转基因食品PCR定性检测_精品文档PPT格式课件下载.ppt

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本部分适用于种子、饲料、食品和环境样品中转基因成分的定性PCR检测。

检测原理：

一般原理：

定性分析包括对测试样品目标核算序列的筛选检测和特异性检测。

在设置合适的对照和在检测下限的情况下，定性检测结果要清楚判断样品是否为转基因产品。

本检测方法包括：

目标序列的扩增和检测，扩增片段特异性的确证。

PCR扩增目标序列的扩增是在反应缓冲液中，脱氧核糖核酸三磷酸、寡核苷酸引物在DNA聚合酶的作用下进行的催化反应。

在反应混合体系中不应存在DNA聚合酶的抑制剂。

DNA扩增是一个循环的过程：

通过加热使双螺旋DNA变性为单链核酸：

在合适的温度下引物和目标序列发生退火；

在合适的温度下，结合在两条单链上的引物通过DNA聚合酶作用进行PCR延伸反应。

PCR产物检测和确证,可以通过凝胶电泳或其他方法检测PCR产物，必要是可以将PCR产物从凝胶中分离出来进行检测。

可以通过限制性内切酶酶切分析、杂交、DNA序列分析或者熔点曲线分析等方法对PCR产物进行确证。

采用实时荧光PCR方法检测时，扩增及检测同时进行。

检测步骤：

引物设计原则,PCR方法的选择：

PCR反应条件及验证,结果判定：

植物基因组DNA提取方法：

CTAB法SDS法试剂盒法,一、物种特异性检测：

PCR反应体系：

PCR反应参数设置：

PCR结果确证：

二、筛选检测方法,PCR反应体系：

PCR反应参数：

三、结构基因特异性检测,PCR反应体系：

PCR反应参数,PCR反应确证：