食品卫生微生物学检验菌落总数检查操作程序_精品文档文档格式.doc
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平板计数琼脂培养基
以上实验所需干粉培养基均由中检所提供,分别按说明加适量水加热溶解后,塞上胶塞,湿热灭菌30分钟备用。
1.1.2无菌衣
将无菌衣、头罩、口罩、乳胶手套叠好,置于无菌衣袋中,湿热灭菌30分钟。
1.2无菌室及操作台的准备
用0.1%的新洁尔灭溶液或75%乙醇溶液将操作台,天花板,墙壁,地面擦洗一遍,同时将操作台用0.1%新洁尔灭溶液或75%乙醇溶液擦洗一遍。
将实验所需物品通过传递窗移入无菌室,打开空气净化系统,打开紫外灯,杀菌0.5-1个小时。
2实验操作
2.1进入无菌室更衣间,用0.1%新洁尔灭溶液或75%乙醇溶液消毒手及腕部至少一分钟,戴上头罩、口罩,穿好无菌衣及无菌手套后,进入无菌室,开始实验操作。
菌落总数操作程序
选择2-3个适宜稀释度的样品匀液,各取1ml分别放入无菌皿内
检样
25g(ml)样品+225ml稀释液,均质
10倍系列稀释
每皿中加入15-20ml平板计数琼脂培养基,混匀
培养
计算菌落总数
报告
计数各平板菌落数
2.2供试液的稀释及操作
2.2.1固体:
取供试品25g,加无菌生理盐水225ml,溶解混匀,作为1:
10的供试液。
2.2.2液体:
取供试品25ml,加无菌生理盐水225ml,溶解混匀,作为1:
2.2.3用1ml无菌吸管或微量移液器吸取1:
10样品匀液1ml,沿管壁缓慢注于盛有9ml稀释液的无菌试管中,振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成1:
100的样品匀液。
2.2.4按以上操作程序,制备10倍系列稀释样品匀液。
每递增稀释一次,换用1次1ml无菌吸管或吸头。
2.2.5根据对样品污染状况的估计,选择2-3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在进行10倍递增稀释时,吸取1ml样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。
同时,分别吸取1ml空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。
2.2.6及时交15-20ml冷却至46的平析计数琼脂培养基倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。
2.2.7待琼脂凝固后,将平板翻转,36℃±
1℃培养48±
2小时。
如果样品中可能含有在琼脂培养表面弥漫生长的菌落时,可在凝固后的琼脂覆盖一薄层琼脂培养基,凝固后翻转平板培养。
2.3菌落计数
2.3.1做平板菌落计数时,可用肉眼观察。
必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量。
2.4菌落计数的报告
2.4.1平板菌落数的选择
选取菌落数在30-300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。
低于30CFU的平板记录具体菌落数,大于300CFU的可记录为多不可计。
每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数;
其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片
状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;
若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘2,代表一个平板菌落数。
平板内出现菌落间无明显界线的链状生长时,则应将每条单链作为一个菌落计数。
2.4.2菌落总数的计算方法
2.4.2.1若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内,计算两个平板菌落数的平均值,再将平均值乘以相应稀释度,作为每g(ml)样品中菌落总数结果。
2.4.2.2若有两个连续稀释度的平均菌落数在适宜计数范围内时,按以下公式计算:
ΣC
N=
(n1+0.1n2)d
式中:
N——样品中菌落数;
ΣC——平板(含适宜范围菌落数的平板)菌落数之和;
n1——第一稀释度(低稀释度)平板个数;
n2——第二稀释度(高稀释度)平板个数;
d——稀释因子(第一稀释度)
2.4.2.3若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU,则对稀释度最高的平板进行计数,其他平板可记录为多不可计,结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
2.4.2.4若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
2.4.2.5若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数计算。
2.4.2.6若所有稀释度的平板菌落数均不在30-300CFU之间,其中一部分小于30CFU或大于300CFU,则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
2.4.3菌落数的报告
菌落数小于100CFU时,按“四舍五入”原则修约,以整数报告;
菌落数大于或等于100时,第3位数字采用“四舍五入”原则修约后,取前2位数字,后面用0代替位
数;
也可用10的指数形式来表示,按“四舍五入”原则修约后,采用两位有效数字;
若所有平板上为蔓延菌落而无法计数,则报告菌落蔓延;
若空白对照上有菌落生长,则此次检测结果无效。
称重取样以CFU/g为单位报告,体积取样以CFU/ml为单位报告。