布鲁克液质联用操作规程Word文件下载.docx

布鲁克液质联用操作规程Word文件下载.docx

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5．打开质谱仪主机电源（仪器左侧最下方）；

6．启动micrOTOFcontrol控制软件，务必保持仪器一直处在shutdown状态，待真空度达到≤1×

10e-6mbar后，才可切换至standby状态待机；

为了保证良好稳定的实验结果，待真空度下降至10e-7mbar以下后，再operate仪器开始测试。

2.2新建液相方法

打开hystar软件，选择method，然后输入新建方法的名字，点击open，开始方法的新建。

在弹出的对话框中选择edit，然后点击“wizard”进行设置。

液相方法包括梯度、流速、柱温、样品盘温度、时间、进样针吸样速度等，可依次设置即可，全部设置好之后，将。

2.3新建质谱方法

方法一：

在otofcontrol中，打开method，按照自己待检测物的分子量范围及正负偏向性选择合适的质谱方法，小分子有对应的smallmolecular方法，蛋白质组有专门的proteomics方法。

方法二（非专业人员不推荐）：

在otofcontrol中，打开method，选择new，即可新建质谱方法。

可以修改的参数包括以下几个方面：

（1）mode中的Focus为active，linespectracalculation为usesumintensity，ionpolarity为pos或neg，massrange调到待检测物合适的分子量范围。

（2）source中capillarypos：

4500V，neg：

3500。

Divertvalve：

source1-2进质谱；

source1-6为discardtofluid

（3）Tune中collisionRF小分子调到1000-1500，大分子调到2000-2500；

lowmass视目标物分子量大小截留（例如目标分子为500，可调为300，去掉小分子区域的杂峰）。

（4）MS/MS中如果想检测二级，可以勾选autoMS/MS；

precursorions中cycletime正常下为3s

（5）chromatogram中选择BPC

根据待检测物的分子量大小和正负偏向性，先在软件自带的质谱方法中选择相应的方法，再在此方法的基础上进行优化及分段（如含盐的样品截掉前2-5分钟，1-6waste）。

仪器在操作状态下<

Operation>

稳定20-30分钟后即可开始仪器质量准确度校正。

2.4仪器质量准确度校正

2.2.1.药物和酶解多肽样品，选用甲酸钠溶液作为校正标准液。

覆盖质量范围m/z90-1200；

校正模式选用<

EnhancedQuadratic>

。

2.2.2.蛋白质类样品选用三氟乙酸钠溶液作为校正标准液。

覆盖质量范围m/z200-2000；

Quadratic>

2.2.3.校正液配制

甲酸钠校正液：

溶剂：

异丙醇:

水溶液=1:

1并含有0.2%甲酸

10mM甲酸钠校正液：

1ml1MNaOH+99ml溶剂

三氟乙酸钠校正液：

50%乙氰含有0.1%三氟乙酸钠（TFA）

2.2.3.<

Calibration>

校正界面

3.测样方式

3.1直接进样测定

对于标准品或相对较纯或混合组分较少并且不含盐的药物样品，如果仅需要进行鉴定，可以采用直接进样方法测定。

3.1.1样品用标准溶剂（50%H2O，50%乙腈或甲醇，0.1%甲酸）溶解或稀释

3.1.2将配好的样品或标准品吸入进样器（针），将进样器（针）放置于进样泵中。

注意：

进样器（针）内不能有气泡

3.1.3将进样器（针）直接与离子源连接（如图）

注意毛细管与注射器之间需紧密连接。

进样器内不能有气泡

3.1.4设置进样泵的流速为120～180微升/小时。

3.2液质联用（LC/MS）测定样品

采用常规液相色谱系统（色谱柱2.1x150mm；

流速200-300uL/min）。

启动Hystar软件，打开hystar软件，在sampletable中选择相应的文件并打开，然后复制一个之前做过的样品，对复制后的新的一行进行文件名，存储路径和液相质谱方法的修改（改完之后再检查一遍）。

