常用试剂的配制Word下载.docx

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97.5

95.0

90.0

80.0

70.0

60.0

6.81

6.98

7.17

7.38

7.73

8.04

50.0

（二）0.3％台盼兰染液

称取台盼兰（Trypanblue）粉0.3克，溶于100ml生理盐水中，加热使之完全溶解，用滤纸过滤除渣，装入瓶内室温保存。

（三）0.5％酚红指示剂

酚红 

0.5g

0.1N（0.4％）NaOH 

15ml

双蒸水 

85ml

将0.5克酚红置研钵中，缓漫滴加0.1NNaOH溶液边加边磨，并不断吸出已溶解的酚红液，直至全部溶解，然后加入85ml双蒸水，颜色为深红，经粗滤纸过滤后使用，室温保存。

（四）5.6％NaHCO3溶液

称NaHCO35.6克，溶于100ml蒸馏水中，室温保存即可（如需要也可10磅15分钟高压灭菌，4℃冰箱保存）

（五）10μg／ml秋水仙素

秋水仙素 

lOmg

生理盐水 

100ml

装入茶色瓶中，为贮备液，4℃冰箱中保存。

甩时取贮备液1ml加生理盐水9ml即可。

（六）0.4％KCl-0.4％柠檬酸钠低渗液

将0.4％KCl和0.4％柠檬酸钠两液等量混合即可，室温保存。

（七）2％柠檬酸钠

称取柠檬酸钠2克，加100ml双蒸水即可，室温保存。

（八）0.2％次甲基兰染液

称次甲基兰（Methyleneblue）0.2克，加蒸馏水100ml，室温保存。

（九）0.5％醋酸洋红（AceioCarmine）染液

洋红 

lg

醋酸 

90ml

蒸馏水 

110ml

将90ml醋酸加入110ml蒸馏水煮沸，然后将火焰移去，立即加入1克洋红，使之迅速冷却过滤，加饱和氢氧化铁（媒染剂）水溶液数滴，直到呈葡萄酒色。

室温保存。

加铁使洋红沉淀于组织而着色。

此染液室温存放时间越长效果越好，室温保存。

（十）1％甲苯胺兰（Toluidineblue）

称取甲苯胺兰1克，加蒸馏水lOOml。

（十一）1/3000中性红染液

取中性红（Neutralred）0.1克，加蒸馏水300ml。

（十二）Giemsa染液

1．贮备液

Giemsa粉 

1g

纯甘油 

66ml

甲醇 

先将Giemsa粉置于研钵中加少量甘油，充分研磨，呈无颗粒的糊状。

再将全部甘油加入，放入56℃温箱中2小时，然后加入甲醇，保存于茶色瓶中。

一般两周后使用为好。

2．工作液

临用时将贮备液与pH6.8的磷酸缓冲液按照1:

20混合。

（十三）埃利希（Ehrlich）苏木精染液

苏木精 

1.0g

乙醇 

50ml

5ml

甘油 

硫酸铝钾 

5g

将苏木精溶于少量的乙醇中，再加醋酸并搅拌，以加速其溶解。

当苏木精溶解后将甘油加入并摇动容器，同时加入其余的乙醇；

硫酸铝钾需研磨并加热，然后溶解于蒸馏水中，将其一滴滴地加入上边的溶液，并不断摇动，此液配好后，将瓶口用纱布盖好，置通风处，经常摇动以加速其成熟，成熟约需4周左右，成熟的染液为深红色。

二、细胞化学和细胞组分分离溶液

（一）M一缓冲液

眯唑（Imidazole） 

3.404g

KCI 

3.7g

MgCl2·

6H2O 

101.65mg

ECTA 

380.35mg

EDTA 

29.224mg

巯基乙醇 

0.07ml

297ml

加至1000ml

用lNHCl调pH至7.2室温保存。

（二）2％TritonX一100溶液

量取2mlTritonX一100（聚乙二醇辛基苯基醚）液，加M缓冲液98ml即可。

（三）0.2％考马斯亮兰R-250染液

46.5ml

7.0ml

考马斯亮兰 

0.2g

加至100ml

（四）A．0.1％碱性固绿染液（pH8.0～8.5）

1．0.1％固绿水溶液

固绿（Fastgreen） 

0.1g

2．0.05％Na2C03溶液

Na2C03 

50mg

用时按1:

1体积混合即可。

B．0.1％酸性固绿染液（pH2.2）

1．0.1％固绿水溶液。

2．mol／L×

75盐酸液

盐酸（比重1.19）0.109ml加蒸馏水至100ml

用时按l:

