病理技术专业知识1.docx

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病理技术专业知识1

（一）单纯固定液

甲醛：

1．浓度：

40%，气体

2．渗透力强，固定均匀，组织收缩小，

3．不能使白蛋白和核蛋白沉淀

4．保存脂类，必须用冷冻切片。

是糖的保护剂

5．可固定高尔基体，线粒体

重铬酸钾

1.浓度：

1%-3%水溶液，有毒，橘红色结晶

2.穿透速度快，几乎不收缩，经乙醇脱水后明显收缩，

3.未酸化的重铬酸钾不能使蛋白质沉淀，但可使蛋白质变为脂溶剂。

酸化后可使蛋白质沉淀，此时染色体可被保存，但线粒体破坏。

4.固定高尔基体和线粒体有良好效果。

5.酸性染料着色好，碱性染料着色差

6.固定的组织需经流水冲洗12-24h，或用亚硫酸盐洗涤。

苦味酸

1.黄色结晶体，是一种强酸，易燃易爆，配成饱和溶液储藏

2.穿透慢，组织收缩明显，无明显硬化。

3.能沉淀一切蛋白质

4．对脂肪和类脂无固定作用。

5.可软化皮肤和火棉胶，不宜用火棉胶包埋

6.固定时间不宜超过24h，

7.固定的组织应尽快放入70%乙醇，滴加饱和碳酸锂或浓氨水，有助于除去苦味酸固定产生的黄色。

升汞

1.浓度为5%-7%的水溶液，针状结晶

2．穿透力低，只宜固定薄片组织，单独应用组织收缩明显

3,对蛋白质有固定作用，

4.对类脂和糖类无固定作用

5.临用时加冰醋酸

醋酸

1.刺激性气味的无色液体，低于15℃为冰醋酸

5%的醋酸PH为2-8，可抑制细菌和酶的活性，可防止自溶。

2.穿透力强

3不能沉淀白蛋白，球蛋白，但能沉淀核蛋白

4不能固定脂肪和酯，不能保存糖

5.固定线粒体和高尔基复合体不能用高浓度的醋酸，可较好的保存染色体

6,缺点是组织膨胀明显，尤其对于胶原纤维和纤维蛋白

铬酸

1.为三氧化铬的水溶液，浓度0.5%-1%，强氧化剂，不能与乙醇，甲醛等混合

2穿透力弱，一般组织需固定12-24h，固定的组织有收缩，

3能沉淀蛋白质，核蛋白固定良好。

4对脂肪无固定作用

5固定线粒体和高尔基复合体

6.宜避光保存，以防蛋白质溶解。

7.必须彻底流水冲洗（≥24h）。

锇酸（四氧化锇）

1.淡黄色结晶，剧毒，浓度1%-2%，强氧化剂，不能与乙醇，甲醛等混合

2.渗透力极弱，易使组织变硬，延长固定时间，组织的脆性增加，对染色不利。

3.固定均匀，不沉淀蛋白质。

4．为脂类固定剂

5.适用于线粒体和质网的固定

6.为电镜研究的必须固定剂。

7.固定目的不同，配方和浓度根据需要改变

8.固定后对碱性染料亲和力强，细胞核的染色效果好

9.应在临用前前几天配制以保证充分溶解。

丙酮

1．易挥发，易燃的无色液体，可与水，醇，氯仿，醚混合

2.渗透力强，对核的固定差

3.可使蛋白质沉淀

4.作用基本与乙醇相同，但对糖原无固定作用

5．广泛用于酶组织化学中各种酶的固定

乙醇

1.无色液体，，还原剂，可与水无限相溶，有固定兼脱水作用

用于固定的浓度为80%-95%

2．渗透力弱，固定速度较慢，易使组织变脆，无水乙醇固定时，穿透速度快，渗透力差，使组织收缩

3.，能沉淀白蛋白，球蛋白，核蛋白

4.用于糖原的固定

5.50%以上乙醇可溶解脂肪和类脂体，并可溶解血红蛋白，对其他色素也有破坏。

三氯醋酸

1.为无色易潮解的结晶体，水溶液为强酸性，易溶于醇和醚，应密封保存

2.也是一种良好的脱钙剂

（二）混合固定液

B-5固定液（醋酸钠-升汞-甲醛）

1．多用于固定淋巴组织，

2.染色前应进行脱汞处理

3.配方：

无水醋酸钠1.25g，升汞6g，甲醛10ml，蒸馏水90ml.