注：

如果是新建sampletable，可以打开一个新的复制一行粘贴到新建里，因为新建的自动进样的不对。

4.输入下列参考参数

4.1.直接进样：

（低流速）大约在120－180微升/小时

离子源：

Nebulizer0.4bar

DryGas4.0L/min

DryTemp180℃

4.2.药物小分子样品液质联用：

平均流速大约在200-300uL/min

离子源：

Nebulizer0.8bar

DryGas6-8L/min

4.3.酶解多肽样品液质联用：

平均流速大约在200-300nL/min

DryGas3.0L/min

DryTemp160℃

5.手动获得一个MS/MS图谱

打开MS/MS界面，选择MRM->

输入<

ParentCondition>

列表，激活ScanMode。

6.后期处理

6.1打开分析文件

6.1.1.在任务栏中或者在工具栏中选择按钮均可切换到数据分析程序（DataAnalysis），读取所获得的数据文件

6.1.2.读取数据文件被可选择File菜单下的open对话框，所需要的显示窗口将被程序自动打开。

6.1.3.在文件对话框中选择目录d:

\data\start用鼠标键双击test0000.d，test0001.d，test0002.d来打开数据文件；

按住shift键来标记所有文件并点击回车键来一次全部打开所选文件。

6.1.4.质谱图与色谱图按文件名读取并显示在File菜单下。

在分析清单窗口下选择所需的文件，选择后图谱在各自的窗口下显示。

6.2质谱图

6.2.1.在分析清单窗口下选择的结果在质谱图窗口显示。

6.2.2.通过Masslist参数对话框改变离子检测参数

6.2.3.下列对话框被用来在图谱中设置新的离子检测参数

6.2.4.对下一步的Method参数设置参见BrukeDaltonicsDataAnalysisReferenceManual

6.3色谱数据

6.3.1.完整色谱图

1.读取数据文件（e.g.test0001.d），显示TIC（TotalIonChromatogram）

2.读取某一个离子的色谱数据可以打开EditChromatogramTraces对话框

3.通过Edit菜单下选择Chromatogram选项来打开Traces对话框

如下图所示，选择质荷比为622的离子。

6.3.2.获得各组分的质谱图（Compoundspectra）

使用Find–>

Compound功能键，快速有效的产生各组分的质谱图；

1）功能键<

Compounds-Chromatogram>

产生色谱分离过程中所有组分的质

谱图。

打开CompoundSpectra窗口时，可以看到各组分的质谱图。

2）功能键<

Compounds-MS（n）>

产生所有采用MS（n）步骤采集的图谱。

3）<

Compounds-AutoMS（n）>

产生MS-和MS/MS图

7.报告

有几种可用的报告形式来输出数据，一种报告仅有质谱图，另一种报告则只有色

谱图，还有一种两种图谱都保留。

7.1.直接打印：

打印键；

或者打开File菜单，选择Print；

或者通过打印

预览打印，选择打印预览键或在File菜单选择PrintPreview，然后在打印预

览窗口下选择打印键

7.1.1报告内容下拉菜单包含了所有可选的报告内容

7.1.2.获得参数报告

选择此内容的报告中包含了获得所选分析结果的参数

7.1.3.显示报告

选择此内容将完全按照显示窗口打印（包括色谱窗口、质谱显示窗口、混合

物质谱窗口、质谱窗口）

7.2质谱图

报告内容中几种可选的质谱图形式

7.2.1.质谱清单报告

报告中含所选的质谱图的peak清单

7.2.2.质谱图报告

报告中含所选的质谱图报告

7.3色谱图

报告内容中几种可选的色谱图形式

7.3.1色谱清单报告

报告中含所选的色谱图的色谱峰清单

7.3.2色谱图报告

报告中含所选质谱图的报告

7.3.3混合质谱图报告

报告中含所选色谱图的混合质谱报告

DataAnalysis软件使用

峰面积积分

化合物搜索鉴定

smartformulamanually

selectthemolecularthatyouwanted

findthechemicalformulathatyouwantedandrightclickthensendittocompoundcrawler

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