常用试剂的配制Word下载.docx
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97.5
95.0
90.0
80.0
70.0
60.0
6.81
6.98
7.17
7.38
7.73
8.04
50.0
(二)0.3%台盼兰染液
称取台盼兰(Trypanblue)粉0.3克,溶于100ml生理盐水中,加热使之完全溶解,用滤纸过滤除渣,装入瓶内室温保存。
(三)0.5%酚红指示剂
酚红
0.5g
0.1N(0.4%)NaOH
15ml
双蒸水
85ml
将0.5克酚红置研钵中,缓漫滴加0.1NNaOH溶液边加边磨,并不断吸出已溶解的酚红液,直至全部溶解,然后加入85ml双蒸水,颜色为深红,经粗滤纸过滤后使用,室温保存。
(四)5.6%NaHCO3溶液
称NaHCO35.6克,溶于100ml蒸馏水中,室温保存即可(如需要也可10磅15分钟高压灭菌,4℃冰箱保存)
(五)10μg/ml秋水仙素
秋水仙素
lOmg
生理盐水
100ml
装入茶色瓶中,为贮备液,4℃冰箱中保存。
甩时取贮备液1ml加生理盐水9ml即可。
(六)0.4%KCl-0.4%柠檬酸钠低渗液
将0.4%KCl和0.4%柠檬酸钠两液等量混合即可,室温保存。
(七)2%柠檬酸钠
称取柠檬酸钠2克,加100ml双蒸水即可,室温保存。
(八)0.2%次甲基兰染液
称次甲基兰(Methyleneblue)0.2克,加蒸馏水100ml,室温保存。
(九)0.5%醋酸洋红(AceioCarmine)染液
洋红
lg
醋酸
90ml
蒸馏水
110ml
将90ml醋酸加入110ml蒸馏水煮沸,然后将火焰移去,立即加入1克洋红,使之迅速冷却过滤,加饱和氢氧化铁(媒染剂)水溶液数滴,直到呈葡萄酒色。
室温保存。
加铁使洋红沉淀于组织而着色。
此染液室温存放时间越长效果越好,室温保存。
(十)1%甲苯胺兰(Toluidineblue)
称取甲苯胺兰1克,加蒸馏水lOOml。
(十一)1/3000中性红染液
取中性红(Neutralred)0.1克,加蒸馏水300ml。
(十二)Giemsa染液
1.贮备液
Giemsa粉
1g
纯甘油
66ml
甲醇
先将Giemsa粉置于研钵中加少量甘油,充分研磨,呈无颗粒的糊状。
再将全部甘油加入,放入56℃温箱中2小时,然后加入甲醇,保存于茶色瓶中。
一般两周后使用为好。
2.工作液
临用时将贮备液与pH6.8的磷酸缓冲液按照1:
20混合。
(十三)埃利希(Ehrlich)苏木精染液
苏木精
1.0g
乙醇
50ml
5ml
甘油
硫酸铝钾
5g
将苏木精溶于少量的乙醇中,再加醋酸并搅拌,以加速其溶解。
当苏木精溶解后将甘油加入并摇动容器,同时加入其余的乙醇;
硫酸铝钾需研磨并加热,然后溶解于蒸馏水中,将其一滴滴地加入上边的溶液,并不断摇动,此液配好后,将瓶口用纱布盖好,置通风处,经常摇动以加速其成熟,成熟约需4周左右,成熟的染液为深红色。
二、细胞化学和细胞组分分离溶液
(一)M一缓冲液
眯唑(Imidazole)
3.404g
KCI
3.7g
MgCl2·
6H2O
101.65mg
ECTA
380.35mg
EDTA
29.224mg
巯基乙醇
0.07ml
297ml
加至1000ml
用lNHCl调pH至7.2室温保存。
(二)2%TritonX一100溶液
量取2mlTritonX一100(聚乙二醇辛基苯基醚)液,加M缓冲液98ml即可。
(三)0.2%考马斯亮兰R-250染液
46.5ml
7.0ml
考马斯亮兰
0.2g
加至100ml
(四)A.0.1%碱性固绿染液(pH8.0~8.5)
1.0.1%固绿水溶液
固绿(Fastgreen)
0.1g
2.0.05%Na2C03溶液
Na2C03
50mg
用时按1:
1体积混合即可。
B.0.1%酸性固绿染液(pH2.2)
1.0.1%固绿水溶液。
2.mol/L×
75盐酸液
盐酸(比重1.19)0.109ml加蒸馏水至100ml
用时按l:
1混合。
(五)甲基绿一哌咯宁染液
1.1mol/L醋酸缓冲液(pH4.8):
