酵母菌的分离筛选方法Word文档格式.docx

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100g黄豆芽，加水煮沸30min，纱布过滤，补足蒸馏水1L

1.6察氏培养基：

主要培养霉菌观察形态用

蔗糖30g/L硝酸钠3g/L磷酸氢二钾1g/L氯化钾0.5g/L硫酸镁

0.5g/L硫酸亚铁0.01g/L琼脂15-20g/L121℃20minPH自然

一般分离黄酒酵母酒精酵母使用曲汁培养基，啤酒酵母用酒花麦汁培养基，葡萄酒酵母用葡萄汁培养基。

2.集菌：

研究酵母菌生态和某种基物或样品中的酵母菌区系，一般不进行集菌，以免改变其中不同种类数量间的对比，将样品制成菌悬液按常规法分离。

若从样品中分离特定种类时先集菌。

集菌发酵力强菌株，加酸性含糖的培养基，酸性豆汁，必要时注入高浓度的酒精（13-17%），霉菌在液体中形成菌丝体，酵母不形成菌丝，25-28℃2-3d，遇到菌丝体用接种环挑去烧掉，去掉上清液，取沉淀酵母一至两环移植另一液体培养基中，集菌连续两至三次才能完成，要配合镜检。

实例：

将待分离的样品10g（ml）放入90ml无菌水或生理盐水/150ml三角瓶（玻璃珠），摇床振荡20-30min，取上清液接种于酸性培养液（乳酸-马铃薯-葡萄糖培养基酸性麦芽汁或酸性豆芽汁）25-28℃2-3d，培养过程中若出现菌丝体跳出烧掉，集菌连续两至三次，培养液变成混浊，产生菌膜和沉淀物。

镜检：

美兰染液染色，活菌可还原美兰染液，菌体无色。

3.筛选：

分离：

取集菌液适当稀释，吸取0.1-0.2ml梯度菌液（至少两个两个平衡），涂布于马铃薯-葡萄糖麦芽汁或虎红培养基平板，也可采用混菌法或蘸取集菌菌液直接划线，（平放12h后倒置培养），25℃培养48h，低温酵母菌15℃高温酵母菌35℃40℃45℃，形成清晰菌落。

在培养皿底划分小方格，待菌落生长良好后，用放大镜或低倍镜，观察每格内每个菌落编号并描述，颜色表面边缘切面等，再制片在高倍镜下观察各菌株的个体形态，做好记录。

选择不同菌落分别接于麦芽汁斜面，25℃培养48小时备用。

纯化：

培养基与分离培养基相同，否则，不同培养基菌落会改变形态，决不能认为菌落外观相同菌属于同一种。

菌落外观相近的菌落，只能挑取一至数个菌落为代表进行纯化。

常用方法为平板划线分离法：

挑取单菌落于平板划线纯化菌株，25-28℃2-3d，选择菌生长快菌落大典型继续纯化，每个分离物至少经两次划线，结合镜检保持菌株的纯度，对于保存菌株也应定期检查纯度。

纯化的菌株转接于麦芽汁斜面25-28℃2d待鉴定或用灭菌液体石蜡封面于4℃冰箱保存。

筛选：

性能测定：

根据不同需要，选择不同性能测定方法。

产气性能比较：

采用杜氏管发酵法，将斜面菌种两环接种于麦芽汁或豆芽汁液体培养基中（可以分两次加培养基），28℃振荡培养48h，产气时间和产气量。

产酒精能力测定：

采用蒸馏法测酒精含量。

产香能力测定：

通过嗅觉鉴定。

附：

不同酵母菌的形态特征：

酿酒酵母：

在麦芽汁琼脂培养基上，菌落与细菌相似，比细菌大而厚，不透明，表面光滑，湿润粘稠，乳白色，形成假菌丝。

单细胞，形状有圆形椭圆形等，大小不一。

在麦芽汁中，沉淀表面形成环状膜。

不能利用硝酸盐。

产朊假丝酵母：

在麦芽汁琼脂培养基上菌落为乳白色，平滑，有光泽或无光泽，边缘整齐呈菌丝状。

细胞呈圆形椭圆形和圆柱形等。

能利用硝酸盐为氮源。

实例1：

大曲中酵母菌的分离及鉴定　

1.富集培养：

取5g样品，在试管中加入10ml麦芽汁培养基，同时加入一滴乳酸摇匀，25-28℃24h，后取1ml菌液转入另10ml麦芽汁培养基试管中培养25-28℃24h，稍长（过长则霉菌长出）。

