常用试剂的配制Word下载.docx

1、 97.5 95.0 90.0 80.0 70.0 60.0 6.81 6.98 7.17 7.38 7.73 8.04 50.0 （二）0.3台盼兰染液 称取台盼兰（Trypan blue）粉0.3克，溶于100ml生理盐水中，加热使之完全溶解，用滤纸过滤除渣，装入瓶内室温保存。 （三）0.5酚红指示剂 酚红 0.5g 0.1N（0.4）NaOH 15ml 双蒸水 85ml 将0.5克酚红置研钵中，缓漫滴加0.1NNaOH溶液边加边磨，并不断吸出已溶解的酚红液，直至全部溶解，然后加入85ml双蒸水，颜色为深红，经粗滤纸过滤后使用，室温保存。 （四）5.6NaHCO3溶液 称NaHCO35.6

2、克，溶于100ml蒸馏水中，室温保存即可（如需要也可10磅15分钟高压灭菌，4冰箱保存） （五）10gml秋水仙素 秋水仙素 lOmg生理盐水 100ml装入茶色瓶中，为贮备液，4冰箱中保存。甩时取贮备液1ml加生理盐水9ml即可。 （六）0.4KCl-0.4柠檬酸钠低渗液 将0.4KCl和0.4柠檬酸钠两液等量混合即可，室温保存。 （七）2柠檬酸钠 称取柠檬酸钠2克，加100ml双蒸水即可，室温保存。 （八）0.2次甲基兰染液 称次甲基兰（Methylene blue）0.2克，加蒸馏水100ml，室温保存。 （九）0.5醋酸洋红（Aceio Carmine）染液 洋红 lg 醋酸 90ml

3、 蒸馏水110ml 将90ml醋酸加入110ml蒸馏水煮沸，然后将火焰移去，立即加入1克洋红，使之迅速冷却过滤，加饱和氢氧化铁（媒染剂）水溶液数滴，直到呈葡萄酒色。室温保存。加铁使洋红沉淀于组织而着色。此染液室温存放时间越长效果越好，室温保存。 （十）1甲苯胺兰（Toluidine blue） 称取甲苯胺兰1克，加蒸馏水lOOml。 （十一）1/3000中性红染液 取中性红（Neutral red）0.1克，加蒸馏水300ml。 （十二）Giemsa染液 1贮备液Giemsa粉 1g 纯甘油 66ml 甲醇 先将Giemsa粉置于研钵中加少量甘油，充分研磨，呈无颗粒的糊状。再将全部甘油加入，放

4、入56温箱中2小时，然后加入甲醇，保存于茶色瓶中。一般两周后使用为好。 2工作液 临用时将贮备液与pH6.8的磷酸缓冲液按照1:20混合。 （十三）埃利希（Ehrlich）苏木精染液 苏木精 1.0g 乙醇 50ml 5ml 甘油 硫酸铝钾 5g 将苏木精溶于少量的乙醇中，再加醋酸并搅拌，以加速其溶解。当苏木精溶解后将甘油加入并摇动容器，同时加入其余的乙醇；硫酸铝钾需研磨并加热，然后溶解于蒸馏水中，将其一滴滴地加入上边的溶液，并不断摇动，此液配好后，将瓶口用纱布盖好，置通风处，经常摇动以加速其成熟，成熟约需4周左右，成熟的染液为深红色。 二、细胞化学和细胞组分分离溶液 （一）M一缓冲液 眯唑（

5、Imidazole） 3.404g KCI3.7g MgCl26H2O101.65mg ECTA 380.35mg EDTA 29.224mg 巯基乙醇 0.07ml 297ml 加至1000ml用lNHCl调pH至7.2室温保存。 （二）2Triton X一100溶液 量取2mlTriton X一100（聚乙二醇辛基苯基醚）液，加M缓冲液98ml即可。 （三）0.2考马斯亮兰R-250染液 46.5ml 7.0ml 考马斯亮兰 0.2g加至100ml（四）A0.1碱性固绿染液（pH8.08.5） 10.1固绿水溶液 固绿（Fast green） 0.1g 20.05Na2C03溶液 Na2C