1混合。

（五）甲基绿一哌咯宁染液

1.1mol／L醋酸缓冲液（pH4.8）：

（1）醋酸 

17ml

加至200ml

（2）醋酸水 

13.5g

加至lOOml

用时分别取两液40ml、60ml混匀即可。

2．甲基绿一哌咯宁（methylgreen—Pyrcnln）

5％哌咯宁水溶液 

6ml

2％甲基绿水溶液 

6ml

16ml

lmol/L醋酸缓冲液 

16ml

lmol/L醋酸缓冲液临用时才可加入染液中。

（六）Schiff试剂

将碱性品红0.5克加入lOOml沸水，持续煮沸5分钟，并随时搅拌，待冷却到50℃时过滤到棕色瓶中，加1NHC11O毫升，冷却至25℃时加入1克NaHSO3，此时需很好的振荡，避光过夜。

次日取出（呈淡黄色）加0.25克活性炭剧烈振荡1分钟。

过滤后即得Schiff试剂。

避光低温保存。

（七）联苯胺混合液

联苯胺（4.4Diaminobenzidine） 

95％乙醇 

lOOml

3％过氧化氢 

2滴

此液临用时配制。

（八）l％番红水溶液

番红（Safranin） 

（九）1％SDS（十二烷基硫酸钠Sodiumdodecylsulfate,SDS）

SDS 

10g

45％乙醇 

（十）1mol／LTris（三羟甲基氨基甲烷/盐酸缓冲液TrihydroxymethylaminomethaneTris/HCL）pH7.8

Tris 

12.114g

lOOml

先将Tris溶于少量蒸馏水，用HCI调pH至7.8，然后加水至100ml

（十一）RingerSolution

氯化钠（冷血动物用0．65克） 

0.9克

氯化钾 

0.042克

氯化钙 

0.025克

（十二）淀粉肉汤培养基

蛋白 

2g

淀粉 

6g

牛肉汤 

用10％NaHCO3调pH至7.0～7.2

（十三）0.25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化钙溶液

蔗糖 

85.5g

0.33g

1000ml

（十四）1％詹纳斯绿B染液

取詹纳斯绿（JanusgreenB）1.0gRinger氏液100ml

（十五）1％刚果红染液

刚果红 

（十六）Gomori硝酸铅作用液

0.05mol／L醋酸缓冲液（pH5） 

0.6醋酸加蒸馏水200ml、取其 

42ml

醋酸钠1.36g加蒸馏水200ml，取其158ml共200ml

B-甘油磷酸钠 

2g

醋酸铅 

5％氯化镁 

以上作用液在临用时配制，最终在pH5～5.2，过滤使用。

（王世藩 

汇编）

三、细胞培养和细胞融合溶液

（一）0.01mol／LPBS（磷酸盐缓冲液PhosphateBufferSaline，PBS）pH7.2。

0.2mol／L磷酸氢二钠液（甲液）：

NaH2PO4·

12H2O 

35.814g

双蒸水 

加至500ml

0.2mol／L磷酸二氢钠液（乙液）:

NaH2PO4·

15.601g

取甲液36ml，乙液14ml和NaCl8.2克，加双蒸水至1000ml。

混匀待完全溶解分装，经高压灭菌后保存于4℃冰箱备用。

（二）50％PEG（聚乙二醇Polyethyleneglycolmwl500）

称取0.5克PEG，用前放入试管中在酒精灯火焰上熔化，加入等量37℃予热的MEM培养液，混匀，保温在37℃水浴中待用。

（三）MEM培养液（含10％小牛血清）

MEM培养液（日本制药株式会社） 

9.4g

1000ml

NaHCO3 

1.5g

谷氨酰胺（L-glutamin） 

0.292g

56℃灭活30分钟的小牛血清110ml

MEM粉末加水溶解后，用NaHCO3调pH到7.1（因在抽滤过程中pH升高0.2～0.3），然后加灭活的小牛血清和谷氨酰胺，待完全溶解后，立即用G6抽滤除菌，分装，置4℃冰箱保存备用。