培养液变浊产膜或沉淀。

观察：

用无菌操作法取少许菌液置于载玻片中央的0.l%美蓝染色液中，混匀后加盖玻片制成水浸片，先用低倍镜后换高倍镜观察酵母菌的形态和出芽生殖情况。

活酵母菌可使美蓝还原，从而使菌体不着色，用此方法可判断酵母菌的死活。

要求：

较高的糖50g/l，抑菌剂孟加拉红0.03g/L（许多细菌放线菌和快速生长的霉菌），PH4.5。

或用乳酸（5ml）-马铃薯（200g）-葡萄糖（20g）培养基富集。

2.酵母菌分离：

平板划线涂布或混菌均可。

取集菌菌液，梯度稀释，

取10-510-610-7,0.1ml菌液涂布虎红培养基上，25-28℃48h（若

不纯可挑取单菌落连续多次划线）。

3.酵母菌选择：

对典型单菌落，经美兰染色，制片镜检，进行描述性

记录，然后选择不同菌落转接于麦芽汁斜面，25-28℃48h备用。

4.酵母菌纯化：

挑取10-7培养基不同的单菌落，在PDA培养基接种

25-28℃2-3d后，取形态不同的单菌落传接二次，观察菌落形态确

定为单菌落后，分别接种于PDA培养基和MA培养基中，25-28℃3d，

根据在不同培养基中菌落形态进行初步分类。

将所得菌株于斜面培养

保存在4℃冰箱中。

实例2：

高温堆积糟醅中酵母菌的选育

1.集菌：

同上45℃2-3d，依此法转接2-3次，再行分离。

2.分离：

梯度菌液分别涂布于麦芽汁麸皮汁豆芽汁平板于45℃

2-3d，将平皿上生长的菌落划线纯化，菌株移入斜面，备用。

3.有效菌株的确认：

分离的数十株酵母经镜检有酵母属的各种酵母，

假丝酵母，红酵母，白地霉等。

用高粱粉糖化液，饴糖稀释液，麸皮

等进行发酵，测定次生代谢产物，依次判出Y1Y2Y3Y4等与酱香酒

产量质量有关。

4.菌种的分类鉴定：

4.1形态特征：

（麦芽汁琼脂）

编号形态特征

Y1菌落由白色到奶油色，无光泽，软而平滑或部分有皱纹。

边缘呈波纹，凸起，

色黄，中心凹，奶油色，室温放一月后，培养物由奶油色变浅褐色。

细胞呈圆卵

圆椭圆，大小不等。

单个，成双，偶尔成短链，多边芽殖。

（意大利酵母）

Y2菌落呈浅奶油色，菌落平滑或部分有皱纹，无光泽，边缘呈黄色，大波纹状。

细胞圆形卵形椭圆形，大小不等，多边芽殖。

（地生酵母）

Y328℃3d后，细胞圆形椭圆形，单个或成双，两端芽殖，培养物奶油状，奶油色到浅褐色，平滑，稍平坦，光亮，边缘偶尔波纹，无真菌丝。

（酿酒酵母）

Y4菌落白色至奶油色，无光泽，软而平滑或部分有皱纹。

培养时间偏长菌落渐硬，并呈菌丝状，不易挑起。

在麦芽汁平皿上，菌落白色，凸起，有皱纹，边缘波纹状。

细胞较小，卵圆椭圆形，有大量真菌丝。

（间型假丝酵母）

4.2生理生化特征

4.2.1发酵糖类：

酵母菌发酵液成分分析

Y1Y2Y3Y4

香气稍酱香，酯香稍酱香，酯香酯香醇甜香

酒精（%）3.93.94.35.1