(1)醋酸
17ml
加至200ml
(2)醋酸水
13.5g
加至lOOml
用时分别取两液40ml、60ml混匀即可。
2.甲基绿一哌咯宁(methylgreen—Pyrcnln)
5%哌咯宁水溶液
6ml
2%甲基绿水溶液
6ml
16ml
lmol/L醋酸缓冲液
16ml
lmol/L醋酸缓冲液临用时才可加入染液中。
(六)Schiff试剂
将碱性品红0.5克加入lOOml沸水,持续煮沸5分钟,并随时搅拌,待冷却到50℃时过滤到棕色瓶中,加1NHC11O毫升,冷却至25℃时加入1克NaHSO3,此时需很好的振荡,避光过夜。
次日取出(呈淡黄色)加0.25克活性炭剧烈振荡1分钟。
过滤后即得Schiff试剂。
避光低温保存。
(七)联苯胺混合液
联苯胺(4.4Diaminobenzidine)
95%乙醇
lOOml
3%过氧化氢
2滴
此液临用时配制。
(八)l%番红水溶液
番红(Safranin)
(九)1%SDS(十二烷基硫酸钠Sodiumdodecylsulfate,SDS)
SDS
10g
45%乙醇
(十)1mol/LTris(三羟甲基氨基甲烷/盐酸缓冲液TrihydroxymethylaminomethaneTris/HCL)pH7.8
Tris
12.114g
lOOml
先将Tris溶于少量蒸馏水,用HCI调pH至7.8,然后加水至100ml
(十一)RingerSolution
氯化钠(冷血动物用0.65克)
0.9克
氯化钾
0.042克
氯化钙
0.025克
(十二)淀粉肉汤培养基
蛋白
2g
淀粉
6g
牛肉汤
用10%NaHCO3调pH至7.0~7.2
(十三)0.25mol/L蔗糖一0.003mol/L氯化钙溶液
蔗糖
85.5g
0.33g
1000ml
(十四)1%詹纳斯绿B染液
取詹纳斯绿(JanusgreenB)1.0gRinger氏液100ml
(十五)1%刚果红染液
刚果红
(十六)Gomori硝酸铅作用液
0.05mol/L醋酸缓冲液(pH5)
0.6醋酸加蒸馏水200ml、取其
42ml
醋酸钠1.36g加蒸馏水200ml,取其158ml共200ml
B-甘油磷酸钠
2g
醋酸铅
5%氯化镁
以上作用液在临用时配制,最终在pH5~5.2,过滤使用。
(王世藩
汇编)
三、细胞培养和细胞融合溶液
(一)0.01mol/LPBS(磷酸盐缓冲液PhosphateBufferSaline,PBS)pH7.2。
0.2mol/L磷酸氢二钠液(甲液):
NaH2PO4·
12H2O
35.814g
双蒸水
加至500ml
0.2mol/L磷酸二氢钠液(乙液):
NaH2PO4·
15.601g
取甲液36ml,乙液14ml和NaCl8.2克,加双蒸水至1000ml。
混匀待完全溶解分装,经高压灭菌后保存于4℃冰箱备用。
(二)50%PEG(聚乙二醇Polyethyleneglycolmwl500)
称取0.5克PEG,用前放入试管中在酒精灯火焰上熔化,加入等量37℃予热的MEM培养液,混匀,保温在37℃水浴中待用。
(三)MEM培养液(含10%小牛血清)
MEM培养液(日本制药株式会社)
9.4g
1000ml
NaHCO3
1.5g
谷氨酰胺(L-glutamin)
0.292g
56℃灭活30分钟的小牛血清110ml
MEM粉末加水溶解后,用NaHCO3调pH到7.1(因在抽滤过程中pH升高0.2~0.3),然后加灭活的小牛血清和谷氨酰胺,待完全溶解后,立即用G6抽滤除菌,分装,置4℃冰箱保存备用。
(四)0.25%胰蛋白酶一0.02%EDTA混合消化液
胰蛋白酶(Trypsin)粉
0.25g
EDTA粉
20.0mg
0.01mol/LPBS
先用少量PBS溶解胰蛋白酶,然后将EDTA粉末和剩下的液体加入混合,置37℃水浴中1小时左右(待彻底溶解,液体呈透明为止),用G5抽滤,分装置4℃冰箱中保存。
(五)Hanks液
1.原液甲
NaCl
160g
KCl
8g
MgSO4·
7H2O
MgCI2·
溶于800ml馏水中。
CaCl2(无水)
2.8g