6、03 50mg用时按1:1体积混合即可。 B0.1酸性固绿染液（pH2.2） 10.1固绿水溶液。 2molL75盐酸液 盐酸（比重1.19）0.109ml加蒸馏水至100ml 用时按l:1混合。 （五）甲基绿一哌咯宁染液 1.1molL醋酸缓冲液（pH4.8）： （1）醋酸 17ml 加至200ml（2）醋酸水 13.5g 加至lOOml用时分别取两液40ml、60ml混匀即可。 2甲基绿一哌咯宁（methyl greenPyrcnln）5哌咯宁水溶液 6ml2甲基绿水溶液6ml16mllmol/L醋酸缓冲液 16ml lmol/L醋酸缓冲液临用时才可加入染液中。 （六）Schiff试剂 将

7、碱性品红0.5克加入lOOml沸水，持续煮沸5分钟，并随时搅拌，待冷却到50时过滤到棕色瓶中，加1N HC11O毫升，冷却至25时加入1克NaHSO3，此时需很好的振荡，避光过夜。次日取出（呈淡黄色）加0.25克活性炭剧烈振荡1分钟。过滤后即得Schiff试剂。避光低温保存。 （七）联苯胺混合液 联苯胺（4.4 Diamino benzidine） 95乙醇 lOOml 3过氧化氢 2滴 此液临用时配制。 （八）l番红水溶液 番红（Safranin） （九）1SDS（十二烷基硫酸钠Sodium dodecyl sulfate,SDS） SDS 10g 45乙醇 （十）1molLTris（三羟甲

8、基氨基甲烷/盐酸缓冲液Trihydroxy methylaminomethane Tris/HCL）pH7.8 Tris 12.114glOOml 先将Tris溶于少量蒸馏水，用HCI调pH至7.8，然后加水至100ml （十一）Ringer Solution氯化钠（冷血动物用065克） 0.9克氯化钾 0.042克氯化钙 0.025克（十二）淀粉肉汤培养基蛋白2g淀粉 6g牛肉汤用10NaHCO3调pH至7.07.2（十三）0.25molL蔗糖一0.003molL氯化钙溶液蔗糖 85.5g 0.33g1000ml（十四）1詹纳斯绿B染液取詹纳斯绿（Janus green B）1.0g Rin

9、ger氏液100ml（十五）1刚果红染液刚果红（十六）Gomori硝酸铅作用液0.05molL醋酸缓冲液（pH5）0.6醋酸加蒸馏水200ml、取其 42ml醋酸钠1.36g加蒸馏水200ml，取其158ml共200ml B-甘油磷酸钠 2g醋酸铅5氯化镁以上作用液在临用时配制，最终在pH55.2，过滤使用。（王世藩 汇编）三、细胞培养和细胞融合溶液（一）0.01molLPBS（磷酸盐缓冲液Phosphate Buffer Saline，PBS）pH7.2。0.2molL磷酸氢二钠液（甲液）： NaH2PO412H2O 35.814g双蒸水 加至500ml0.2molL磷酸二氢钠液（乙液）:

10、NaH2PO4 15.601g 取甲液36ml，乙液14ml和NaCl8.2克，加双蒸水至1000ml。混匀待完全溶解分装，经高压灭菌后保存于4冰箱备用。 （二）50PEG（聚乙二醇Polyethyleneglycol mwl500） 称取0.5克PEG，用前放入试管中在酒精灯火焰上熔化，加入等量37予热的MEM培养液，混匀，保温在37水浴中待用。 （三）MEM培养液（含10小牛血清） MEM培养液（日本制药株式会社） 9.4g 1000ml NaHCO31.5g 谷氨酰胺（L-glutamin）0.292g 56灭活30分钟的小牛血清110ml MEM粉末加水溶解后，用NaHCO3调pH到7

11、.1（因在抽滤过程中pH升高0.20.3），然后加灭活的小牛血清和谷氨酰胺，待完全溶解后，立即用G6抽滤除菌，分装，置4冰箱保存备用。 （四）0.25胰蛋白酶一0.02EDTA混合消化液 胰蛋白酶（Trypsin）粉 0.25g EDTA粉 20.0mg 0.01molL PBS 先用少量PBS溶解胰蛋白酶，然后将EDTA粉末和剩下的液体加入混合，置37水浴中1小时左右（待彻底溶解，液体呈透明为止），用G5抽滤，分装置4冰箱中保存。 （五）Hanks液 1原液甲 NaCl 160g KCl8g MgSO47H2O MgCI2 溶于800ml馏水中。 CaCl2（无水） 2.8g 溶于100ml

