一次性使用卫生用品产品微生物检测方法_精品文档Word格式文档下载.doc

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如被检样品含有大量吸水树脂材料而导致不能吸出足够样液时，稀释液量可按每次50mL递增，直到能吸出足够测试用样液。

在计算细菌菌落总数与真菌菌落总数时应调整稀释度。

B2细菌菌落总数与初始污染菌检测方法

本方法适用于产品初始污染菌与细菌菌落总数（以下统称为细菌菌落总数）检测。

B2.1操作步骤

待上述生理盐水样液自然沉降后取上清液作菌落计数。

共接种5个平皿，每个平皿中加入1mL样液，然后用冷却至45℃左右的熔化的营养琼脂培养基15～20mL倒入每个平皿内混合均匀。

待琼脂凝固后翻转平皿置35℃±

2℃培养48h后，计算平板上的菌落数。

B2.2结果报告

菌落呈片状生长的平板不宜采用；

计数符合要求的平板上的菌落，按式（B1）计算结果：

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式中：

X1――细菌菌落总数，cfu/g或cfu/mL；

A――5块营养琼脂培养基平板上的细菌菌落总数；

K――稀释度。

当菌落数在100以内，按实有数报告，大于100时采用二位有效数字。

如果样品菌落总数超过本标准的规定，按B2.3进行复检和结果报告。

B2.3复检方法

将留存的复检样品依前法复测2次，2次结果平均值都达到本标准的规定，则判定被检样品合格；

其中有任何1次结果平均值超过本标准规定，则判定被检样品不合格。

B3大肠菌群检测方法

B3.1操作步骤

取样液5mL接种50mL乳糖胆盐发酵管，置35℃±

2℃培养24h，如不产酸也不产气，则报告为大肠菌群阴性。

如产酸产气，则划线接种伊红美蓝琼脂平板，置35℃±

2℃培养18～24h，观察平板上菌落形态。

典型的大肠菌落为黑紫色或红紫色，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润，常具有金属光泽，也有的呈紫黑色，不带或略带金属光泽，或粉红色，中心较深的菌落。

取疑似大肠菌落1～2个作革兰氏染色镜检，同时接种乳糖发酵管，置35℃±

2℃培养24h，观察产气情况。

B3.2结果报告

凡乳糖胆盐发酵管产酸产气，乳糖发酵管产酸产气，在伊红美蓝平板上有典型大肠菌落，革兰氏染色为阴性无芽胞杆菌，可报告被检样品检出大肠杆菌。

B4绿脓杆菌检测方法

B4.1操作步骤

取样液5mL，加入到50mLSCDLP培养液中，充分混匀，置35℃±

2℃培养18～24h.如有绿脓杆菌生长，培养液表面呈现一层薄菌膜，培养液常呈黄绿色或蓝绿色。

从培养液的薄菌膜处挑取培养物，划线接种十六烷三甲基溴化铵琼脂平板，置35℃±

2℃培养18～24h，观察菌落特征。

绿脓杆菌在此培养基上生长良好，菌落扁平，边缘不整，菌落周围培养基略带粉红色，其他菌不长。

取可疑菌落涂片作革兰氏染色，镜检为革兰氏阴性菌者应进行下列试验：

氧化酶试验：

取一小块洁净的白色滤纸片放在灭菌平皿内，用无菌玻棒挑取可疑菌落涂在滤纸片上，然后在其上滴加一滴新配制的1％二甲基对苯二胺试液，30s内出现粉红色或紫红色，为氧化酶试验阳性，不变色者为阴性。

绿脓菌素试验：

取2～3个可疑菌落，分别接种在绿脓菌素测定用培养基斜面，35℃±

2℃培养24h，加入三氯甲烷3～5mL，充分振荡使培养物中可能存在的绿脓菌素溶解，待三氯甲烷呈蓝色时，用吸管移到另一试管中并加入1mol/L的盐酸1mL，振荡后静置片刻。

如上层出现粉红色或紫红色即为阳性，表示有绿脓菌素存在。

硝酸盐还原产气试验：

挑取被检菌纯培养物接种在硝酸盐胨水培养基中，置35℃±

2℃培养24h，培养基小倒管中有气者即为阳性。

明胶液化试验：

取可疑菌落纯培养物，穿刺接种在明胶培养基内，置35℃±

2℃培养24h，取出放于4～10℃，如仍呈液态为阳性，凝固者为阴性。

42℃生长试验：

挑取可疑培养物，接种在普通琼脂斜面培养基上，置42℃培养24～48h，有绿脓杆菌生长为阳性。

B4.2结果报告

被检样品经增菌分离培养后，证实为革兰氏阴性杆菌，氧化酶及绿脓杆菌试验均为阳性者，即可报告被检样品中检出绿脓杆菌。

如绿脓菌素试验阴性而液化明胶、硝酸盐还原产气和42℃生长试验三者皆为阳性时，仍可报告被检样品中检出绿脓杆菌。

B5金黄色葡萄球菌检测方法

B5.1操作步骤

2℃培养24h.

