选修1资料.doc
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生物选修1资料编写：
生物技术实践
一、考纲要求
1、DNA的粗提取与鉴定
2、微生物的利用
（1）微生物的分离和培养
（2）某种微生物数量的测定（3）培养基对微生物的选择作用
（4）利用微生物发酵来生产特定的产物以及微生物在其他方面的应用
3、酶的应用
（1）酶活力测定的一般原理和方法
（2）酶在食品制造和洗涤等方面的应用
4、生物技术在食品加工及其他方面的应用
（1）植物的组织培养
（2）蛋白质的提取和分离（3）PCR技术的基本操作和应用
二、命题方向
选修一模块的意义不仅在于培养科学探究能力，还让学生了解生物技术在社会生活、生产、发展中的应用。
结合《课标》和《考纲》来分析，考虑到选修一模块归到实验部分来考查，所以这一模块的备考重点应放在实验基本原理、实验主要流程、基本方法、规范操作、结果评价上，以及主要的概念、术语、生物技术的实际应用方面。
备考过程还要注间兼顾本模块和其他模块相通的、联系比较密切的内容，如植物的组织培养、PCR技术、酶活性的测定与酶的实际应用、培养基、无菌操作等。
在培养实际操作能力时注意操作的目的和原理、操作对象和工具的性质、操作的顺序和要领、观察与分析效果等方面去指导和规范操作。
专题一微生物的利用
课题1微生物的培养
一、培养基
1、概念：
根据微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质
2、营养要求：
水、碳源、氮源、无机盐、生长因子（蛋白胨、牛肉膏分别主工为微生物提供什么）
3、种类：
（1）按物理性质划分
种类
是否含琼脂
固体培养基
是
液体培养基
否
菌落：
是由单个细菌（或其他微生物）细胞或一堆同种细胞在适宜固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度，形成肉眼可见的子细胞群落。
不同微生物的菌落特征（形状、大小、隆起程度和颜色等）不同。
（2）按培养基用途划分
种类
用途
原理
制备方法
选择培养基
从众多的微生物分离所需的微生物
依据某些微生物对某些物质的抗性而设计
培养基中加入某种化学物质
鉴别培养基
鉴别不同种类的微生物
依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计
培养基中加入某种指示剂或化学药品
二、无菌技术－－目的是防止杂菌污染
消毒：
使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部的一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。
常用的消毒方法有：
Ⅰ、煮沸消毒法Ⅱ、巴氏消毒法：
相对低温加热较长时间
说明：
该方法既可杀死病菌又能保持物营养物质和风味不变，常用于食品消毒。
Ⅲ、酒精消毒（70%酒精）Ⅳ、紫外线消毒Ⅴ、其他化学消毒剂消毒
灭菌：
使用强烈的理化因素杀死物体内所有的微生物，包括芽孢和孢子。
灭菌种类
主要方法
应用范围
灼烧灭菌
酒精灯火焰灼烧
接种工具如接种环、接种针或其他金属用具、接种过程中试管口等
干热灭菌
电热鼓风干燥箱160－170oC加热1－2h
玻璃器皿（如吸管、培养皿等）、金属用具等凡不适宜用其他方法灭菌而又能耐高温的物品
高压蒸汽灭菌
121oC维持15－30min
培养基及多种器材物品
三、实验操作（大肠杆菌的分离与纯化操作流程及分析）
Ⅰ、稀释涂布平板法操作：
【巩固练习】
1、有关倒平板操作错误的是
A、将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上 B、使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰
C、将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌面上 D、等待平板冷却凝固后需要倒过来放置
2、有关稀释涂布平板法，叙述错误的是
A、首先将菌悬液进行一系列的梯度稀释
B、然后将不同稀释度的菌悬液分别涂布到琼脂固体培养基的表面
C、适宜条件下培养 D、结果都可在培养基表面形成单个菌落
3、关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是
A、操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 B、将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯
C、待培养基冷却至50oC左右进行倒平板D、待平板冷却凝固约5－10分钟后将平板倒过来放置
4、获得纯净培养物的关键是
A、将用于微生物培养的器皿、接种工具、培养基等进行灭菌 B、接种纯种细菌
C、适宜环境条件下培养 D、防止外来杂菌的入侵
5、下列关于灭菌的说法中，不正确的是
A、灭菌是杀死一定环境中所有微生物的细胞，不包括芽孢和孢子
B、对不同的生物材料，应采取不同的灭菌方法
C、培养基一般采用高压蒸汽灭菌法 D、高压蒸汽灭菌法最终使菌体蛋白质凝固变性
课题2微生物的分离和计数
一、微生物数量的测定
1、活菌计数法（稀释涂布平板法）
（1）依据：
当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约有多少个活菌。
（2）统计活菌的数目：
挑选菌落数在30－300的平板进行计数。
注：
统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。
2、显微镜直接计数法（抽样检测法）