12、蒸馏水中。 将两种液体混合后，加水至1000ml用滤纸滤过，再加2ml氯仿防腐，置4冰箱备用。 原液乙 Na2HPO43.04g KH2PO4 1.2g 葡萄糖 20.0g 溶于800ml蒸馏水中，用滤纸过滤，然后加0.5酚红80ml，再加水至1000ml，最后加入2ml氯仿防腐，置4冰箱备用。 2使用液 甲乙两液各1份，双蒸水18份，混匀分装包扎好瓶口，经10磅15分钟高压灭菌后置4冰箱中保存。使用时用5.6NaHCO3调pH值到所需要求。 （六）1640培养液（含lO小牛血清） RPMI-1640粉 10.39g 通入适量的C02气体，边通入CO2边慢慢搅拌，使其（呈透明）完全溶解。用Na

13、HCO31.5克调pH值到7.2。 双抗1万u/ml10ml 灭活小牛血清 110ml 混匀上述液体，立即用G6抽滤除菌分装，置4冰箱备用。 （七）青、链霉素溶液 青霉素钠盐（40万u瓶） 5瓶链霉素（100万u瓶） 2瓶将两者溶于200ml0.9的无菌生理盐水，分装小瓶，-30保存。双抗在培养基中的终浓度为各lOOu为宜。 （八）二甲基亚砜诱导HL-60细胞分化使用的终浓度为1。4。 （九）BrdU溶液（200ug/m1） 用无菌青霉素瓶，在室温下称取1.0mg，在无菌条件下加入灭菌生理盐水9.0ml，溶解，混匀，用黑纸包严，避光置冰箱冰格中保存。最好用时现配。（十）2SSC溶液用分析天平称

14、取氯化钠17.53克，柠檬酸钠8.82克溶于蒸馏水中，加蒸馏水至1000毫升。 （十一）3琼脂：取琼脂粉3克，加入双蒸水到100毫升，搅匀，高压消毒后（15磅20分钟），冷藏备用，使用前重新加热煮沸（贮存时间不宜过长）。四、制备电镜标本的溶液（一）2.5戊二醛溶液25戊二醛 lOml 0.1molL二甲砷酸钠缓冲液 装入茶色瓶中，保存于4冰箱备用。 （二）0.1molL二甲砷酸钠缓冲液 二甲砷酸钠 10.70g 500ml 将二甲砷酸钠置于500ml容量瓶中，先加水约400ml，震荡使其溶解，用HCl调pH到7.4，加入剩余蒸馏水，4冰箱保存。 （三）包埋剂环氧树脂Epon812 56.30g

15、DDSA（十二烷基琥珀酸酐Dodecenyl succinic anhydride，DDSA） 14.60g MNA（甲基内次甲基邻苯二甲酸酐Methyl Nadic） anhydride，MNA 29.00g 混合上述三种包埋剂成分，搅拌30分钟使其充分混匀。再加加速剂2,4,6一三（二甲氨基甲基）苯酚（2，4，6-tridimethyl aminomethylphenol，DMP-30）1.5ml，继续搅拌30分钟，置于干燥罐中（室温）备用。 （四）2单宁酸 单宁酸溶解后过滤装茶色瓶中，4冰箱保存。（五）高锰酸钾固定剂 柠檬酸三钠 60mmol/L 25mmol/L氯化镁35mmol/L

16、高锰酸钾 125mmol/LpH为7.4-7.8，装茶色瓶中，4冰箱中保存，有效期2个月左右。（六）1OsO4溶液OsO4 0.5g0.1mol/L二甲砷酸钠缓冲液。 OsO4一般为0.5或1克安瓶中封闭包装，配制时剥去商标，用自来水洗净，放洗涤液中泡412小时后用水冲洗，在安瓶上划痕，用蒸馏水洗净，投入茶色瓶中，加缓冲液，用玻璃棒在瓶中捣碎，轻轻摇动放冰箱中，48小时后完全溶解。此药蒸气对人眼、角膜、鼻腔和口腔粘膜有固定作用，用时特别小心，在通风橱内操作。五、显影、定影溶液（一）D-72显影液温水（52） 750ml米吐尔 3g无水亚硫酸钠 45g对苯二酚 12g无水碳酸钠 67.5g溴化钾 19g 水 D-72显影液为通用显影液，既能显影胶片又能用于相纸显影。 使用原液，20显影时间12分钟可得高反差。 加水1:2稀释后使用可得较低反差。1:1稀释使用。20时显影时间34分钟可得正常反差。 （二）SB-1停显液配方28醋酸 48ml 停显时间lO秒左右。（三）F-5酸性坚膜定影液水硫代硫酸钠 240g 15g硼酸7.5g钾