cellsearch循环肿瘤细胞CTC试剂盒说明书自译中文版Word格式.docx

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血液循环中的肿瘤细胞源自于上皮细胞，而这类细胞在血液循环系统中是极罕见的。

基于此，本公司推出的细胞自动化捕获仪（CELLTRACKSAUTOPREPSystem）通过预设程序并配合使用CellSearch循环肿瘤细胞检测试剂盒（CELLSEARCHKit）可以对样本进行标准化和自动化检测。

用CELLTRACKSII分析仪或者CellSpotter分析仪，一种半自动荧光显微镜，可以对肿瘤细胞进行分析和计数。

这种方法只计具有上皮细胞特性（EpCAM+,CK8,18+，和/或者CK19+）的细胞数量。

检测原理

CellSearch循环肿瘤细胞检测试剂盒包括磁流体捕获试剂和荧光免疫试剂。

磁流体试剂是一种具有磁芯的颗粒。

其表面包被识别EpCAM抗原的抗体，EpCAM是CTC特异性抗原。

因此，该磁微粒可以捕获CTC。

经过免疫捕获和富集后，荧光试剂用来鉴定CTC和CTC计数。

荧光试剂包括以下组成：

抗CK-藻红蛋白（PE）的特异于细胞内蛋白质的细胞角蛋白抗体（上皮细胞特性）；

DAPI，用于细胞核染色；

和抗CD45-别藻蓝蛋白（APC）白细胞特异性抗体。

试剂/样品混合物被CELLTRACKSAUTOPREP系统分配到一个插入在MAGNEST®

细胞呈现装置的暗盒中。

所述MAGNEST®

装置具有强磁场，能吸引磁微粒标记的上皮细胞在暗盒的表面上。

CELLTRACKSANALYZERII®

分析仪，或者CellSpotter®

分析仪自动扫描暗盒的整个表面，获取图像并向用户显示所有事件，其中CK-PE和DAPI荧光染料进行共定位。

图像进行最终分类，并以画廊格式呈现给用户。

所检测分析的事件当其形态学特征与肿瘤细胞一致并表现出EpCAM+，CK+，DAPI+和CD45-表型时，才被分类为肿瘤细胞。

试剂盒提供的材料

试剂说明

1.3ml包被抗EpCAM抗体的磁流体：

含有浓度为0.022%的磁微粒，这些磁微粒表面偶联有抗表皮细胞表面标志物EpCAM的鼠源单克隆抗体。

缓冲溶液中含有0.03%的BSA和0.05%ProClin300作为保护剂。

（棕色瓶盖）

2.3ml染色试剂：

包含细胞角蛋白特异性鼠源单克隆抗体，该偶联藻红蛋白（PE），浓度为0.0006%和浓度为0.0012%的鼠源抗CD45分子的单克隆抗体，该抗体偶联别藻蓝蛋白（APC），保存在含有0.5％BSA和0.1％叠氮化钠的缓冲溶液中。

（白色瓶盖）

3.3ml核酸染料：

浓度为0.005%的4'

