酵母菌的分离筛选方法Word文档格式.docx

1、100g黄豆芽，加水煮沸30min，纱布过滤，补足蒸馏水1L1.6察氏培养基：主要培养霉菌观察形态用蔗糖30g/L 硝酸钠3g/L 磷酸氢二钾1g/L 氯化钾0.5g/L 硫酸镁0.5g/L 硫酸亚铁0.01g/L 琼脂15-20g/L 121 20min PH自然 一般分离黄酒酵母 酒精酵母使用曲汁培养基，啤酒酵母用酒花麦汁培养基，葡萄酒酵母用葡萄汁培养基。2.集菌：研究酵母菌生态和某种基物或样品中的酵母菌区系，一般不进行集菌，以免改变其中不同种类数量间的对比，将样品制成菌悬液按常规法分离。若从样品中分离特定种类时先集菌。集菌发酵力强菌株，加酸性含糖的培养基，酸性豆汁，必要时注入高浓度的酒精

2、（13-17%），霉菌在液体中形成菌丝体，酵母不形成菌丝，25-28 2-3d，遇到菌丝体用接种环挑去烧掉，去掉上清液，取沉淀酵母一至两环移植另一液体培养基中，集菌连续两至三次才能完成，要配合镜检。实例：将待分离的样品10g（ml）放入90ml无菌水或生理盐水/150ml三角瓶（玻璃珠），摇床振荡20-30min，取上清液接种于酸性培养液（乳酸-马铃薯-葡萄糖培养基 酸性麦芽汁或酸性豆芽汁）25-28 2-3d，培养过程中若出现菌丝体跳出烧掉，集菌连续两至三次，培养液变成混浊，产生菌膜和沉淀物。镜检：美兰染液染色，活菌可还原美兰染液，菌体无色。3.筛选：分离：取集菌液适当稀释，吸取0.1-0.

3、2ml梯度菌液（至少两个两个平衡），涂布于马铃薯-葡萄糖 麦芽汁或虎红培养基平板，也可采用混菌法或蘸取集菌菌液直接划线，（平放12h后倒置培养），25培养48h，低温酵母菌15 高温酵母菌 35 40 45，形成清晰菌落。在培养皿底划分小方格，待菌落生长良好后，用放大镜或低倍镜，观察每格内每个菌落编号并描述，颜色 表面 边缘 切面等，再制片在高倍镜下观察各菌株的个体形态，做好记录。选择不同菌落分别接于麦芽汁斜面，25培养48小时备用。纯化：培养基与分离培养基相同，否则，不同培养基菌落会改变形态，决不能认为菌落外观相同菌属于同一种。菌落外观相近的菌落，只能挑取一至数个菌落为代表进行纯化。常用方法

4、为平板划线分离法：挑取单菌落于平板划线纯化菌株，25-28 2-3d，选择菌生长快 菌落大 典型继续纯化，每个分离物至少经两次划线，结合镜检保持菌株的纯度，对于保存菌株也应定期检查纯度。纯化的菌株转接于麦芽汁斜面25-28 2d 待鉴定或用灭菌液体石蜡封面于4冰箱保存。筛选：性能测定：根据不同需要，选择不同性能测定方法。产气性能比较：采用杜氏管发酵法，将斜面菌种两环接种于麦芽汁或豆芽汁液体培养基中（可以分两次加培养基），28振荡培养48h，产气时间和产气量。产酒精能力测定：采用蒸馏法测酒精含量。产香能力测定：通过嗅觉鉴定。 附：不同酵母菌的形态特征：酿酒酵母：在麦芽汁琼脂培养基上，菌落与细菌相

5、似，比细菌大而厚，不透明，表面光滑，湿润粘稠，乳白色，形成假菌丝。单细胞，形状有圆形 椭圆形等，大小不一。在麦芽汁中，沉淀表面形成环状膜。不能利用硝酸盐。产朊假丝酵母：在麦芽汁琼脂培养基上菌落为乳白色，平滑，有光泽或无光泽，边缘整齐呈菌丝状。细胞呈圆形 椭圆形和圆柱形等。能利用硝酸盐为氮源。实例1：大曲中酵母菌的分离及鉴定 1.富集培养：取5g样品，在试管中加入10ml麦芽汁培养基，同时加入一滴乳酸摇匀，25-2824h，后取1ml菌液转入另10ml麦芽汁培养基试管中培养25-28 24h，稍长（过长则霉菌长出）。培养液变浊产膜或沉淀。观察：用无菌操作法取少许菌液置于载玻片中央的0.l%美蓝染

