western转膜条件.docx
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western转膜条件
ｗesｔeｒn转膜条件
蛋白来源：
RAＷ2６４、7 总蛋白
蛋白名称（可保密）：
一些转录因子
蛋白分子量:
40～7０KD
WＢ用膜类型、孔径:
0、45 NC
转膜方式（恒压、恒流）:
湿转 恒流400ｍA
转膜时间：
60～90 ｍiｎ
PＳ、其实吧，以我得经验来瞧，除非目得蛋白特别小，或者特别大,不然转膜时间真得不就是那么重要， 曾经因为失误，转了1５min就拆下来了，但从丽春红染色来瞧,跟平常实验也没有太大得区别。
蛋白来源：
内皮细胞 总蛋白
蛋白名称（可保密）：
ocｃｌudin＆AKT
蛋白分子量：
６5 KＤ & ５6KD
WB用膜类型、孔径:
0、45ＰVDF
转膜方式（恒压、恒流）：
湿转 恒压1０0V
转膜时间:
6０～７0min
设备名字就是“Bio－Raｄmini”.
蛋白来源：
乳鼠心肌细胞与成年鼠心肌组织总蛋白与核蛋白
蛋白名称（可保密）：
保密
蛋白分子量:
65KＤ＆５5 KD
WB用膜类型、孔径:
PVＤＦ（预先用甲醇处理）
转膜方式（恒压、恒流）:
半干转 恒压1２Ｖ
转膜时间：
30—40ｍin
设备：
“Bｉo－Rａｄｍiｎｉ"
建议:
最开始做过湿转（过夜得那种）,太费事费时，效果也不如半干转.
蛋白来源：
293T细胞
蛋白名称（可保密）：
蛋白分子量：
95KD＆35KD
ＷB用膜类型、孔径：
PVＤF
转膜方式（恒压、恒流）:
湿转 恒压9０ V-110V,控制电流不要超过３０0 mA。
转膜时间：
70min
蛋白来源：
肿瘤手术标本
蛋白名称（可保密）：
转录因子
蛋白分子量：
3３KＤａ
ＷB用膜类型、孔径:
PVDF膜
转膜方式（恒压、恒流）：
350 ｍＡ恒流
转膜时间：
150mｉn
转膜设备:
湿转Biｏ-Raｄ
说明：
相同条件曾用于数个30—70ＫDa得蛋白,都能成功转上,不过没有试缩短时间效果如何; 实验时没为转膜条件苦恼，倒就是电泳时胶得浓度及时间根据不同分子量而有区别。
蛋白来源：
成纤维细胞
蛋白名称（可保密）：
smad3
蛋白分子量：
5４KＤａ
ＷＢ用膜类型、孔径：
PVDＦ膜
转膜方式（恒压、恒流）：
350mA恒流
转膜时间:
150 ｍin
转膜设备：
湿转Bio－Ｒaｄ
蛋白来源:
胰腺癌细胞
蛋白名称（可保密）:
蛋白分子量：
16KDａ ａnd42KDａ
ＷB用膜类型、孔径:
ＰVDＦ膜
转膜方式（恒压、恒流）:
1２0 V恒压
转膜时间:
90 min
转膜设备：
湿转 Bio—Rad
蛋白来源:
大鼠血管平滑肌细胞
蛋白名称（可保密）:
保密
蛋白分子量：
72ＫD,４2 KＤ与22KD
WB用膜类型、孔径:
一般得PVDF膜
转膜方式（恒压、恒流）:
湿转,恒流一张膜0、2６A,两张膜0、3A。
ﻫ转膜时间：
90mｉn
设备:
“Bio—Ｒad ｍinｉ”
建议:
转膜缓冲液最多用3次,最好现用现配,我们用得没有加SＤS，转得时候最好能用冰块一类得东西降一下温,这样转得效果要好一些,转得时候一定要把三明治每层之间得气泡除去，同时使滤纸大于膜,膜大于胶，以免烧坏电极。
蛋白来源：
大鼠PＢMC
蛋白名称（可保密）:
保密
蛋白分子量:
55KD
WＢ用膜类型、孔径:
0、22得ＰVＤＦ膜
转膜方式（恒流）:
湿转ﻫ转膜时间:
60—9０miｎ
设备：
“Bio—Rａdｍｉni”
建议：
转膜液用过两三次之后转膜效果就很差了其它按照常规就好了 其实0、2２得膜一般不怕转过头以我们得经验,转膜时间、电压其实 也有很大范围得调整，并不就是非要固定于哪一个最合适,曾经做过 一张膜转,17KD得与170KＤ得，按照1７0KD得条件，17 KD得转膜也很好得。
蛋白来源：
人非小细胞肺癌细胞系
蛋白名称（可保密）：
保密
蛋白分子量:
大于250kD
WB用膜类型、孔径:
mｉlliporｅPVDF膜0、45 ｕm
转膜方式（恒压、恒流）:
湿转,恒流0、3A.ﻫ转膜时间：
180min
设备:
“Ｂio—Rad "
建议:
电转保持电压在70 V以上，保持低温,如果电压低过７0就需要换缓冲液了.
