芍药苷提取分离研究报告2Word格式文档下载.docx

1、备 注 圆底烧瓶 1000、2000mL/24mm 500、 1只各球形冷凝管 400mL/24mm2 1支烧杯 1000mL 100、锥形瓶 、2501000mL 铁架台 1副 带铁夹玻璃棒 一根 克氏蒸馏头2 24mm一只 尾接管 2 24mm1支 数字恒温水浴锅HH-2型4孔 1台 国华电器有限公司 循环水式真空泵 、SHB-32孔 郑州长城科工贸有限公司 布式漏斗400mL 1只 旋转蒸发仪 展开缸1个 蒸发皿 个1 玻璃板5cm10cm 25块 三角瓶50mL 20个 层析柱8100cm 1根 钢盆只1 胶头滴管 吸耳球个2 量筒10mL 移液管0.50mL 1 支 具支试管 钉子漏

2、斗个1 烘箱 一台 试剂名称 规 格厂家及批号 浸膏 用量 乙酸乙酯CP 天津市东丽区天大化学试剂厂 20080218 3000mL 98%乙醇4000mL 甲醇洛阳昊华化学试剂有限公司 060403 500mL 三氯甲烷天津市富宇精细化工有限公司 80423 活性炭350g G 硅胶 青岛海浪硅胶干燥剂厂310g 由于水提率不如醇提，有关芍药苷的提取常用水提、醇提以及超声三种方法。分离采用活性炭吸附及硅而超声又会影响芍药苷结构的稳定性，所以采用醇提。 胶柱层析。具体操作流程如下： 【流程图】： ）赤芍粉末（500g 次，1h/次，合并提取液70%乙醇回流3 过滤 药渣滤液 ） 60减压浓缩（

3、T 乙醇水溶液（回收）浓缩液 300g1500ml水溶解活性炭吸附 过滤 活性炭滤液 水洗至无色（过滤） 滤液活性炭 醇洗30% 活性炭（回收） 醇水溶液 TLC鉴定没有芍药苷80%醇洗 直到 活性炭 滤液 ） 60T减压浓缩（ 乙醇溶液（回收） 纯乙酸乙酯洗脱硅胶柱层析（干法） 洗脱液 减压浓缩至干 芍药苷 【具体操作】 ，用粉碎机粉碎成细粉。取500g赤芍干燥根切片 醇水溶液回流提取次，每乙醇提取346倍、倍量70%250g加入2000mL圆底烧瓶中，分别以8倍、次的浓缩。每提取一次便浓缩一次，回收乙醇便可循环利用，合并3次提取 1h液。另一半药材以同样的方式处理，合并所有的浓缩液。取部分

4、浓缩液稀释，加入活性炭吸附，过滤，将滤 活性炭吸附分离液和原液进行硅胶薄层点样，喷以显色剂，观察活性炭是否能将芍药苷吸附住，鉴别如下：TLC ：展开剂氯仿：乙酸乙酯：甲醇：甲酸 40 。显色剂香草醛：0.2（药典）5：10 。配置方法：取0.1g香草醛， 5硫酸：80：15 浓盐酸溶解，取其2.5mL溶液于显色喷以10mL 7.5mL，摇匀40mL瓶中，加甲醇，再加浓硫酸 即得。药典记载，芍药苷遇香草醛会显现蓝紫 色斑点。 右边为吸附后滤液点样点，左边为吸附前样液 。箭头所指为蓝紫色斑点。 样点浓缩液，都稀2mLTLC鉴别可知，芍药苷可以被活性炭吸附。取9份由、60%、70%30%、40%、5

5、0%、分别以10mL释到，加入等量的活性炭3g,10%、20%及以上浓度的乙醇都能将芍药苷洗40%检测，80%、90%乙醇溶液洗脱，经TLC:脱，而之前的都不能洗脱，部分点样如下乙40%、50%、从右至左分别为20%30%、醇溶液的洗脱液点样点。从上至下分别 为蓝紫色斑点、浅黄色斑点、点样点。及更低浓30%由图可以判断芍药苷不能被 及以上浓度的乙醇但40%度的乙醇洗脱下来， 都可以洗脱。将所有浓缩液与以上检测液合并，加1500mL蒸馏水稀释，加入350g经 105活化1h的活性炭吸附。搅拌，0.5h后过滤。滤液TLC检测没有发现蓝紫色斑点，说明芍药苷完全被活性炭所吸附。滤出的活性炭先以自来水洗