Bouin液

1.有一定毒性，应避免吸入或与皮肤接触

2.固定液偏酸，对抗原有一定损害，使组织收缩，不适宜标本的长期保存

3.固定效果好，组织细胞结构完整。

细胞核着色鲜明，细胞质着色较差。

4.对脂肪固定效果好，尤适用于含脂肪的淋巴结，乳腺组织和脂肪瘤标本

5.适用于结缔组织染色，尤其是三色染色更为理想。

6.配方：

饱和苦味酸水溶液：

甲醛水溶液：

冰醋酸=15：

5:

：

1

Carnoy液

1．有防止乙醇的硬化和收缩作用，增加渗透力，外膜致密的组织可用其固定

2.固定速度快，3mm厚组织块1h即可固定，大块组织不超过4h。

3，固定细胞质和细胞核，对于染色体固定佳，显示DNA，RNA效果好。

4.常用于糖原和尼氏体的固定

5．不能保存脂类，不适用脂肪染色。

6.配方：

冰醋酸10ml，氯仿30ml，无水乙醇60ml

Muller液

1.作用缓慢，固定均匀，组织收缩小

2.多用于媒染和硬化神经组织

3.固定过程中，需常更换新鲜的液体

4.配方：

重铬酸钾2-2.5g，硫酸钠1.0g，蒸馏水100ml

Orth液

1.渗透力强，组织收缩小

2.应临时配置，在暗处固定，固定24h左右，固定液变为黑色时不可用，固定后流水冲洗12-24h。

3.固定胚胎组织，神经组织。

脂肪组织

4.配方：

重铬酸钾2.5g，硫酸钠1.0g，蒸馏水100ml，37%-40%的甲醛10ml（用时加入）

PFG液

1.适用于多种肽类抗原的固定，多用于免疫电镜研究

2.对细胞抗原性和结构保存好

3.配方：

对苯醌20g，多聚甲醛15g，25%戊二醛40ml，0.1mol/L二甲砷酸钠缓冲液1000ml。

PLP和PLPD液

1.均含过碘酸盐

2.对细胞抗原性和结构保存好，适用于富含糖类组织的固定

Rossman液

1.对糖原固定好，固定12-24h，用95%的乙醇洗

2.配方：

无水乙醇苦味酸饱和液90ml，甲醛10ml

Zenker液

1．用于固定多种组织，对于病毒包涵体固定效果也较好

2.使细胞核和细胞质染色清晰，常用于三色染色，对免疫球蛋白染色最好

3.不适用含血量较多的标本，如充血的脾脏和肺梗死等标本

4.不能用金属容器盛放，且固定后不能用金属镊夹取。

4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液

1.适用于光镜免疫组织化学法，

2.动物先用此液灌注固定，取材后再用该液浸泡固定

3.可用于标本的较长时间的保存

4%多聚甲醛-磷酸二钠/氢氧化钠

1.适用于光镜和电镜免疫组织化学法，

2.用于免疫电镜时，应加入新鲜配置的戊二醛。

使其终浓度为0.5-1%

3.性质温和，可长期保存组织。

4．配置后PH值应调至7.2-7.4,4保存

甲醛-钙液

.适用于固定脂肪组织和组织化学染色

乙醇-甲醛液

有脱水作用，对皮下组织中肥大细胞的固定好

乙醚-乙醇液

渗透性强，固定效果好，用于细胞涂片的固定。

去除甲醛色素：

Verocay液

脱汞盐结晶：

Lugol液

脱黑色素：

0.25%高锰酸钾

蓝化作用：

稀氨水

组织的脱水

（一）乙醇

乙醇脱水的浓度：

70%—80%—90%—95%—100%

进行糖原和尿酸盐结晶染色的标本应直接用无水乙醇固定，更换一次无水乙醇脱水即可。

（二）丙酮

与乙醇作用相似，但对组织块的收缩作用比乙醇更严重，快速脱水或固定兼脱水时应用，脱水时间为1-3h.