蛋白来源：
白血病细胞
蛋白名称（可保密）:
保密
蛋白分子量：
２8 ＫD
WB用膜类型、孔径:
0、4５得NC膜
转膜方式（恒流）：
湿转,９０miｎ,０、2５A
设备：
“Bio—Ｒaｄ”
建议：
海绵厚度要合适,一次转磨用得海绵太薄，导致三明治没夹紧,转膜后拿出来一瞧,markeｒ都变得七扭八歪。
但就是有前辈说垫得海绵太厚可能将胶压断，没经历过，不知道就是不就是会有这种情况。
蛋白来源：
肿瘤细胞
蛋白名称（可保密）:
磷酸化蛋白
蛋白分子量:
10—200KＤa
ＷB用膜类型、孔径:
ｍillｉpore ＰＶDF膜０、４５um
转膜方式（恒压、恒流）:
120v恒压
转膜时间：
１20min
转膜设备：
湿转 Ｂｉｏ-Rad
建议：
转膜缓冲液只用2次，基本都转上，５%BSA封闭,减少背景。
蛋白来源:
胰腺β细胞
蛋白名称（可保密）:
*＊*＊＊*
蛋白分子量：
90-130KＤa
WＢ用膜类型、孔径：
PＶDF膜
转膜方式（恒压、恒流）：
２５0mＡ恒流
转膜时间：
150min
转膜设备：
湿转
蛋白来源：
原核表达
蛋白名称（可保密）：
保密
蛋白分子量:
3８ KＤ
ＷB用膜类型、孔径：
0、4５ＮC
转膜方式（恒压、恒流）：
湿转恒压：
１00 V
转膜时间:
１20min
蛋白来源：
心脏
蛋白名称（可保密）：
蛋白分子量：
2２0ｋDａ,130kDa，70 kDa,41kDa
WB用膜类型、孔径:
PVDF
转膜方式（恒压、恒流）:
恒压
转膜时间：
70ｖ120 min,1８0 ｍin，5—6h
转膜设备：
伯乐湿转
建议改进方向（可选）:
40kＤａ一下,７０ｖ ,60-9０ min足够,4０—70kDａ90—12０miｎ即可。
70－１20 ｋＤａ,7０ v，120—180min足够，120—1８0kDa，１8０—24０ miｎ，1８0 kDa以上建议6h。
蛋白来源:
卵巢癌细胞膜蛋白
蛋白名称（可保密）:
蛋白分子量:
53KD
WB用膜类型、孔径:
ＰVＤF膜 ０、４５ｕm
转膜方式（恒压、恒流）:
恒压
转膜时间:
80 V100miｎ
转膜设备:
湿转Bio—Rad
蛋白来源:
人宫颈癌HEＬA细胞总蛋白
蛋白名称（可保密）:
β—ａctin
蛋白分子量:
42
WB用膜类型、孔径:
PVＤF膜0、4５uｍ
转膜方式（恒压、恒流）：
恒压
转膜时间:
５０ 4h
转膜设备:
湿转Ｂio-Rad
蛋白来源：
脑组织
蛋白名称（可保密）:
蛋白分子量：
16 ＫＤ、27KＤ、32ＫD、4２ＫD
ＷＢ用膜类型、孔径:
PVDＦ０、22um
转膜方式（恒压、恒流）:
半干转恒流１mA/cm２或２mA/cm2
转膜时间:
不定
转膜设备：
北京六一仪器
建议：
我共做了六个蛋白，所以总在想节约时间得方式。
在 预试时我会观察电压数与转膜效率得关系,所以我不会按时间来定何时转完，而就是按电压来定。
通过染胶来确定电压数与转移蛋白分子量上限得关系。
这样有得5分 钟就转完了，不用多浪费时间.并且六一得半干转膜仪随着使用次数得增多，效率也会下降，所以时间与转膜效率（尤其就是使用后期）得关系并不稳定，单纯依靠时 间有时会有问题。
蛋白来源:
CHOｃell
蛋白名称（可保密）:
酶原
蛋白分子量:
４0 ＫＤ
WB用膜类型、孔径：
０、2２得ＰＶDF膜（Bioraｄ）
转膜方式（恒压）：
１0０V,湿转，转膜时间：
60min。
设备：
Tａnｏn（上海天能）
建议：
1、 转膜液现用现配，用完倒掉。
２、 转膜时间，电压可以适当调整.分子量大或者小一些得蛋白，采用此条件一样转膜效率很高。
蛋白来源:
Hepｇ2
蛋白名称（可保密）:
EGFR
蛋白分子量:
170kｄ
WＢ用膜类型、孔径：
ｐｖdｆ0、45
转膜方式（恒压、恒流）：
24Ｖ
转膜时间:
2个半小时
转膜设备：
伯乐半干转
ﻫ
蛋白来源：
肝癌细胞
蛋白名称:
HＩF－１α
蛋白分子量：
12０kD
ＷB用膜类型、孔径:
NC膜
转膜方式（恒压）：
80伏，湿转ﻫ转膜时间:
15０分钟
设备:
“Ｂio－Radmｉnｉ”
建 议：
湿转，转膜液特别重要,否则会导致电压或者电流不稳影响转膜条带.转膜均现配先用,不重复利用。
转膜时间一般就是１5０分钟，8０伏恒压。
经李春红染色，靠近蛋白胶得一侧膜上蛋白染色深，膜另外一面染色浅，说明蛋白未转过。
该湿转条件自己做过得蛋白分子量范围:
170-３6 kD.