代谢产物乙丙丁乳异戊酸同Y1除硫甲基丙醇乙丙丁乳酸

乙醛乙酯乳酯丙醇其他成分均有乙醛丙醇异丁醇

异丁醇异戊醇戊醇异戊醇

硫甲基丙醇

各种酵母发酵糖类结果

葡萄糖++++

D-半乳糖+-+-

麦芽糖+-++

蔗糖+-++

乳糖---+

棉子糖--++

蜜二糖　　　　　　　－　　　　　－　　　　　－　　　　－

纤维二糖　　　　　　　　－　　　　　－　　　　　－　　　　－

海藻糖　　　　　　　　　　－　　　　　－　　　　＋　　　　－

松三糖　　　　　　　　　－　　　　　－　　　　　－　　　　－

菊糖　　　　　　　　　　－　　　　　＋　　　　　－　　　　＋

可溶性淀粉　　　　　　　－　　　　　＋　　　　　－　　　　＋

ａ-甲基-葡萄糖苷　　　－　　　　　－　　　　　－　　　　－

同化碳源

乳糖+--+

蜜二糖－　　　　　－　　　　　－　　　　－

山梨糖　　　　　　　－　　　　　－　　　　　－　　　　－

松三糖　　　　　　　　　－　　　　　－　　　　　+　　　　－

菊糖　　　　　　　　　　－　　　　　-　　　　　－　　　　-

ａ-甲基-葡萄糖苷　　　－　　　　　－　　　　－　　　　　+

卫茅醇　+　　　　　－　　　　　－　　　　－

甘露醇　　　　　　　　　－　　　　　＋　　　　　－　　　　＋

D-木糖　　　　　　　　　－　　　　　-　　　　　－　　　　-

琥玻酸　　　　　　　　　＋　　　　　－　　　　　－　　　　＋

柠檬酸　　　　　　　　　＋　　　　　＋　　　　　－　　　　＋

各酵母菌其他生化生理特征

Y1Y2Y3Y4

　　同化氮源（硝酸钾）－　　　　　－　　　　－　　　　　－

　　同化乙醇　　　　　＋　　　　　＋　　　　－　　　　　＋

　　液化明胶　　　　　－　　　　　－　　　　－　　　　　＋

产酸试验　　　　　－　　　　　－　　　　＋　　　　　＋

产醋试验　　　　　＋　　　　　＋　　　　＋　　　　　＋

结果：

Y1意大利酵母，Y2地生酵母，Y3酿酒酵母，Y4间型假丝酵母

分离耐酸耐高温酵母菌选择压排底醅或双轮底糟为试样，集菌培养基中加入少量底醅浸出液。

当我被上帝造出来时，上帝问我想在人间当一个怎样的人，我不假思索的说，我要做一个伟大的世人皆知的人。

于是，我降临在了人间。

我出生在一个官僚知识分子之家，父亲在朝中做官，精读诗书，母亲知书答礼，温柔体贴，父母给我去了一个好听的名字：

李清照。

小时侯，受父母影响的我饱读诗书，聪明伶俐，在朝中享有“神童”的称号。

小时候的我天真活泼，才思敏捷，小河畔，花丛边撒满了我的诗我的笑，无可置疑，小时侯的我快乐无虑。

“兴尽晚回舟，误入藕花深处。

争渡，争渡，惊起一滩鸥鹭。

”青春的我如同一只小鸟，自由自在，没有约束，少女纯净的心灵常在朝阳小，流水也被自然洗礼，纤细的手指拈一束花，轻抛入水，随波荡漾，发髻上沾着晶莹的露水，双脚任水流轻抚。