6、色液中，混匀后加盖玻片制成水浸片，先用低倍镜后换高倍镜观察酵母菌的形态和出芽生殖情况。活酵母菌可使美蓝还原，从而使菌体不着色，用此方法可判断酵母菌的死活。要求：较高的糖50g/l， 抑菌剂 孟加拉红0.03 g/L（许多细菌 放线菌和快速生长的霉菌），PH 4.5。或用乳酸（5ml）-马铃薯（200g）-葡萄糖（20g）培养基富集。2.酵母菌分离：平板划线 涂布或混菌均可。取集菌菌液，梯度稀释，取 10-5 10-6 10-7,0.1ml菌液涂布虎红培养基上，25-28 48h（若不纯可挑取单菌落连续多次划线）。3.酵母菌选择：对典型单菌落，经美兰染色，制片镜检，进行描述性记录，然后选择不同菌

7、落转接于麦芽汁斜面，25-28 48h备用。4.酵母菌纯化：挑取10-7 培养基不同的单菌落，在PDA培养基接种25-28 2-3d后，取形态不同的单菌落传接二次，观察菌落形态确定为单菌落后，分别接种于PDA培养基和MA培养基中，25-28 3d，根据在不同培养基中菌落形态进行初步分类。将所得菌株于斜面培养保存在4冰箱中。实例2：高温堆积糟醅中酵母菌的选育1.集菌：同上 45 2-3d，依此法转接2-3次，再行分离。2.分离：梯度菌液分别涂布于麦芽汁 麸皮汁 豆芽汁平板于45 2-3d，将平皿上生长的菌落划线纯化，菌株移入斜面，备用。3.有效菌株的确认：分离的数十株酵母经镜检有酵母属的各种酵母

8、，假丝酵母，红酵母，白地霉等。用高粱粉糖化液，饴糖稀释液，麸皮等进行发酵，测定次生代谢产物，依次判出Y1 Y2 Y3 Y4等与酱香酒产量质量有关。4.菌种的分类鉴定：4.1形态特征：（麦芽汁琼脂）编号 形态特征Y1 菌落由白色到奶油色，无光泽，软而平滑或部分有皱纹。边缘呈波纹，凸起，色黄，中心凹，奶油色，室温放一月后，培养物由奶油色变浅褐色。细胞呈圆 卵圆 椭圆，大小不等。单个，成双，偶尔成短链，多边芽殖。 （意大利酵母） Y2菌落呈浅奶油色，菌落平滑或部分有皱纹，无光泽，边缘呈黄色，大波纹状。细胞圆形卵形 椭圆形，大小不等，多边芽殖。 （地生酵母）Y3 28 3d后，细胞圆形 椭圆形，单个或

9、成双，两端芽殖，培养物奶油状，奶油色到浅褐色，平滑，稍平坦，光亮，边缘偶尔波纹，无真菌丝。 （酿酒酵母）Y4 菌落白色至奶油色，无光泽，软而平滑或部分有皱纹。培养时间偏长菌落渐硬，并呈菌丝状，不易挑起。在麦芽汁平皿上，菌落白色，凸起，有皱纹，边缘波纹状。细胞较小，卵圆 椭圆形，有大量真菌丝。 （间型假丝酵母）4.2生理生化特征4.2.1发酵糖类： 酵母菌发酵液成分分析 Y1 Y2 Y3 Y4 香 气 稍酱香，酯香 稍酱香，酯香 酯香 醇甜香酒精（%） 3.9 3.9 4.3 5.1代谢产物 乙 丙 丁 乳 异戊酸 同Y1 除硫甲基丙醇 乙 丙 丁 乳酸 乙醛 乙酯 乳酯 丙醇 其他成分均有 乙

10、醛丙醇异丁醇 异丁醇 异戊醇 戊醇 异戊醇 硫甲基丙醇 各种酵母发酵糖类结果葡萄糖 + + + +D-半乳糖 + - + -麦芽糖 + - + +蔗糖 + - + +乳糖 - - - +棉子糖 - - + +蜜二糖 纤维二糖海藻糖松三糖菊糖可溶性淀粉-甲基-葡萄糖苷 同化碳源乳糖 + - - +蜜二糖 山梨糖 松三糖+菊糖-甲基-葡萄糖苷 +卫茅醇 +甘露醇D-木糖-琥玻酸柠檬酸各酵母菌其他生化生理特征Y1 Y2 Y3 Y4同化氮源（硝酸钾）同化乙醇液化明胶产酸试验产醋试验结果：Y1意大利酵母，Y2地生酵母，Y3酿酒酵母，Y4间型假丝酵母分离耐酸耐高温酵母菌选择压排底醅或双轮底糟为试样，集菌培

11、养基中加入少量底醅浸出液。当我被上帝造出来时，上帝问我想在人间当一个怎样的人，我不假思索的说，我要做一个伟大的世人皆知的人。于是，我降临在了人间。我出生在一个官僚知识分子之家，父亲在朝中做官，精读诗书，母亲知书答礼，温柔体贴，父母给我去了一个好听的名字：李清照。小时侯，受父母影响的我饱读诗书，聪明伶俐，在朝中享有“神童”的称号。小时候的我天真活泼，才思敏捷，小河畔，花丛边撒满了我的诗我的笑，无可置疑，小时侯的我快乐无虑。“兴尽晚回舟，误入藕花深处。争渡，争渡，惊起一滩鸥鹭。”青春的我如同一只小鸟，自由自在，没有约束，少女纯净的心灵常在朝阳小，流水也被自然洗礼，纤细的手指拈一束花，轻抛入水，随波