，6-二脒基-2-苯基二盐酸盐（DAPI）保存在0.05%

的Proclin™300缓冲溶液中。

（蓝色瓶盖）

4.3ml捕获增强试剂：

包含浓度为0.02％的专有试剂用于限制铁磁流体聚团，保存在0.5％BSA和0.1％叠氮化钠缓冲溶液中。

（透明瓶盖）

5.3ml通透试剂：

含有0.011％的专有通透剂，保存在0.1％叠氮化钠缓冲液中。

（绿色瓶盖）

6.3ml细胞固定液：

包含25％的专有固定液成分，保存在0.1％BSA和0.1％叠氮化钠缓冲溶液中。

（红色瓶盖）

7.2x110ml/瓶稀释液：

含有0.1％叠氮化钠的缓冲溶液。

8.16支Cellsearch®

圆锥形管（15ml圆锥形离心管）和管帽。

9.16个暗盒和暗盒塞子。

未提供的必需材料

1.CellSave血液保护管（货号#7900005）

2.CELLTRACKSAUTOPREP系统（Catalog#9541）

3.CELLTRACKSANALYZERII®

分析仪（Catalog#9555），或者CellSpotter®

分析仪（Catalog#9525）

4.CELLSEARCH®

循环肿瘤细胞质控试剂盒（Catalog#7900003）

5.CELLTRACKS®

AUTOPREP®

仪器缓冲液（Catalog#7901003）

6.能提供离心力为800Xg水平离心机。

7.试管架

8.微量移液器和枪头

9.旋涡混合器

警告和注意事项

1.本产品仅用于体外诊断。

2.在使用本产品检测样本之前请仔细阅读说明书。

3.注意：

只能用CellSave保护管收集血液。

CTC非常脆弱，需要特别保护才能进行正确分析。

4.注意：

从业人员必须遵循全面防护措施，使用实验室的安全设备（例如，护目镜、安全服、安全手套等）。

5.注意：

微生物污染会造成获得结果的不正确性，实验中应避免生物污染。

6.警告：

所有的生物样本，包括暗盒和其他与生物样本接触的材料，应该认为具有生物危害。

样本如果具有传播感染的能力，必须进行及时处理。

同时，废弃物应根据当地和国家的规定进行正确处理。

禁止用嘴吸液。

7.警告：

一些含有叠氮化钠作为防腐剂的试剂。

如果食入，请立即就医。

应放在小孩拿不到的地方。

远离食品和饮料。

使用时，佩戴合适的防护服。

与酸接触会释放剧毒气体。

在处理过程中，叠氮化合物应用大量的水冲洗，并避免放置在铅或铜的容器中，其可形成爆炸的条件。

危险和安全术语R22表示吞咽有害，S28表示与皮肤接触后，用大量肥皂清洗。

8.警告：

所用包含Proclin™300作为防腐剂的试剂。

过度暴露在Proclin™300可引起皮肤和/或眼睛刺激，以及粘膜和上呼吸道刺激的症状。

9.操作人员在实验前应进行培训。

试剂储存和处理

1.所以试剂在未开启使用之前，请储存在2-8度。

2.在试剂盒开启后，试剂在2-8度储存时间不超过30天。

为了更好的储存，开启的试剂必须使用相对应的盖子盖上，盖子的颜色与试剂瓶的标签相对应。

这可以避免试剂之间的交叉污染。

在试剂盒开启后，稀释缓冲液不属于试剂盒的一部分，应当在室温下储存，且保存时间不能超过30天。

4.避免试剂保存温度超过35度，也不要冰冻。

5.在使用前，试剂需要平衡至室温（15-30度）。

6.目视检查试剂盒包装，并确定试剂在正确的位置。

通过匹配其特有的彩色瓶帽颜色和相应标签，检验每种试剂是否在适当的位置。

请参照以下图片的安置。

如果发现试剂放错了位置，或者存在重复的瓶子，不要使用该试剂盒，并通知客户技术服务进行更换。

7.试剂需避光保存。

8.试剂在正确的保存条件下是稳定的，直到保存到印刷在试剂容器或试剂盒上的失效日期。

不要使用过期试剂。

9.试剂盒组分经过大量的产生和测试。

不同试剂盒之间的试剂不能混合使用。

检测过程

样本收集和预处理

使用CellSave保护管收集全血

1.初始样样本应在开始治疗方案前进行设计。

后续样本可以在治疗方案开始后进行，在治疗过程中，通常在3至4周的时间间隔内检测CTC水平。

如果患者用阿霉素进行治疗，至少应在用药7天后才能取血检测。

2.只能使用CellSave保存管，通过静脉无菌的采集全血。

3.采血应直到血流停止，以确保血液样本与抗凝剂和保护剂的正确比率。

立即轻柔的倒转采血管8次进行混匀。

采血管反转防止凝血。

采血管颠倒不足或延迟，可能会导致不准确的测试结果。

4.血液样本可被存储在CellSave保护管中并进行输送。

请参阅CellSave保护管使用说明书。

不要冻存样本。

警告：

在使用CELLTRACKS®

系统检测之前，目视检查每个样本是否凝血。

凝血的样本应被丢弃。

CELLTRACKS®

系统检测过程

1.手动翻转5次保存样本血液的CellSave保护管。

然后拔出橡胶塞。

2.使用一支新的移液管从CellSave保护管中转移7.5ml血液到CELLSEARCH®

试剂盒提供的一个相应标记的15mlCELLSEARCH®

锥形管中。

3.再用一支新的移液管加入6.5ml稀释缓冲溶液到上述锥形管中。

4.盖上管盖，颠倒5次混匀。

5.样本离心，使用水平离心机800Xg离心10min。

该10min离心时间不包括达到800×

g所需要的时间。

将离心机刹车“关闭”或者，如果你的离心机提供可变制动功能，设置制动到最低刹车设置。

使用能够在室温下离心的离心机在室温条件下离心。

样本离心后，目视检查每个样品管中血浆和红血细胞是否分离。

6.运行CELLTRACKS®

系统之前，上述样本需要1h的准备时间。

请参阅CELLTRACKS®

系统用户指南的完整说明。

使用CELLTRACKS分析仪II®

orCellSpotter®

分析仪分析样本

系统使用CELLTRACKS分析仪II®

或CellSpotter®

分析仪将处理好的样本分配放入到暗盒中准备进行分析。

MAGNEST®

装置内的放有样本的暗盒应在黑暗中至少孵育20分钟，并在24小时内进行分析。

请参阅CELLTRACKS分析仪II®

分析仪用户指南的样本分析和数据审查说明。

质量控制

CELLSEARCH®

循环肿瘤细胞质控试剂盒（目录＃7900003）检查整个系统的性能，包括仪器，试剂和操作。

在病人测试的每一天或使用大量新的CELLSEARCH®

试剂盒时，CELLSEARCH®

循环肿瘤细胞质控应该进行。

请参阅CELLSEARCH®

循环肿瘤细胞质控试剂盒使用说明书和预期值。

结果解释

结果以7.5ml血液中CTC的个数报告。

转移性的乳腺癌（MBC）

在治疗过程中的任何时期，7.5ml血液中CTC数量≥5，表示预后差。

预示着短的无进展生存期和总体生存期。

转移性的结直肠癌（MCRC）

在治疗过程中的任何时期，7.5ml血液中CTC数量≥3，表示预后差。

转移性的前列癌（MPC）

注意

如果每7.5ml的样本血液中，有500个或更多的CTC数量，样品残留可能影响CELLTRACKS®

系统对随后样本包括后续批次的分析。

如果细胞被延续到后续样本中，这些样本的CTC数量可能错误地比病人的实际的CTC计数更高。

AUTOPREP®

用户指南以获取更多信息。

局限

●CELLSEARCH®

结果应按照合适的病人管理程序与来自于诊断测试（即影像学，实验室检查）、体检和完整病史等所有的临床信息结合使用。

●本预后研究并没有证明任何当前治疗效果要比任何其他治疗或不治疗效果要好或者是差。

计数结果和成像效果与评