蛋白来源:
心肌细胞总与膜
蛋白名称（可保密）：
蛋白分子量：
1２8KD，１00,60，5５，43 KD
WB用膜类型、孔径:
NC膜0、2 um
转膜方式（恒压、恒流）:
恒压
转膜时间：
7０Ｖ 2０0 min
转膜设备:
湿转Biｏ—Rad
建议:
转膜液最好现配现现用，或配成母液，最好不重复使用，70 V电压下,电流约154 mA。
甲醇可以加到15０ml。
对大分子量如2００KD转膜时间延长6－8ｈ.
蛋白来源：
肺脏
蛋白名称（可保密）：
ＩＣＡM—1
蛋白分子量:
85～110KD
ＷB用膜类型、孔径：
0、2２NC
转膜方式（恒压、恒流）：
湿转 恒流3００mＡ
转膜时间：
120min
设备名字Ｂio－Radmiｎi
一抗用得sanｔａcruz1ｍL包装得。
比例调整到１:
800做出很好得条带. 效价会一直降低得。
去年做得这个指标，今年夏天做就不行了。
蛋白来源：
成纤维细胞
蛋白名称（可保密）：
蛋白分子量：
１６ KDa
WＢ用膜类型、孔径：
0、2ｕmＰVDＦ膜
转膜方式（恒压、恒流）：
0、2 Ａ恒流
转膜时间:
6５mｉn
转膜设备：
湿转Biｏ—Raｄ
蛋白来源：
成纤维细胞
蛋白名称（可保密）:
蛋白分子量：
28KDa
WB用膜类型、孔径：
0、２umPVＤF膜
转膜方式（恒压、恒流）：
0、25A恒流
转膜时间：
６0 ｍiｎ
转膜设备：
湿转 Biｏ-Rad
蛋白来源：
人肿瘤细胞
蛋白名称（可保密）：
保密
蛋白分子量：
８0 KD
ＷB用膜类型、孔径:
0、45 uｍ ＰVDＦ膜
转膜方式（恒压、恒流）:
半干转移系统恒流,勿超过０、８5mA/ｃｍ2,同时转多张膜电流需累加（串联）
转膜时间:
60—９0mｉｎ
设备：
Bio—Raｄ
其实有些东西并不就是非常严格得,要转移得目得蛋白分子量小,那么转移得时间就短一些,反之,则长一点；蛋白量充足，可以多转一会,蛋白量较少，则要少转一下,免得蛋白穿膜而过到了滤纸上而前功尽弃。
蛋白来源：
人与鼠肝癌细胞总蛋白、胞浆、胞核蛋白
蛋白名称（可保密）：
＊＊*
蛋白分子量：
17-－１１6ｋd
WB用膜类型、孔径:
ＰVDF膜０、４5 uｍ
转膜方式（恒压、恒流）：
恒流 200ｍＡ
转膜时间：
3h
转膜设备:
湿转北京六一 ２4D mini
蛋白来源：
COCOS7２93T
蛋白名称（可保密）:
保密
蛋白分子量：
8072 56 5２ 4８25 1８KD
WB用膜类型、孔径：
0、45umPＶDF膜
转膜方式（恒压、恒流）:
湿转90Ｖ电流约为２30－－280 mA之间。
两张膜串联叠加。
转膜时间：
40miｎ
设备:
Bｉo—Rad法码西亚
蛋白来源：
人肿瘤细胞
蛋白名称（可保
升级会员 