自上述增菌液中取1～2接种环，划线接种在血琼脂培养基上，置35℃±

2℃培养24～48h.在血琼脂平板上该菌菌落呈金黄色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶血圈。

挑取典型菌落，涂片作革兰氏染色镜检，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列成葡萄状，无芽胞与荚膜。

镜检符合上述情况，应进行下列试验：

甘露醇发酵试验：

取上述菌落接种甘露醇培养液，置35℃±

2℃培养24h，发酵甘露醇产酸者为阳性。

血浆凝固酶试验：

玻片法：

取清洁干燥载玻片，一端滴加一滴生理盐水，另一端滴加一滴兔血浆，挑取菌落分别与生理盐水和血浆混合，5min如血浆内出现团块或颗粒状凝块，而盐水滴仍呈均匀混浊无凝固则为阳性，如两者均无凝固则为阴性。

凡盐水滴与血浆滴均有凝固现象，再进行试管凝固酶试验；

试管法：

吸取1∶4新鲜血浆0.5mL，放灭菌小试管中，加入等量待检菌24h肉汤培养物0.5mL.混匀，放35℃±

2℃温箱或水浴中，每半小时观察一次，24h之内呈现凝块即为阳性。

同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物各0.5mL作阳性与阴性对照。

B5.2结果报告

凡在琼脂平板上有可疑菌落生长，镜检为革兰氏阳性葡萄球菌，并能发酵甘露醇产酸，血浆凝固酶试验阳性者，可报告被检样品检出金黄色葡萄球菌。

B6溶血性链球菌检测方法

B6.1操作步骤

取样液5mL加入到50mL葡萄糖肉汤，35℃±

将培养物划线接种血琼脂平板，35℃±

2℃培养24h观察菌落特征。

溶血性链球菌在血平板上为灰白色，半透明或不透明，针尖状突起，表面光滑，边缘整齐，周围有无色透明溶血圈。

挑取典型菌落作涂片革兰氏染色镜检，应为革兰氏阳性，呈链状排列的球菌。

链激酶试验：

吸取草酸钾血浆0.2mL（0.01g草酸钾加5mL兔血浆混匀，经离心沉淀，吸取上清液），加入0.8mL灭菌生理盐水，混匀后再加入待检菌24h肉汤培养物0.5mL和0.25％氯化钙0.25mL，混匀，放35℃±

2℃水浴中，2min观察一次（一般10min内可凝固），待血浆凝固后继续观察并记录溶化时间。

如2h内不溶化，继续放置24h观察，如凝块全部溶化为阳性，24h仍不溶化为阴性。

杆菌肽敏感试验：

将被检菌菌液涂于血平板上，用灭菌镊子取每片含0.04单位杆菌肽的纸片放在平板表面上，同时以已知阳性菌株作对照，在35℃±

2℃下放置18～24h，有抑菌带者为阳性。

B6.2结果报告

镜检革兰氏阳性链状排列球菌，血平板上呈现溶血圈，链激酶和杆菌肽试验阳性，可报告被检样品检出溶血性链球菌。

B7真菌菌落总数检测方法

B7.1操作步骤

待上述生理盐水样液自然沉降后取上清液作真菌计数，共接种5个平皿，每一个平皿中加入1mL样液，然后用冷却至45℃左右的熔化的沙氏琼脂培养基15～25mL倒入每个平皿内混合均匀，琼脂凝固后翻转平皿置25℃±

2℃培养7天，分别于3、5、7天观察，计算平板上菌落数，如果发现菌落蔓延，以前一次的菌落计数为准。

B7.2结果报告

菌落呈片状生产的平板不宜采用；

计数符合要求的平板上的菌落，按式（B2）计算结果：

X2――真菌菌落总数，cfu/g或cfu/mL；

B――5块沙氏琼脂培养基平板上的真菌菌落总数；

如果样品菌落总数超过本标准的规定，按B7.3进行复检和结果报告。

B7.3复检方法

将留存的复检样品依前法复测2次，2次结果都达到本标准的规定，则判定被检样品合格，其中有任何1次结果超过本标准规定，则判定被检样品不合格。

B8真菌定性检测方法

B8.1操作步骤

取样液5mL加入到50mL沙氏培养基中，25℃±

2℃培养7天，逐日观察有无真菌生长。

B8.2结果报告

培养管混浊应转种沙氏琼脂培养基，证实有真菌生长，可报告被检样品检出真菌。