磷脂原料药工艺研究.docx
《磷脂原料药工艺研究.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《磷脂原料药工艺研究.docx（20页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。
磷脂原料药工艺研究
原料药生产工艺的研究资料
及文献资料
1、制备路线及详细依据
大豆磷脂是一种具有较高营养价值的天然乳化剂，含有丰富的卵磷脂、脑磷脂、肌醇磷脂、丝氨酸磷脂等成份，其脂肪酸中含有60%的不饱和脂肪酸，并含有丰富的维生素及微量元素，大豆磷脂除了补充人体必需的营养素，还具备其独特的生理活性，对生物膜的生物活性和机体的正常代谢有重要的调节能力。
卵磷脂具有较好的保健作用及营养作用[1]，是一种重要的医药原料。
主要有口服级及注射级。
磷脂提取方法主要有以下几种[2]：
有机溶剂萃取法，有机溶剂无机盐复合沉淀法，色层分离，超临界萃取技术，膜分离法。
目前用工业上用于磷脂分离纯化的方法主要是溶剂法和色层分离。
其它方法都适用于实验室研究，而难达到工业生的规模。
溶剂法文献[3]报道磷脂的制备主要有2条工艺路线。
a路线：
先用乙醇提取，后用丙酮脱脂；b路线：
先用丙酮脱脂，再用乙醇萃取。
乙醇萃取主要是利用蛋白和卵磷脂在乙醇中的溶解度不同，进而将蛋白除掉，提高磷的含量。
丙酮脱脂主要是利用油脂类成分易溶于丙酮而磷脂不溶于丙酮，这样达到油脂与磷脂的分离，进而提高磷的含量。
本次申报采用的方法为溶剂法及硅胶柱层析法，通过溶剂法可以得到口服级磷脂。
进一步通过硅胶柱层析可以得到注射级磷脂。
2、工艺流程图
3.制备工艺研究
3.1大豆卵磷脂的制备工艺
3.1.1a路线工艺研究
参考文献a路线的流程图如下：
根据流程图及文献数据，采用正交试验对a路线进行最佳工艺筛选。
3.1.1.1a路线乙醇萃取正交试验研究
3.1.1.1.1a路线乙醇萃取正交试验的因素及水平见表8-1
表8-1乙醇萃取工艺考察因数水平表
因素
A（温度）
B（时间）
C（乙醇量）
D（次数）
水平1
50℃
30
1：
1
1
水平2
60℃
60
1：
2
2
水平3
70℃
90
1：
3
3
采用以上因素及水平，按L9（34）进行乙醇萃取试验。
3.1.1.1.2样品的制备
取9份浓缩磷脂，每份50g，以90%乙醇为溶媒，按照正交表所设计的条件进行提取，分别将提取液滤过，合并，浓缩，减压干燥（60℃，真空度为-0.08），得到液状磷脂。
3.1.1.1.3考察指标的测定
以水分、磷含量、丙酮不溶物为考察指标。
3.1.1.1.4试验结果结果见表8-2，直差分析及方差分析见表8-3和表8-4。
表8-2a路线乙醇萃取正交试验结果
试验编号
浓缩磷脂质量（g）
液状磷脂质量（g）
水分（%）
丙酮不溶物（%）
磷含量（%）
1
50.06
6.97
1.87
60.12
2.24
2
50.12
13.99
1.42
57.23
2.44
3
50.09
18.11
1.69
56.55
2.13
4
50.02
19.42
1.16
57.46
2.35
5
50.04
16.25
1.50
62.78
2.27
6
50.11
6.28
1.34
57.24
2.55
7
50.01
11.94
1.73
58.01
2.30
8
50.05
8.29
1.08
56.17
2.13
9
50.08
13.20
1.94
63.52
2.24
表8-3a路线乙醇萃取正交试验直差分析
列号
1
2
3
4
含磷量（g）
试验号
1
1
1
1
1
0.1533
2
1
2
2
2
0.3372
3
1
3
3
3
0.3785
4
2
1
2
3
0.4505
5
2
2
3
1
0.3640
6
2
3
1
2
0.1583
7
3
1
3
2
0.2698
8
3
2
1
3
0.1749
9
3
3
2
1
0.2904
K1
0.28967
0.29124
0.1622
0.2692
K2
0.32427
0.29203
0.3594
0.2551
K3
0.24505
0.27572
0.3374
0.3347
R
0.07921
0.01631
0.1972
0.0796
表8-4a路线乙醇萃取正交试验方差分析
离差来源
平方和
自由度
均方
F值
P值
显著性
因素A
0.009462
2
0.004731
18.6422
P<0.1
因素C
0.070088
2
0.035044
138.0893
P<0.01
**
因素D
0.010810
2
0.005405
21.2973
P<0.05
*
因素B（空白）
0.000508
2
0.000254
F0.10（2，2）=9.0；F0.05（2，2）=19.0；F0.01（2，2）=99.0；
3.1.1.1.5小结
经方差分析，相对于因素B，因素C对提取有非常显著性影响，因素D对提取有显著性影响，因素A对提取的影响不显著。
通过直观分析得到优化的工艺路线为A2B2C3D2即，60℃2倍量乙醇提取3次，每次60。
9批样品的丙酮不溶物含量差距不大。
所以a线路乙醇萃取的最佳工艺为：
