微免实验知识点整理xyt汇编.docx

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微免实验知识点整理xyt汇编

微免实验考试整理

红色：

填空黄色：

重点

（一）实验一

步骤：

1、洗手→消毒 → 扎手指（一针见血）

2、一滴抗凝剂 →双凹片 →1滴血，用针混匀

3、点酒精灯→ 接种环烧3次→ 取3～4环菌液 → 加入血中用接种环混匀→ 温育（37度）30分钟→推片（慢、厚）  自然干燥

4、加瑞氏染液2滴20秒→ 加缓冲液4滴（染液与缓冲液比为1:

2）→ 混匀 → 染色10分钟→ 冲洗 → 吸干 → 油镜观察

示教片：

①大吞噬现象要认识“巨噬细胞”         

②小吞噬现象主要认识“中性粒细胞”（马蹄状形）

吞噬功能的测定计数方法：

吞噬百分率:

计数100个中性粒细胞中具有吞噬作用的细胞数,即为吞噬百分率。

吞噬指数：

观察100个中性粒细胞，计数被吞噬的细菌总数，求平均每个中性粒细胞吞噬的细菌数即为吞噬指数。

①  淋巴细胞转化试验（原理、分型、意义）图片

原理：

T淋巴细胞可以在分裂剂的刺激下，向母细胞转化。

促分裂剂能选择性地激发T淋巴细胞合成DNA与细胞分裂。

转化百分率正常值为70%左右

分裂相：

即染色体型

母细胞：

较小淋巴细胞大4-5倍；核质疏松呈网状结构，有1-3个核仁；核周透明区；胞浆嗜碱性，有空泡

过渡型：

较小淋巴细胞略大；核质略疏松；着色较淡

小淋巴细胞：

核质致密；着色深；胞浆少

意义：

体外淋巴细胞转化反应，可为测定机体细胞免疫状态的指标之一。

②E玫瑰花环实验（原理、判定结果、意义）图片

1、原理和意义：

T细胞表面有绵羊红细胞受体，可在自然情况下与绵羊红细胞结合，形成E玫瑰花环，由此可区分T淋巴细胞与B淋巴细胞

判定结果：

凡是淋巴细胞周围围绕4个以上绵羊红细胞者为阳性

E花环形式率=E阳性细胞/（E阴性淋巴细胞+E阳性细胞）x100%

正常值40~70%

（二）实验二

血清学反应概念、特点、影响因素、分类

1、基础：

 抗原决定簇——抗体的互补决定区

2、特点：

 特异性、可逆性、 比例性、阶段性

3、抗原抗体反应因素：

 电解质、温度、酸碱度

4、凝集反应、沉淀反应、免疫标记技术

I凝集反应：

（原理、种类）

凝集效价：

概念：

抗原+抗体=凝集团块

（1）直接凝集：

颗粒性抗原+抗体=凝集团块

分为 玻片凝集反应、试管凝集反应

（2）间接凝集：

可溶性抗原包被于载体+抗体=凝集团块

根据载体种类不同，分别称为间接血凝、间接乳凝、间接炭凝

（3）反向间接凝集：

抗体包被于载体+抗原 =凝集团块

（4）协同凝集：

抗体结合金葡菌SPA+抗原=凝集团块

II沉淀反应：

（原理、四种类型特点）

概念：

