芍药苷提取分离研究报告2Word格式文档下载.docx
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备注
圆底烧瓶
1000、2000mL/24mm500、
1只各
球形冷凝管
400mL/24mm×
2
1支
烧杯
1000mL100、
锥形瓶
、2501000mL
铁架台
1副
带铁夹
玻璃棒
一根
克氏蒸馏头
224mm×
一只
尾接管
2×
24mm
1支
数字恒温水浴锅HH-2型
4孔
1台
国华电器有限公司
循环水式真空泵、SHB-3
2孔
郑州长城科工贸有限公司
布式漏斗
400mL
1只
旋转蒸发仪
展开缸
1个
蒸发皿
个1
玻璃板
5cm×
10cm
25块
三角瓶
50mL
20个
层析柱
8×
100cm
1根
钢盆
只1
胶头滴管
吸耳球
个2
量筒
10mL
移液管
0.50mL
1支
具支试管
钉子漏斗
个1
烘箱
一台
试剂
名称
规格
厂家及批号浸膏
用量
乙酸乙酯
CP
天津市东丽区天大化学试剂厂20080218
3000mL
98%乙醇
4000mL
甲醇
洛阳昊华化学试剂有限公司060403
500mL
三氯甲烷
天津市富宇精细化工有限公司80423
活性炭
350g
G硅胶
青岛海浪硅胶干燥剂厂
310g
由于水提率不如醇提，有关芍药苷的提取常用水提、醇提以及超声三种方法。
分离采用活性炭吸附及硅而超声又会影响芍药苷结构的稳定性，所以采用醇提。
胶柱层析。
具体操作流程如下：
【流程图】：
）赤芍粉末（500g次，1h/次，合并提取液70%乙醇回流3过滤药渣滤液）60减压浓缩（T≤℃
乙醇水溶液（回收）浓缩液300g1500ml水溶解活性炭吸附过滤活性炭滤液水洗至无色（过滤）滤液活性炭醇洗30%活性炭（回收）醇水溶液TLC鉴定没有芍药苷80%醇洗直到
活性炭滤液
℃）≤60T减压浓缩（
乙醇溶液（回收）
纯乙酸乙酯洗脱硅胶柱层析（干法）
洗脱液
减压浓缩至干
芍药苷
【具体操作】
，用粉碎机粉碎成细粉。
取500g赤芍干燥根切片醇水溶液回流提取次，每乙醇提取346倍、倍量70%250g加入2000mL圆底烧瓶中，分别以8倍、次的浓缩。
每提取一次便浓缩一次，回收乙醇便可循环利用，合并3次提取1h液。
另一半药材以同样的方式处理，合并所有的浓缩液。
取部分浓缩液稀释，加入活性炭吸附，过滤，将滤活性炭吸附分离液和原液进行硅胶薄层点样，喷以显色剂，观察活性炭是否能将芍药苷吸附住，鉴别如下：
TLC
：
展开剂——氯仿：
乙酸乙酯：
甲醇：
甲酸40。
显色剂——香草醛：
：
0.2（药典）5：
10。
配置方法：
取0.1g香草醛，5硫酸：
80：
15浓盐酸溶解，取其2.5mL溶液于显色喷以10mL7.5mL，摇匀40mL瓶中，加甲醇，再加浓硫酸即得。
药典记载，芍药苷遇香草醛会显现蓝紫色斑点。
右边为吸附后滤液点样点，左边为吸附前样液。
箭头所指为蓝紫色斑点。
样点浓缩液，都稀2mLTLC鉴别可知，芍药苷可以被活性炭吸附。
取9份由、60%、70%30%、40%、50%、、分别以10mL释到，加入等量的活性炭3g,10%、20%及以上浓度的乙醇都能将芍药苷洗40%检测，80%、90%乙醇溶液洗脱，经TLC:
脱，而之前的都不能洗脱，部分点样如下
乙40%、50%、从右至左分别为20%30%、醇溶液的洗脱液点样点。
从上至下分别为蓝紫色斑点、浅黄色斑点、点样点。
及更低浓30%由图可以判断芍药苷不能被
及以上浓度的乙醇但40%度的乙醇洗脱下来，都可以洗脱。
将所有浓缩液与以上检测液合并，加1500mL蒸馏水稀释，加入350g经
105℃活化1h的活性炭吸附。
搅拌，0.5h后过滤。
滤液TLC检测没有发现蓝紫色斑点，说明芍药苷完全被活性炭所吸附。
滤出的活性炭先以自来水洗至无色，再用80%乙醇溶液进行洗脱，直到洗脱液经TLC检测没有蓝紫色斑点为止，说明被吸附的芍药苷都被洗脱下来。