溶于100ml蒸馏水中。
将两种液体混合后,加水至1000ml用滤纸滤过,再加2ml氯仿防腐,置4℃冰箱备用。
原液乙
Na2HPO4·
3.04g
KH2PO4
1.2g
葡萄糖
20.0g
溶于800ml蒸馏水中,用滤纸过滤,然后加0.5%酚红80ml,再加水至1000ml,最后加入2ml氯仿防腐,置4℃冰箱备用。
2.使用液
甲乙两液各1份,双蒸水18份,混匀分装包扎好瓶口,经10磅15分钟高压灭菌后置4℃冰箱中保存。
使用时用5.6%NaHCO3调pH值到所需要求。
(六)1640培养液(含lO%小牛血清)
RPMI-1640粉
10.39g
通入适量的C02气体,边通入CO2边慢慢搅拌,使其(呈透明)完全溶解。
用NaHCO31.5克调pH值到7.2。
双抗1万u/ml
10ml
灭活小牛血清
110ml
混匀上述液体,立即用G6抽滤除菌分装,置4℃冰箱备用。
(七)青、链霉素溶液
青霉素钠盐(40万u/瓶)
5瓶
链霉素(100万u/瓶)
2瓶
将两者溶于200ml0.9%的无菌生理盐水,分装小瓶,-30℃保存。
双抗在培养基中的终浓度为各lOOu为宜。
(八)二甲基亚砜诱导HL-60细胞分化使用的终浓度为1。
4%。
(九)BrdU溶液(200ug/m1)
用无菌青霉素瓶,在室温下称取1.0mg,在无菌条件下加入灭菌生理盐水9.0ml,溶解,混匀,用黑纸包严,避光置冰箱冰格中保存。
最好用时现配。
(十)2×
SSC溶液
用分析天平称取氯化钠17.53克,柠檬酸钠8.82克溶于蒸馏水中,加蒸馏水至1000毫升。
(十一)3%琼脂:
取琼脂粉3克,加入双蒸水到100毫升,搅匀,高压消毒后(15磅20分钟),冷藏备用,使用前重新加热煮沸(贮存时间不宜过长)。
四、制备电镜标本的溶液
(一)2.5%戊二醛溶液
25%戊二醛
lOml
0.1mol/L二甲砷酸钠缓冲液
装入茶色瓶中,保存于4℃冰箱备用。
(二)0.1mol/L二甲砷酸钠缓冲液
二甲砷酸钠
10.70g
500ml
将二甲砷酸钠置于500ml容量瓶中,先加水约400ml,震荡使其溶解,用HCl调pH到7.4,加入剩余蒸馏水,4℃冰箱保存。
(三)包埋剂
环氧树脂Epon812
56.30g
DDSA(十二烷基琥珀酸酐Dodecenylsuccinic
anhydride,DDSA)
14.60g
MNA(甲基内次甲基邻苯二甲酸酐MethylNadic)
anhydride,MNA
29.00g
混合上述三种包埋剂成分,搅拌30分钟使其充分混匀。
再加加速剂2,4,6一三(二甲氨基甲基)苯酚(2,4,6-tridimethylaminomethylphenol,DMP-30)1.5ml,继续搅拌30分钟,置于干燥罐中(室温)备用。
(四)2%单宁酸
单宁酸
溶解后过滤装茶色瓶中,4℃冰箱保存。
(五)高锰酸钾固定剂
柠檬酸三钠
60mmol/L
25mmol/L
氯化镁
35mmol/L
高锰酸钾
125mmol/L
pH为7.4-7.8,装茶色瓶中,4℃冰箱中保存,有效期2个月左右。
(六)1%OsO4溶液
OsO4
0.5g
0.1mol/L二甲砷酸钠缓冲液。
OsO4一般为0.5或1克安瓶中封闭包装,配制时剥去商标,用自来水洗净,放洗涤液中泡4~12小时后用水冲洗,在安瓶上划痕,用蒸馏水洗净,投入茶色瓶中,加缓冲液,用玻璃棒在瓶中捣碎,轻轻摇动放冰箱中,48小时后完全溶解。
此药蒸气对人眼、角膜、鼻腔和口腔粘膜有固定作用,用时特别小心,在通风橱内操作。
五、显影、定影溶液
(一)D-72显影液
温水(52℃)
750ml
米吐尔
3g
无水亚硫酸钠
45g
对苯二酚
12g
无水碳酸钠
67.5g
溴化钾
19g
水
D-72显影液为通用显影液,既能显影胶片又能用于相纸显影。
使用原液,20℃显影时间1~2分钟可得高反差。
加水1:
2稀释后使用可得较低反差。
1:
1稀释使用。
20℃时显影时间3~4分钟可得正常反差。
(二)SB-1停显液配方
28%醋酸
48ml
停显时间lO秒左右。
(三)F-5酸性坚膜定影液
水
硫代硫酸钠
240g
15g
硼酸
7.5g
钾