可溶性抗原与相应抗体在适当情况下（有适量电解质存在、抗原抗体二者比例适当）可形成肉眼可见的沉淀物或者沉淀线，称为沉淀反应。

可溶性抗原+抗体=沉淀物

1单向琼脂扩散

单向琼脂扩散试验是一种定量试验。

将一定量已知抗体混于琼脂中，制板，在适当位置打孔，将抗原加入孔中扩散，与板中抗体相遇，在比例合适处呈现白色沉淀环，环的直径与抗原含量成正比。

意义：

主要用于测定血清中各种Ig和补体成分的含量

②双向琼脂扩散：

定性试验，在琼脂板上打孔，把抗原和抗体分别加到相应孔中，二者自由向四周扩散，在比例合适处形成沉淀线。

若同时含有若干对抗原抗体系统，可出现多条沉淀线。

意义：

用于分析鉴定标本中多种抗原成分（抗原、抗体同时扩散，自由、定向）

缺点：

所需时间长，不够敏感。

3对流免疫电泳：

在相应抗原抗体孔之间可见白色沉淀线。

打孔：

金属打孔器打两排孔，抗原孔与抗体孔间距离为4毫米至5毫米。

加样：

抗AFP血清加于抗体孔内；病人血清、AFP阳性血清、阴性对照血清分别加于抗原孔内。

电泳：

将琼脂板置电泳槽，抗原孔置阴极端。

板两端分别用湿纱布与缓冲液相连，通电20分钟。

观察：

在相应抗原、抗体孔间出现沉淀线。

④火箭电泳：

抗原定量试验（抗体琼脂板、抗原扩散（自由、定向）

将一定量已知抗体混于琼脂中，制板，在板的一端打一排小孔，加入待检样品，置于阴极端进行电泳。

抗原在泳动过程中与抗体在比例合适部位形成锥形沉淀峰，状如火箭，称火箭电泳。

沉淀峰的高低与抗原的浓度成正比。

敏感度与单扩相仿，但需时较短。

III直接凝集反应—拨片凝集

 （三）实验三

①补体结合实验（简单了解）

方法：

待检系统：

Ag（未知）+Ab（已知）+补体

指示系统：

绵羊红细胞（Ag）＋溶血素（Ab）

结果：

溶血——阴性

不溶血——阳性

②中和反应实验：

（病毒中和实验、毒素中和实验）

略

③免疫标记技术：

（原理、常用标记物）

概念：

 将已知抗体标记上显示性物质，通过检测标记物，反映有无抗原抗体反应，从而间接测出微量的抗原或抗体。

原理：

免疫标记技术是在免疫学、生物化学及显微镜术进展的基础上发展起来的一项技术，具有特异、敏感、快速的特点。

将荧光色素（常用异硫氰基荧光黄，简称FITC）与特异性抗体（或抗原）以共价键基团牢固结合，但不影响该血清抗体的免疫特性。

这种荧光标记的抗原抗体复合物，可通过荧光灯源中产生的紫外光或蓝紫光激发产生荧光，而从荧光显微镜加以观察。

常用的标记物有：

酶、荧光素、放射性同位素、胶体金、生物素、电子致密物等。

④ELISA（酶联免疫吸附试验常用的方法及途径）

原理：

 把抗原抗体的免疫反应和酶（主要有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等）的高效催化作用有机地结合起来，并仍保持其免疫和酶的活性。