将各次的洗脱液旋转蒸发浓缩，温度应小于60℃。
在进行硅胶柱层析之前应先选择合适的洗脱剂才洗脱剂的选择
能得到较纯的分离物，提高分离效率及节约成本。
取3mL浓缩液稀释至10mL作点样液。
展开剂—氯仿：
甲醇8：
1
①、②、③、分别为蓝紫色斑点、浅黄色
斑点、点样点。
可见芍药苷与另一种物质的Rf太接近，难以分离。
①②
③
最右端为浓缩液，其余皆为稀释液。
①、②、③、④、⑤依次为浅红、蓝紫、
棕黄、浅黄、点样点。
①
②
④
⑤
3
①为蓝紫色斑点，但出现严重拖尾现象，作为洗脱
剂是不可取的。
展开剂—纯乙酸乙酯
①①、②、③分别为浅红、蓝紫色、点样斑点，与
氯仿--甲醇8：
2的展开系统相比，既使芍药苷与极
性更大的物质如多糖等分开又与极性小的物质如跑
在前面的红色斑点分开，所以选择纯乙酸
②乙酯作为上柱洗脱剂比较合理。
采用干法上柱。
取110g旧硅胶G和200g新硅硅胶柱层析分离
胶G于烘箱中105℃活化1.5h。
用蒸发皿将浓缩液浓缩成浸膏，以适量98%乙醇溶解，与活化好的旧硅胶拌样，自然风干，再放到烘箱中80℃干燥2h。
取8×
100cm层析柱，检测不漏水，塞上脱脂棉，松紧适宜。
先以新硅胶
装柱，以吸耳球敲实整平，垫一张滤纸，再装干燥好的拌样旧硅胶，敲实整平，再垫一张滤纸。
以玻璃棒引流加入纯乙酸乙酯，打开活塞，开到最大，使乙酸．
乙酯排尽柱中的空气，当有液滴流出时，旋转活塞调节流速2ml/min左右。
用50mL三角瓶接取流份，30mL/份，TLC检测，用药典展开剂氯仿：
甲酸40：
5：
10：
0.2。
合并显色斑点相同的流份旋转蒸发浓缩。
从第55流份开始，只有红色斑点，253nm荧光灯下观察无点；
从第73流份，开始出现蓝紫色斑点，而80到90（第90流份借了200mL）流份没有任何斑点；
从第91到183流份只有蓝紫色斑点，253nm荧光灯下观察无点，接收流份增至50mL/份；
之后到186流份没有斑点，卸柱。
将91至183流份分步旋转蒸发浓缩，将浓缩液收集与500mL输液瓶中。
在收集过程中有白色粉末析出，部分粉末结块于瓶底，加热只有部分能溶解。
加少量甲醇完全溶解，过滤，转置50mL锥形瓶中自然结晶，不成，冷冻干燥得干粉，称重3.1g。
【鉴定】
·
TLC鉴定显蓝紫色斑点
展开剂--氯仿：
甲酸
40：
0.2（药典）。
显色剂—香草醛：
硫酸5：
15。
·
处有最大吸收峰，为芍药苷特征吸收峰。
紫外检测再230nm
高效液相测定
供试液制备精密称定芍药总苷24mg，置经洗净的10mL容量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度，摇匀，密塞，即得。
S_GC,5um色谱柱；
流动相：
甲醇—水（35：
色谱条件65）el；
18
柱温：
室温；
流速：
1mL/min；
检测波长230nm；
进样量为20uL；
tR=5.65±
0.25min。
，即芍药苷含量为处主峰所占比例为87.37%对峰面积进行计算，其中230nm87.37%。
【结果】，经高效液相测定芍3.1g46经天试验得到淡黄色芍药总苷冷冻干燥粉
。
药苷含量为87.37%【讨论】药材提取浓缩液出现沉淀问题●
棕色浓缩液中出现了褐赤芍粉末经醇提过滤浓缩，醇提水沉，静置一夜后，
色的沉淀，轻摇即散，没有将其过滤出来进行检测。
●活性炭吸附洗脱问题在醇溶液中是不能吸附或吸附一定要在水溶液中进行，采用活性炭吸附时，而只是将其没有将醇提液浓缩成浸膏再以水溶解，效果极差的。
但实际操作中，浓缩至闻之没有乙醇的气味便加入了活性炭，能完全吸附含侥幸成分。
洗脱时，的乙醇洗掉部分杂质。
一定要先用水洗至无色，洗掉色素及其他杂质，再用30%乙醇洗了一遍，以致残留但实际操作中，没有以水洗至完全无
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