6、至无色，再用80%乙醇溶液进行洗脱，直到洗脱液经TLC检测没有蓝紫色斑点为止，说明被吸附的芍药苷都被洗脱下来。将各次的洗脱液旋转蒸发浓缩，温度应小于60。在进行硅胶柱层析之前应先选择合适的洗脱剂才 洗脱剂的选择 能得到较纯的分离物，提高分离效率及节约成本。取3mL浓缩液稀释至10mL作点样液。展开剂氯仿：甲醇 8：1 、分别为蓝紫色斑点、浅黄色 斑点、点样点。可见芍药苷与另一种物质的Rf太接近，难以分离。 最右端为浓缩液，其余皆为稀释液。、依次为浅红、蓝紫、 棕黄、浅黄、点样点。 3 为蓝紫色斑点，但出现严重拖尾现象，作为洗脱 剂是不可取的。展开剂纯乙酸乙酯 、分别为浅红、蓝紫色、点样斑点，与

7、 氯仿-甲醇 8：2的展开系统相比，既使芍药苷与极 性更大的物质如多糖等分开又与极性小的物质如跑 在前面的红色斑点分开，所以选择纯乙酸 乙酯作为上柱洗脱剂比较合理。采用干法上柱。取110g旧硅胶G和200g新硅 硅胶柱层析分离 胶G于烘箱中105活化1.5h。用蒸发皿将浓缩液浓缩成浸膏，以适量98%乙醇溶解，与活化好的旧硅胶拌样，自然风干，再放到烘箱中80干燥2h。取8100cm层析柱，检测不漏水，塞上脱脂棉，松紧适宜。先以新硅胶 装柱，以吸耳球敲实整平，垫一张滤纸，再装干燥好的拌样旧硅胶，敲实整平，再垫一张滤纸。以玻璃棒引流加入纯乙酸乙酯，打开活塞，开到最大，使乙酸乙酯排尽柱中的空气，当有液

8、滴流出时，旋转活塞调节流速2ml/min左右。用50mL三角瓶接取流份，30mL/份，TLC检测，用药典展开剂氯仿：甲酸 40：5：10：0.2。合并显色斑点相同的流份旋转蒸发浓缩。从第55流份开始，只有红色斑点，253nm荧光灯下观察无点；从第73流份，开始出现蓝紫色斑点，而80到90（第90流份借了200mL）流份没有任何斑点；从第91到183流份只有蓝紫色斑点，253nm荧光灯下观察无点，接收流份增至50mL/份；之后到186流份没有斑点，卸柱。将91至183流份分步旋转蒸发浓缩，将浓缩液收集与500mL输液瓶中。在收集过程中有白色粉末析出，部分粉末结块于瓶底，加热只有部分能溶解。加少量

9、甲醇完全溶解，过滤，转置50mL锥形瓶中自然结晶，不成，冷冻干燥得干粉，称重3.1g。【鉴定】 TLC鉴定显蓝紫色斑点 展开剂-氯仿：甲酸 40：0.2（药典）。显色剂香草醛：硫酸 5：15。 处有最大吸收峰，为芍药苷特征吸收峰。紫外检测再230nm 高效液相测定 供试液制备 精密称定芍药总苷24mg，置经洗净的10mL容量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度，摇匀，密塞，即得。 S_GC,5um色谱柱；流动相：甲醇水（35：色谱条件 65）el ； 18 柱温：室温；流速：1mL/min；检测波长230nm；进样量为20uL；tR=5.650.25min。，即芍药苷含量为处主峰所占比例为87.37%对

10、峰面积进行计算，其中230nm 87.37%。 【结果】，经高效液相测定芍3.1g46经天试验得到淡黄色芍药总苷冷冻干燥粉 。药苷含量为87.37% 【讨论】 药材提取浓缩液出现沉淀问题 棕色浓缩液中出现了褐赤芍粉末经醇提过滤浓缩，醇提水沉，静置一夜后， 色的沉淀，轻摇即散，没有将其过滤出来进行检测。 活性炭吸附洗脱问题在醇溶液中是不能吸附或吸附一定要在水溶液中进行， 采用活性炭吸附时，而只是将其没有将醇提液浓缩成浸膏再以水溶解，效果极差的。但实际操作中，浓缩至闻之没有乙醇的气味便加入了活性炭，能完全吸附含侥幸成分。洗脱时，的乙醇洗掉部分杂质。一定要先用水洗至无色，洗掉色素及其他杂质，再用30% 乙醇洗了一遍，以致残留但实际操作中，没有以水洗至完全无