60℃用2倍量90%乙醇提取浓缩磷脂3次，每次1小时，合并提取液，减压浓缩，即得液状磷脂。
3.1.1.1.6提取工艺验证
根据a路线乙醇萃取工艺优选结果,连续投料三批,结果见表8-5
表8-5a路线乙醇萃取工艺验证结果
编号
浓缩磷脂量（g）
液状磷脂（g）
水分（%）
丙酮不溶物（%）
磷含量（%）
第一批
50.04
19.88
1.78
62.98
第二批
50.12
20.12
1.91
61.46
第三批
50.06
20.03
1.86
61.54
由表8-15可见，三批结果平行，说明提取工艺条件基本稳定。
3.1.1.2a路线丙酮脱脂正交试验研究
3.1.1.2.1a路线丙酮脱脂正交试验的因素及水平见表8-6
表8-6丙酮脱脂工艺考察因数水平表
因素
A（脱脂温度）
B（提取时间）
C（丙酮量）
D（提取次数）
水平1
20℃
20
1：
1
2
水平2
30℃
30
1：
2
3
水平3
40℃
40
1：
3
4
采用以上因素及水平，按L9（34）进行试验脱脂试验
3.1.1.2.2样品的制备
取浓缩磷脂2000g，以4000乙醇60℃提取3次，每次60，合并提取液，减压浓缩，至珐琅盘中减压干燥（60℃，真空度-0.08）24h，称重。
保存供丙酮脱脂正交工艺用。
取50g液状磷脂，按照按正交试验表所设计的条件，搅拌脱脂，最后一次脱脂完毕进行抽滤，取滤饼，减压干燥（60℃，真空度-0.08）24小时，得到粉末磷脂；前几次脱脂完毕后，均静置5分钟，将上清液倾出，沉淀继续脱脂。
3.1.1.2.3考察指标的测定
以水分、含磷量、丙酮不溶物为考察指标。
3.1.1.2.4试验结果结果见表8-7，直差分析及方差分析见表8-8和表8-9
表8-7a路线丙酮脱脂正交试验结果
试验编号
液状磷脂
卵磷脂质量（g）
水分（%）
丙酮不溶物（%）
磷值（%）
1
50.06
30.60
1.22
81.98
2.41
2
50.12
34.06
1.07
83.72
3.09
3
50.09
30.04
1.43
92.15
3.08
4
50.02
26.43
1.29
89.64
2.76
5
50.04
26.16
1.36
90.28
3.13
6
50.11
34.59
1.51
75.16
2.63
7
50.01
18.18
1.14
90.07
3.13
8
50.05
32.78
1.28
81.22
2.62
9
50.08
32.33
1.62
70.33
2.71
表8-8a路线丙酮脱脂正交试验直差分析
列号
1
2
3
4
含磷量（g）
试验号
1
1
1
1
1
0.72828
2
1
2
2
2
1.042236
3
1
3
3
3
0.913216
4
2
1
2
3
0.718896
5
2
2
3
1
0.808344
6
2
3
1
2
0.895881
7
3
1
3
2
0.561762
8
3
2
1
3
0.849002
9
3
3
2
1
0.863211
K1
0.89458
0.66965
0.82439
0.79995
K2
0.80771
0.89986
0.87478
0.83329
K3
0.75799
0.89077
0.76111
0.82704
R
0.13659
0.00909
0.05039
0.02709
表8-9a路线丙酮脱脂正交试验方差分析
离差来源
平方和
自由度
均方
F值
P值
显著性
因素A
0.028674
2
0.014337
15.2095
P>0.1
因素B
0.101977
2
0.050988
54.0922
P<0.05
*
因素C
0.019466
2
0.009733
10.3252
P>0.1
因素D
0.001885
2
0.000943
F0.10（2，2）=9.0；F0.05（2，2）=19.0；F0.01（2，2）=99.0；
3.1.1.2.5小结
上述方差分析结果表明：
以含磷量为考察指标，相对于因素D，因素A、C无显著性差异（P>0.1），因素B有显著性差异（P<0.05），根据直观分析结果，最佳水提取工艺应为A1B2C2D2。
从丙酮不溶物含量来看，2号样品的丙酮不溶物含量大于90%，符合规定。
结合直差、方差、磷含量来看，最佳工艺定为A1B2C2D2，即，液状磷脂在20℃进行丙酮脱脂试验3次，每次用2倍量的丙酮，抽滤，干燥，得到卵磷脂。
3.1.1.2.6a路线脱脂工艺验证
根据a路线脱脂工艺优选结果，连续投料三批，结果见表8-10
表8-10a路线脱脂工艺验证结果
编号
液状磷脂量（g）
卵磷脂量（g）
水分（%）
丙酮不溶物（%）
磷含量（%）
第一批
50.02
31.16
1.59
94.31
第二批
50.21
30.94
1.47
92.95
第三批
50.05
30.23
1.51
93.68
由表8-19可见，三批结果平行，说明提取工艺条件基本稳定。
结论：
a路线丙酮脱脂最佳工艺为：
液状磷脂在20℃时，用丙酮脱脂3次，每次用2倍量的丙酮，抽滤，干燥，得到卵磷脂。
3.1.1.3a路线最佳工艺确定
以上2组正交试验结果表明a路线的工艺为：
浓缩磷脂60℃时用2倍量90%乙醇3次，每次1小时，合并提取液，减压
升级会员 