丙酮可作为染色后的脱水剂，用于DNA和RNA染色。

（三）异丙醇

是乙醇的良好替代品，不含水，可代替无水乙醇使用，对火棉胶和染料不溶，因此不能用于火棉胶包埋和染料配制。

（四）正丁醇和叔丁醇（电镜标本制作时常用作中间脱水剂。

）

正丁醇：

无色液体，脱水能力较弱，可与水，乙醇和石蜡混合，因此，这种这种脱水的组织块可直接浸蜡包埋，

叔丁醇：

无毒，可与水，乙醇和二甲苯混合，与正丁醇相比，它不易使组织收缩或变硬，而且脱水后可不经透明直接浸蜡，

（五）还氧已环

还氧已环能于水和乙醇混合，也能溶解石蜡，可代替乙醇进行脱水，也可代替二甲苯进行透明，不引起组织收缩和硬化，用于制备植物标本较好，易挥发，价格昂贵。

（六）四氢呋喃

易于水，乙醇，丙醇和苯类混溶，对组织渗透快，易挥发，无毒，可用作封片溶剂，对染料不溶。

（七）环己酮

环己酮无毒，与苯，二甲苯，氯仿和石蜡混合，可代替无水乙醇脱水后直接浸蜡，组织块不会变硬。

（八）松脂醇

可取代无水乙醇用作脱水剂和随后的浸透与包埋。

树脂包埋法适用于：

不脱钙骨髓活检组织，肝、肾穿刺活检和淋巴结组织等。

常用的特殊染色技术

一结缔组织染色

Mallory三色Masson三色

胶原纤维，网状纤维蓝色绿色

软骨，粘液，淀粉样淡蓝色

神经胶质纤维，肌纤维红色红色

髓鞘，红细胞橘红色橘红色

显示胶原纤维，网状纤维，弹性纤维三联染色

胶原纤维：

红，

网状纤维：

黑，

弹性纤维：

绿色

肌肉和红细胞：

淡黄色

二胶原纤维染色

（一）显示胶原纤维，细胞，肌肉的染色法

1试剂：

Ponceau（丽春红）染色液：

丽春红水溶液10-15ml，

苦味酸饱和水溶液85-90ml

Victoriablue（维多利亚蓝）：

维多利亚蓝，70%乙醇

2结果：

胶原纤维：

红，

细胞核和血细胞：

绿色

肌肉：

黄色

3注意事项：

①：

Ponceau染色后。

不能与水接触，直接用无水乙醇冲洗脱水

②：

胶原纤维切片的厚度需6um,

③:

Victoriablue染色液应盛染色缸，进行染色。

（二）天狼星红苦味酸染色法

1.试剂：

天狼星红饱和苦味酸液：

0.5%天狼星红10ml，苦味酸饱和水溶液,90ml

天青石蓝液：

天青石兰，铁明矾，蒸馏水，甘油，浓盐酸

2结果：

胶原纤维：

红，

细胞核和血细胞：

绿色

其他：

黄色

3注意事项：

①：

细胞核复染可以用Harris木精淡染

②：

必须用偏光显微镜观察

三网状纤维染色

（一）Gomori银染色法

1.结果：

网状纤维：

黑色

胶原纤维：

红，

背景：

黄色

3注意事项：

①氨性银溶液：

必须器皿洗干净，滴加氨水不能过量，冰箱保存

②氧化液存放时间不能过长，以免失去氧化作用

③丽春红复染用滴染方便，无水乙醇冲洗要倾斜

（二）James染色法

1.结果：

网状纤维：

黑色

胶原纤维：

红，

背景：

淡黄色

3注意事项：

①5%硝酸银使用时不能滴染

②二氨银配制时，氨水要一滴一滴的加，以免浓氨水加的太多

③甲醛液要新配制

四：

弹性纤维染色

（一）维多利亚蓝染色

结果：

弹力纤维：

蓝色

细胞核：

红色

注意事项：

配制的溶液放置2周成熟后使用

（二）Gomori醛复红染色法

1试剂：

醛复红染液：

碱性复红0.5g，浓盐酸1ml，70%乙醇100ml，三聚乙醛1ml

室温下静置1-2日，待变为紫色即成熟，于冰箱保存备用。

橘黄G染液：

2：

对特殊的蛋白质及含硫酸根的粘多糖有很强的亲和力，和弹力纤维结合很紧。

对肥大细胞颗粒，脂褐素，HBsAg,胃主细胞，胰岛的β细胞，脑垂体的嗜碱性细胞也能很好着色。

3固定液：

以甲醛生理盐水固定的染色效果最佳。

结果：

弹力纤维深紫色

粘液紫色

五显示弹性，胶原纤维的双重组合染色

结果：

弹力纤维：

蓝绿色

胶原纤维：

红色

背景：

淡黄色

注意事项：

维多利亚蓝液可每次反复使用，溶液在室温中保存可用数年。

六肌肉组织染色

（一）横纹肌组织染色

Mallory磷钨酸木精染色法（PTAH）

1.结果：

横纹肌蓝色

胶原纤维，网状纤维：

黄色或玫瑰红色

心肌（缺血缺氧）：

紫蓝色或棕黄色

2．注意事项：

①．此液经处理数周后至数月才成熟，置冰箱保存可使用多年时间。

②．可加入0.15高锰酸钾，加