（1）原理：
利用特定的血球计数板或血细胞计数板，在显微镜下计数一定容积样品中微生物数量。
（2）缺点：
不能区分死菌和活菌
二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
1、实验原理：
（1）用以尿素作为唯一碳源的选择培养基筛选出能分解尿素的细菌
（2）细菌中的脲酶将尿素分解成氨，氨使培养基碱性增强，pH升高。
加入酚红指示剂，则会变红
2、实验流程及分析
注意：
1、样品稀释倍数依计数微生物种类的不同而有差异，一般细菌:
104、105、106倍稀释；放线菌：
103、104、105倍稀释；真菌：
102、103、104倍稀释。
2、培养时间和温度依培养微生物种类的不同而有差异，一般细菌：
30～37℃培养1～2d；放线菌：
25～28℃培养5～7d；霉菌：
25～28℃培养3～4d。
三、分解纤维素的微生物的分离
1、实验原理：
（1）刚果红与纤维素等多糖结合形成红色复合物，纤维素被分解后的产物纤维二糖和葡萄糖均不能和刚果红形成红色复合物。
（2）培养基中含有刚果红时，被分解的纤维素周围会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈
2、实验流程及分析
【巩固练习】
1、下表表示在不同培养基中细菌的生长繁殖情况（A、B、C、H、I、J、K、M为培养基的成分，“+”表示生长，“－”表示不生长），请分析下列哪种物质细菌不能合成
培养基成分
A、B、C
A、B、C、I、M
A、B、C、H、M
A、B、C、J、M
A、B、C、I、K
A、B、C、H、J
A、B、C、K、M
生长状态
－
－
+
－
+
－
+
A、H B、I C、K D、M
2、在做土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验时，甲组实验用氮源只含尿素的培养基，乙组实验用氮源除尿素外还含硝酸盐的培养基，其他成分都相同，在相同条件下操作，培养与观察，则乙组实验属于
A、空白对照 B、标准对照 C、相互对照 D、条件对照
3、用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是选择土壤中分解尿素的生物所需氮源为
A、硝酸 B、氨 C、尿素 D、蛋白胨
4、在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应稀释倍数为106的培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学选择出大约20个菌落。
A同学的结果产生原因可能是：
采用的土样不同
培养基跑被污染操作出现失误④没有设置对照
A、 B、④ C、④ D、④
5、分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求
加尿素不加尿素加琼脂④不加琼脂⑤加葡萄糖⑥不加葡萄糖⑦加硝酸盐⑧不加硝酸盐
A、⑤⑦ B、②④⑥⑧ C、①③⑤⑧ D、①④⑥⑦
6、要从多种细菌中分离某种细菌，培养基要用
A、加入青毒素的培养基 B、固体培养基 C、加入伊红－美蓝 D、液体培养基
7、用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目上，其结果与实际值相比
A、比实际值高 B、比实际值低 C、和实际值可能高也可能低 D、和实际值一致
8、关于测定土壤中细菌的数量的叙述，正确的是
A、一般选用103－107倍稀释液分别涂布 B、测定放线菌的数量，一般选用103、104、105
C、测定真菌的数量，一般选用103、104、105倍稀释
D、当第一次测量某种细菌的数量时，可以将101－107倍的稀释液分别涂布到平板上培养
9、如下表所示为某微生物培养基的配方，请回答：
成分
含量
成分
含量
NaNO3
3g
FeSO4
0.01g
K2HPO4
1g
（CH2O）
30g
琼脂
15g
H2O
1000ml
MgSO4·7H2O
0.5g
青霉素
0.1万单位
（1）不同的培养基一般都含有、、
、等营养要素，另外还要有适宜的外界条件，如、
、。
（2）依物理性质，该培养基属于培养基；依用途划分，则属于培养基。
（3）该培养基中的碳源是，不论何种培养基，在各成分都溶化后分装前，要进行的是。
（4）若用该培养基培养纤维素分解菌，就除去的物质是，应加入的物质是
，为检测纤维素分解菌的存在也否还应加入，
将出现。
答案：
（1）水无机盐碳源氮源适宜温度PH氧气的有无
（2）固体选择（3）先调整PH
（4）青霉素和（CH2O）纤维素粉刚果红透明圈
专题二 酶的应用
一、酶活力测定的一般原理和方法
１、酶的活性是指酶催化一定化学反应的能力。
酶活性的高低可以用在一定条件下，酶所催化的某一化学反应的速率来表示。
反应速率用单位时间、单位体积中反应物的减少量或产物的增加量来表示。
２、影响酶活性的因素：
温度、PH值、抑制剂等
二、酶在食品制造和洗涤等方面的应用
１、果胶酶：
能够分解果胶，瓦解植物的细胞壁和胞间层，使果汁榨取变得容易。
而果胶酶是一类酶的总称，包括多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶、果胶酯酶等。
２、加酶洗衣粉是指含有酶制剂的洗衣粉，目前常用的酶制剂有四类：
蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶。
３、普通洗衣粉含有磷，含磷污水大量排放会造成水体富营养化。
三、探究在什么温度和PH的条件下果胶酶活性最大
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