双染料染色照片的合成方法Word格式.docx

双染料染色照片的合成方法Word格式.docx

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图片照得还可以，能组合成一张漂亮的合成图片。

1.先调整图像对比及亮度。

2.分别转换成灰度图片

3.对其中一张进行co-localization操作，注意别把红绿色给弄反了。

图片漂亮否？

至于“双标阳性的细胞（红绿同时着色）占整个细胞的百分比（绿色的细胞）”，数一数吧，反正数量也不多。

再作一遍。

这回用colorcomposite工具作，两种方法都是可以的。

似乎使用液晶显示器与CRT显示器的色彩有很大不同。

作图像处理分析的时候当使用CRT显示器，色彩更好一些。

有人对我说过，搞图像的电脑要使用CRT显示器。

现在是使用CRT显示器制作的效果。

我用ps试了一下炸酱面提供的两幅图，做的色彩不如你的好，不过也说的过去。

可保存下来的图片是psd格式的，不是jpg格式，打不开，我看你传上来的是jpg格式的，请问哪不对呢？

使用PS作完图片后，要点“拼合可见图层”或“合并图层”，然后就可以保存为各种普通格式的图片了。

专业一点得保存为TIFF格式，一般的可以存为jpg格式。

我也要做免疫荧光双染（hochest和fitc），可我们实验室的的confocal没有紫外激发，所以只能用荧光显微镜了。

实验室有一台荧光显微镜带图像采集系统，不知道图像采集系统能不能叠加（不知道它有没有能叠加的软件）。

如果不能我想用它拍照后用ipp或者ps。

ipp或者ps软件对拍摄的图片要要求吗，比如格式，bit等，需不需要知道荧光显微镜和图像采集系统的型号之类的呢。

谢谢

再问一个问题：

用ipp或者ps合成的图片杂志社能承认吗？

我浏览了一些关于免疫荧光双染的英文文章，大部分都没有提及是用什么拍摄的，少部分说是confocal拍的。

不过看图片感觉合成的肯定有。

恳请大家帮忙

荧光图像本质上是单色图像。

所以以前的图像采集系统与现在的激光共聚焦显微镜都是单色图像，其图像色彩都是后加的“伪彩色”。

当我们看到那些色彩鲜艳的漂亮的“荧光图片”时，很少想到它们是伪彩色图片。

单染料的伪彩色照片与真实的荧光照片没什么区别。

有荧光强度的变化。

双染色的荧光照片，两种染料的强度对比并不能反映其相对应的蛋白表达程度的对比。

此时更看重的两种荧光在位置上的重迭或各自的分布。

所以，使用增强的伪彩色能明显地表达这种分布，是正规的表达方法。

所以楼上使用老式的荧光显微镜图像采集系统拍摄照片是可以的。

估计拍摄的是单色灰度照片，完全可以分别使用不同的滤光片分别拍摄同一视野下两种染料各自的荧光照片，然后加伪彩色合成一张双染色照片。

以前的荧光照片就是这样拍摄出来的。

现在那些漂亮的激光共聚焦荧光照片本质上也是这样拍摄出来的，区别是“图像采集系统”换成了激光与光电倍增管，灵敏度更高。

楼上使用老机器时可能遇到的问题是荧光强度太暗的问题。

别人用激光共聚焦作出的结果，楼上用普通荧光显微镜很可能会看不到荧光，重复不出来。

ps的方法：

将红色的图像打开为背景，绿色图像打开为图层1；

选择拼合图层：

减去，分别背景和图层1调用CtrlM（曲线）调整效果，也可以用CtrlL（色阶）来调整。

感觉比IPP简单，效果似乎差不多。

在科研工作中，对实验图片最忌讳的就是用PS修改图片。

这并不是歧视PS,而是出于保持原始数据的理由。

PS是一个编辑图片的工具程序，对实验图片用PS进行修改往往会被视为作假行为。

专业的图像处理程序主要功能是测量分析而不是编辑图片，为了测量目的而对图片进行必要的修改是允许的，在修改图片的过程中，正规的专业图像分析软件甚至会记录下对图片的每一步修改过程。

以此来保证图片的真实性。

大家可以试试用IPP作一个简单的复制粘帖操作。

在photoshop里可以方便地把一小块不规则区域抠下来粘帖到另一个地方，在IPP里是作不到的。

这是一个典型的作假操作。

在IPP里也有很多修改图片的操作工具，其最大特点就是对整张图片进行各种有规则的修改，以保证图片数据的真实性。

photoshop与IPP各有所长，大家要区别它们各自用于不同的场合。

并不存在谁的功能更强大的比较。

最后再强调一句，如果你向国外期刊上投稿，附带的照片最好别用PS作任何处理。

曾经有过先例的，被认为是对图片作假了。

这里有个要注意的，就是在合成图片之前应分别调节两个源图片的亮度与对比度，使得各自图片的背景足够黑。

如果背景太亮，合成的照片就会灰蒙蒙的。

源照片蓝色的那张曝光过度。

中间有些亮斑都成了白色了。

这是合成照片效果不好的原因，拍照时应当减少曝光时间。

荧光照片就应该照得背景一片漆黑，样品是有色的亮，不能亮到颜色失真。

使用IPP软件也可以进行合成。

先要将两张照片都转换成灰度图片。

分别调整一下亮度与对比度。

在colorcomposite菜单下分别指定各照片使用的荧光染料名称，就可以合成出照片来了。

下面是我作的效果，与dxc75作的差不多。

合成方法如下，但我用的染料色不对。

从setcolor按纽可以选择染料

把色彩再调艳一点：