结合在抗原抗体复合物上的酶在遇到相应的底物时，可以催化底物水解、氧化或还原，从而产生有色的物质。

颜色反应的深浅与抗体或抗原的量成正比。

方法：

 主要有间接法（用于测抗体）和双抗体夹心法（用于测抗原）。

实验：

（四）实验四

革兰染色（方法、意义、结果判定）

意义：

对细菌鉴别、选择抗菌药物、研究细菌致病性等有重要意义。

原理：

1884年Gram创建，是细菌学中最为经典的染色法。

与细菌细胞壁有关，尚未完全阐明。

阴性—红色  阳性—蓝色

细菌学总论

细菌是一类具有细胞壁的单细胞微生物，形体微小，一般以微米（µm）作为测量单位。

细菌按其外型可分为球菌、杆菌、螺型菌三大类。

不同种类的细菌大小不一，大多数球菌直径约1µm，杆菌长2∼5µm，宽0.3∼1µm。

细菌的特殊结构（特点及意义）：

荚膜、鞭毛、芽孢、菌毛

①细菌生长现象

（1）液体培养基

 沉淀生长、混浊生长、表面生长

（2）半固体培养基（0.1%~0.3%琼脂粉）

 混浊生长、线状生长

（3）固体培养基（1.4%~2%琼脂粉）

 菌落、菌苔

②细菌变异

一、菌落变异（S→R变异）

    S型菌落（Smooth）光滑菌落—表面光滑有光泽，边缘整齐。

    R型菌落（Rough）粗糙菌落—表面粗糙而暗淡，边缘不整齐。

    菌落变异是由于菌体本身起变化。

一般光滑的细菌有毒力；粗糙的细菌没有毒力或毒力减退。

二、鞭毛变异（H→O变异）

细菌的鞭毛在某些情况下可以消失而变成没有鞭毛的细菌。

③细菌色素

④细菌生化反应（分类、指示剂、变色）

消毒灭菌器材（看书）

细菌的划线分离和药敏实验

药敏实验结果判断：

用精确度为1mm的游标卡尺量取抑菌圈直径。

根据NCCLS标准，作出“敏感”、“耐药”和“中介”的判断。

药敏实验意义：

①可预测抗菌药物治疗的效果，“敏感”治疗可能有

效；“耐药”可能失败；

②指导临床医生合理选择抗生素，AST的结果为“耐

药”，则应更换药物；

③提供所选择药物的依据；

④监测耐药性，分析耐药菌变迁，掌握耐药菌感染

病流行病学，控制和预防耐药菌感染发生和流行

（五）实验五

1、常见化脓性球菌的形态及其培养特性

①化脓性球菌：

葡萄球菌（左上）、链球菌（右上）、肺炎球菌（左下）、淋球菌（右下）

②甲型（α）乙型（β）丙型（γ）溶血链球菌、肺炎链球菌、淋病奈瑟菌

1.甲型α—草绿色，不完全溶血

2.乙型β—透明完全溶血

3.丙型γ—不溶血

4.肺炎链球菌G+（血琼脂平板）（草绿色不完全溶血）

5.淋病奈瑟菌G-（巧克力血琼脂平板）

6.其中，链球菌的致病：

扩散因子（透明质酸酶）使脓液稀释扩散。

2、白喉杆菌（（亚碲酸钾血琼脂、Albert染色—异染颗粒、Eleck平板—白喉杆菌毒力试验）

③炭疽杆菌的形态及培养特性

④结核杆菌的形态及培养特性、抗酸染色

（齐-尼抗酸染色—红色）

（罗氏培养基（绿色）—菜花样（黄色）

（六）实验六

①肥达反应（原理、意义、凝集效价、结果判定）

概念：

 用已知的伤寒沙门菌菌体（O）抗原和鞭毛（H）抗原，以及引起副伤寒的甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌H抗原的诊断菌液与受检血清做试管或微孔板凝集实验，测定受检血清中有无相应抗体及其效价的试验。

结果判断：

②肠道杆菌（SS培养基、双糖铁培养基）

SS培养基：

 双糖铁培养基：

4生化反应表

④霍乱弧菌

⑤厌氧芽孢梭菌的形态及培养特性（破伤风、产气荚膜、肉毒梭菌）

1.破伤风梭菌G+（疱肉培养基）（毒素动物实验）

2.产气荚膜梭菌G+（疱肉培养基）（血琼脂平板—双层溶血环）（高层琼脂断裂试验）（汹涌发酵试验）

3.肉毒梭菌G+（疱肉培养基）（血琼脂平板—完全溶血）

（七）实验七

①白色念珠菌G+（普通琼脂、沙包培养基）

②新型隐球菌（血琼脂、沙包培养基）（墨汁负染）

③病毒的致细胞病变作用（CPE）

许多病毒在细胞内复制增中，由于干扰细胞的正常代谢和损伤细胞结构，引起细胞形态的变化，如细胞皱缩、出现空泡、斑块、融合、变圆或坏死的现象，此种在光学显微镜下可观测到现象称病毒的致细胞病变作用（cytopathiceffect，CPE）

④包涵体

胞浆、胞核内出现的圆形或椭圆形、嗜酸或嗜碱性的小体

狂犬病毒包涵体—内基小体

鸡胚接种：

鸡胚在照蛋灯下标出气室和接种点，接种点一定要避开胚体和大血管。

用碘酒及酒精在标记处消毒，用打孔器按先气室后接种点的顺序打孔。

用注射器倾斜插入鸡胚2～3毫米，注入病毒0.2毫升。

用溶化石蜡按先接种点后气室的次序封口。

鸡胚置孵箱培养72小时后收获。

小白鼠脑内接种：

碘酒及酒精在接种部位（眼角与耳根连线的中点）消毒

用注射器倾斜进针2～3毫米，注入病毒0.02～0.03毫升