12、荡漾，发髻上沾着晶莹的露水，双脚任水流轻抚。身影轻飘而过，留下一阵清风。可是晚年的我却生活在一片黑暗之中，家庭的衰败，社会的改变，消磨着我那柔弱的心。我几乎对生活绝望，每天在痛苦中消磨时光，一切都好象是灰暗的。“寻寻觅觅冷冷清清凄凄惨惨戚戚”这千古叠词句就是我当时心情的写照。最后，香消玉殒，我在痛苦和哀怨中凄凉的死去。在天堂里，我又见到了上帝。上帝问我过的怎么样，我摇摇头又点点头，我的一生有欢乐也有坎坷，有笑声也有泪水，有鼎盛也有衰落。我始终无法客观的评价我的一生。我原以为做一个着名的人，一生应该是被欢乐荣誉所包围，可我发现我错了。于是在下一轮回中，我选择做一个平凡的人。我来到人间，我是一个平

13、凡的人，我既不着名也不出众，但我拥有一切的幸福：我有温馨的家，我有可亲可爱的同学和老师，我每天平凡而快乐的活着，这就够了。天儿蓝蓝风儿轻轻，暖和的春风带着春的气息吹进明亮的教室，我坐在教室的窗前，望着我拥有的一切，我甜甜的笑了。我拿起手中的笔，不禁想起曾经作诗的李清照，我虽然没有横溢的才华，但我还是拿起手中的笔，用最朴实的语言，写下了一时的感受：人生并不总是完美的，每个人都会有不如意的地方。这就需要我们静下心来阅读自己的人生，体会其中无尽的快乐和与众不同。“富不读书富不久，穷不读书终究穷。”为什么从古到今都那么看重有学识之人？那是因为有学识之人可以为社会做出更大的贡献。那时因为读书能给人带来快

14、乐。自从看了丑小鸭这篇童话之后，我变了，变得开朗起来，变得乐意同别人交往，变得自信了因为我知道：即使现在我是只“丑小鸭”，但只要有自信，总有一天我会变成“白天鹅”的，而且会是一只世界上最美丽的“白天鹅”我读完了这篇美丽的童话故事，深深被丑小鸭的自信和乐观所折服，并把故事讲给了外婆听，外婆也对童话带给我们的深刻道理而惊讶不已。还吵着闹着多看几本名着。于是我给外婆又买了几本名着故事，她起先自己读，读到不认识的字我就告诉她，如果这一面生字较多，我就读给她听整个一面。渐渐的，自己的语文阅读能力也提高了不少，与此同时我也发现一个人读书的乐趣远不及两个人读的乐趣大，而两个人读书的乐趣远不及全家一起读的乐趣

15、大。于是，我便发展“业务”带动全家一起读书现在，每每遇到好书大家也不分男女老少都一拥而上，争先恐后“抢书”，当我说起我最小应该让我的时候，却没有人搭理我。最后还把书给撕坏了，我生气地哭了，妈妈一边安慰我一边对外婆说：“孩子小，应该让着点。”外婆却不服气的说：“我这一把年纪的了，怎么没人让我呀？”大家人你一言我一语，谁也不肯相让读书让我明白了善恶美丑、悲欢离合，读一本好书，犹如同智者谈心、谈理想，教你辨别善恶，教你弘扬正义。读一本好书，如品一杯香茶，余香缭绕。读一本好书，能使人心灵得到净化。书是我的老师，把知识传递给了我；书是我的伙伴，跟我诉说心里话；书是一把钥匙，给我敞开了知识的大门；书更是一

16、艘不会沉的船，引领我航行在人生的长河中。其实读书的真真乐趣也就在于此处，不是一个人闷头苦读书；也不是读到好处不与他人分享，独自品位；更不是一个人如痴如醉地沉浸在书的海洋中不能自拔。而是懂得与朋友，家人一起分享其中的乐趣。这才是读书真正之乐趣呢！这所有的一切，不正是我从书中受到的教益吗？我阅读，故我美丽；我思考，故我存在。我从内心深处真切地感到：我从读书中受到了教益。当看见有些同学宁可买玩具亦不肯买书时，我便想到培根所说的话：“世界上最庸俗的人是不读书的人，最吝啬的人是不买书的人，最可怜的人是与书无缘的人。”许许多多的作家、伟人都十分喜欢看书，例如毛泽东主席，他半边床上都是书，一读起书来便进入忘我的境界。书是我生活中的好朋友，是我人生道路上的航标，读书，读好书，是我无怨无悔的追求。