（四）0.25％胰蛋白酶一0.02％EDTA混合消化液

胰蛋白酶（Trypsin）粉 

0.25g

EDTA粉 

20.0mg

0.01mol／LPBS 

先用少量PBS溶解胰蛋白酶，然后将EDTA粉末和剩下的液体加入混合，置37℃水浴中1小时左右（待彻底溶解，液体呈透明为止），用G5抽滤，分装置4℃冰箱中保存。

（五）Hanks液

1．原液甲

NaCl 

160g

KCl 

8g

MgSO4·

7H2O 

MgCI2·

溶于800ml馏水中。

CaCl2（无水） 

2.8g

溶于100ml蒸馏水中。

将两种液体混合后，加水至1000ml用滤纸滤过，再加2ml氯仿防腐，置4℃冰箱备用。

原液乙

Na2HPO4·

3.04g

KH2PO4 

1.2g

葡萄糖 

20.0g

溶于800ml蒸馏水中，用滤纸过滤，然后加0.5％酚红80ml，再加水至1000ml，最后加入2ml氯仿防腐，置4℃冰箱备用。

2．使用液

甲乙两液各1份，双蒸水18份，混匀分装包扎好瓶口，经10磅15分钟高压灭菌后置4℃冰箱中保存。

使用时用5.6％NaHCO3调pH值到所需要求。

（六）1640培养液（含lO％小牛血清）

RPMI-1640粉 

10.39g

通入适量的C02气体，边通入CO2边慢慢搅拌，使其（呈透明）完全溶解。

用NaHCO31.5克调pH值到7.2。

双抗1万u/ml 

10ml

灭活小牛血清 

110ml

混匀上述液体，立即用G6抽滤除菌分装，置4℃冰箱备用。

（七）青、链霉素溶液

青霉素钠盐（40万u／瓶） 

5瓶

链霉素（100万u／瓶） 

2瓶

将两者溶于200ml0.9％的无菌生理盐水，分装小瓶，-30℃保存。

双抗在培养基中的终浓度为各lOOu为宜。

（八）二甲基亚砜诱导HL-60细胞分化使用的终浓度为1。

4％。

（九）BrdU溶液（200ug/m1）

用无菌青霉素瓶，在室温下称取1.0mg，在无菌条件下加入灭菌生理盐水9.0ml，溶解，混匀，用黑纸包严，避光置冰箱冰格中保存。

最好用时现配。

（十）2×

SSC溶液

用分析天平称取氯化钠17.53克，柠檬酸钠8.82克溶于蒸馏水中，加蒸馏水至1000毫升。

（十一）3％琼脂：

取琼脂粉3克，加入双蒸水到100毫升，搅匀，高压消毒后（15磅20分钟），冷藏备用，使用前重新加热煮沸（贮存时间不宜过长）。

四、制备电镜标本的溶液

（一）2.5％戊二醛溶液

25％戊二醛 

lOml

0.1mol／L二甲砷酸钠缓冲液

装入茶色瓶中，保存于4℃冰箱备用。

（二）0.1mol／L二甲砷酸钠缓冲液

二甲砷酸钠 

10.70g

500ml

将二甲砷酸钠置于500ml容量瓶中，先加水约400ml，震荡使其溶解，用HCl调pH到7.4，加入剩余蒸馏水，4℃冰箱保存。

（三）包埋剂

环氧树脂Epon812 

56.30g 

DDSA（十二烷基琥珀酸酐Dodecenylsuccinic

anhydride，DDSA） 

14.60g

MNA（甲基内次甲基邻苯二甲酸酐MethylNadic）

anhydride，MNA 

29.00g

混合上述三种包埋剂成分，搅拌30分钟使其充分混匀。

再加加速剂2,4,6一三（二甲氨基甲基）苯酚（2，4，6-tridimethylaminomethylphenol，DMP-30）1.5ml，继续搅拌30分钟，置于干燥罐中（室温）备用。

（四）2％单宁酸

单宁酸 

溶解后过滤装茶色瓶中，4℃冰箱保存。

（五）高锰酸钾固定剂

柠檬酸三钠 

60mmol/L

25mmol/L

氯化镁 

35mmol/L

高锰酸钾 

125mmol/L

pH为7.4-7.8，装茶色瓶中，4℃冰箱中保存，有效期2个月左右。

（六）1％OsO4溶液

OsO4 

0.5g

0.1mol/L二甲砷酸钠缓冲液。

OsO4一般为0.5或1克安瓶中封闭包装，配制时剥去商标，用自来水洗净，放洗涤液中泡4～12小时后用水冲洗，在安瓶上划痕，用蒸馏水洗净，投入茶色瓶中，加缓冲液，用玻璃棒在瓶中捣碎，轻轻摇动放冰箱中，48小时后完全溶解。

此药蒸气对人眼、角膜、鼻腔和口腔粘膜有固定作用，用时特别小心，在通风橱内操作。

五、显影、定影溶液

（一）D-72显影液 

温水（52℃） 

750ml

米吐尔 

3g

无水亚硫酸钠 

45g

对苯二酚 

12g

无水碳酸钠 

67.5g

溴化钾 

19g

水 

D-72显影液为通用显影液，既能显影胶片又能用于相纸显影。

使用原液，20℃显影时间1～2分钟可得高反差。

加水1:

2稀释后使用可得较低反差。

1:

1稀释使用。

20℃时显影时间3～4分钟可得正常反差。

（二）SB-1停显液配方

28％醋酸 

48ml

停显时间lO秒左右。

（三）F-5酸性坚膜定影液

水 

硫代硫酸钠 

240g

15g

硼酸 

7.5g

钾