硫酸钠0.2g,乳糖10g,蒸馏水1000mL,硫酸亚铁铵0.2g,蔗糖10g,酚红0.025g,氯化钠5g,牛肉膏5g,琼脂12g,葡萄糖1g,pH7.4。

将除琼脂和酚红以外的各种成分溶解于蒸馏水中,校正pH。

加入琼脂,加热煮沸以溶化琼脂。

加入0.2%酚红水溶液12.5mL,摇匀。

分装试管,装量宜多些,以便得到较高的底层。

121℃高压灭菌15min后放置高层斜面备用。

55.尿素琼脂

蛋白胨1g,葡萄糖1g,0.4%酚红溶液3mL,蒸馏水1000mL,氯化钠5g,磷酸氢二钾2g,琼脂20g,20%尿素溶液100mL,pH7.2±

0.1

将除尿素和琼脂以外的成分配好,并校正pH,加入琼脂,加热溶化并分装烧

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