身影轻飘而过，留下一阵清风。

可是晚年的我却生活在一片黑暗之中，家庭的衰败，社会的改变，消磨着我那柔弱的心。

我几乎对生活绝望，每天在痛苦中消磨时光，一切都好象是灰暗的。

“寻寻觅觅冷冷清清凄凄惨惨戚戚”这千古叠词句就是我当时心情的写照。

最后，香消玉殒，我在痛苦和哀怨中凄凉的死去。

在天堂里，我又见到了上帝。

上帝问我过的怎么样，我摇摇头又点点头，我的一生有欢乐也有坎坷，有笑声也有泪水，有鼎盛也有衰落。

我始终无法客观的评价我的一生。

我原以为做一个着名的人，一生应该是被欢乐荣誉所包围，可我发现我错了。

于是在下一轮回中，我选择做一个平凡的人。

我来到人间，我是一个平凡的人，我既不着名也不出众，但我拥有一切的幸福：

我有温馨的家，我有可亲可爱的同学和老师，我每天平凡而快乐的活着，这就够了。

天儿蓝蓝风儿轻轻，暖和的春风带着春的气息吹进明亮的教室，我坐在教室的窗前，望着我拥有的一切，我甜甜的笑了。

我拿起手中的笔，不禁想起曾经作诗的李清照，我虽然没有横溢的才华，但我还是拿起手中的笔，用最朴实的语言，写下了一时的感受：

人生并不总是完美的，每个人都会有不如意的地方。

这就需要我们静下心来阅读自己的人生，体会其中无尽的快乐和与众不同。

“富不读书富不久，穷不读书终究穷。

”为什么从古到今都那么看重有学识之人？

那是因为有学识之人可以为社会做出更大的贡献。

那时因为读书能给人带来快乐。

自从看了《丑小鸭》这篇童话之后，我变了，变得开朗起来，变得乐意同别人交往，变得自信了……因为我知道：

即使现在我是只“丑小鸭”，但只要有自信，总有一天我会变成“白天鹅”的，而且会是一只世界上最美丽的“白天鹅”……

我读完了这篇美丽的童话故事，深深被丑小鸭的自信和乐观所折服，并把故事讲给了外婆听，外婆也对童话带给我们的深刻道理而惊讶不已。

还吵着闹着多看几本名着。

于是我给外婆又买了几本名着故事，她起先自己读，读到不认识的字我就告诉她，如果这一面生字较多，我就读给她听整个一面。

渐渐的，自己的语文阅读能力也提高了不少，与此同时我也发现一个人读书的乐趣远不及两个人读的乐趣大，而两个人读书的乐趣远不及全家一起读的乐趣大。

于是，我便发展“业务”带动全家一起读书……现在，每每遇到好书大家也不分男女老少都一拥而上，争先恐后“抢书”，当我说起我最小应该让我的时候，却没有人搭理我。

最后还把书给撕坏了，我生气地哭了，妈妈一边安慰我一边对外婆说：

“孩子小，应该让着点。

”外婆却不服气的说：

“我这一把年纪的了，怎么没人让我呀？

”大家人你一言我一语，谁也不肯相让……读书让我明白了善恶美丑、悲欢离合，读一本好书，犹如同智者谈心、谈理想，教你辨别善恶，教你弘扬正义。

读一本好书，如品一杯香茶，余香缭绕。

读一本好书，能使人心灵得到净化。

书是我的老师，把知识传递给了我；

书是我的伙伴，跟我诉说心里话；

书是一把钥匙，给我敞开了知识的大门；

书更是一艘不会沉的船，引领我航行在人生的长河中。

其实读书的真真乐趣也就在于此处，不是一个人闷头苦读书；

也不是读到好处不与他人分享，独自品位；

更不是一个人如痴如醉地沉浸在书的海洋中不能自拔。

而是懂得与朋友，家人一起分享其中的乐趣。

这才是读书真正之乐趣呢！

这所有的一切，不正是我从书中受到的教益吗？

我阅读，故我美丽；

我思考，故我存在。

我从内心深处真切地感到：

我从读书中受到了教益。

当看见有些同学宁可买玩具亦不肯买书时，我便想到培根所说的话：

“世界上最庸俗的人是不读书的人，最吝啬的人是不买书的人，最可怜的人是与书无缘的人。

”许许多多的作家、伟人都十分喜欢看书，例如毛泽东主席，他半边床上都是书，一读起书来便进入忘我的境界。

书是我生活中的好朋友，是我人生道路上的航标，读书，读好书，是我无怨无悔的追求。