动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告Word文档下载推荐.docx

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DNA对紫外线有吸收作用，利用这一特性，可以对DNA进行含量测定。

当核酸变性时，吸光度升高，称为增色效应；

当变性核酸重新复性时，吸光度又会恢复到原来的水平。

较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性，即DNA双链碱基间的氢键断裂，双螺旋结构解开—也称为DNA的解螺旋。

　　在细胞内，DNA能与蛋白质结合形成染色体，整组染色体则统称为染色体组。

对于人类而言，正常的体细中含有46条染色体。

染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制，细胞分裂间期又可划分为：

G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。

对于真核生物，如动物、植物及真菌而言，染色体主要存在于细胞核内；

而对于原核生物，如细菌而言，则主要存在于细胞质中的拟核内。

染

　　色体上的染色质蛋白，如组织蛋白，能够将DNA进行组织并压缩，以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用，进而调节基因的转录。

　　脱氧核糖核酸的结构

　　DNA的结构：

DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。

　　DNA是一种长链聚合物，组成单位为四种脱氧核苷酸，即腺嘌呤脱氧核苷酸、胸腺嘧啶脱氧核苷酸、胞嘧啶脱氧核苷酸、鸟嘌呤脱氧核苷酸。

而脱氧核糖与磷酸分子借酯键相连，组成其长链骨架，排列在外侧，四种碱基排列在内侧。

每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连，这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列，可组成遗传密码，指导蛋白质的合成。

读取密码的过程称为转录，是以DNA双链中的一条单链为模板转录出一段称为mRNA的核酸分子。

　　DNA是许多脱氧核苷酸按一定碱基顺序彼此用3’，5’-磷酸二酯键相连构成的长链。

大多数DNA含有两条这样的长链，也有的DNA为单链，如大肠杆菌噬菌体φX174、G4、M13等。

DNA有环形DNA和链状DNA之分。

在某些类型的DNA中，5-甲基胞嘧啶可在一定限度内取代胞嘧啶，其中小麦胚DNA的5-甲基胞嘧啶特别丰富。

在某些噬菌体中，5-羟甲基胞嘧啶取代了胞嘧啶。

40年代后期，查加夫发现不同物种DNA的碱基组成不同，但其中的腺嘌呤

　　数等于其胸腺嘧啶数，鸟嘌呤数等于胞嘧啶数，因而嘌呤数之和等于嘧啶数之和，一般用几个层次描绘DNA的结构。

　　浓盐法从动物组织中提取DNA

　　核酸和蛋白质在生物体中常以核蛋白的形式存在，其中DNP能溶于水及高浓度盐溶液，但在M的盐溶液中溶解度很低，而RNP则可溶于低盐溶液，因此可利用不同浓度的NaCl溶液将其从样品中分别抽提出来。

将抽提得到的DNP用SDS处理可将其分离DNA和蛋白质，用氯仿-异戊醇将蛋白质沉淀除去可得DNA上清，加入冷乙醇即可将其呈纤维状析出。

　　肝脏细胞

　　肝脏是肝细胞组成，肝细胞极小，肉眼看不到，必须通过显微镜才能看到。

人肝约有25亿个肝细胞，5000个肝细胞组成一个肝小叶，因此人肝的肝小叶总数约有50万个。

肝细胞为多角形，直径约为20-30/加（微米），有6-8个面，不同的生理条件下大小有差异，如饥饿时肝细胞体积变大。

每个肝细胞表面可分为窦状隙面、肝细胞面和胆小管面三种。

肝细胞里面含有许许多多复杂的细微结构:

如肝细胞核、肝细胞质、线粒体、内质网、溶酶体、高尔基氏体、微粒体及饮液泡等组成。

　　二、实验目的

　　1.掌握浓盐法从动物组织中提取DNA的原理与技术

　　三、实验原理

　　将抽提得到的DNP用SDS处理可将其分离DNA和蛋白质，用氯仿-异戊醇将蛋白质沉淀除去可得DNA上清，加入冷乙醇即可将其呈纤维状析出。

　　四、实验器材和材料试剂

　　实验器材：

　　①匀浆器　　②量筒　　③离心机　　④离心管　　⑤试管　　⑥吸管　　⑦恒温水浴锅实验材料：

　　①猪肝实验试剂：

　　①/L/L柠檬酸钠溶液

　　②95%乙醇　　③NaCl固体

　　④5%SDS溶液　　⑤V（氯仿）：

V20：

1的混合液

　　五、实验操作

　　1.称量

　　①称取一定质量的猪肝，加入2倍肝重的/L/L柠檬酸钠缓冲液并用匀浆器磨碎。

　　2.提取DNA

　　①量取肝糜4ml于10毫升离心管，在4000r/min下离心10min，沉淀中再加入8ml缓冲液于4000r/min离心5min；

　　②弃上清，取沉淀；

　　③将沉淀用10ml柠檬酸钠缓冲液完全洗入干净的小烧杯、加入5ml氯仿-异戊醇混合液、1mlSDS，振荡30min；

　　④缓慢加入固体NaCl，使其最终浓度为1mol/L；

⑤将溶液分装到2个10毫升离心管中，在4000r/min离心5min，取上清水相；

　　⑥在上述水相溶液中分别加等体积冷95%乙醇，边加边用玻棒慢慢朝一个方向搅动，将缠绕在玻棒上的凝胶状物用滤纸吸去多余的乙醇，即得DNA粗品；

　　⑦用8ml蒸馏水溶解DNA粗品于10ml离心管中。

　　③在粗提取DNA操作中，频繁地将DNA提取液转移至各个仪器内，可能有极小部分DNA提取液未倒净，残留在仪器壁上损耗掉，导致实验误差；

　　④在使用移液枪的过程中，可能因为操作不当或移液枪经常错误使用，出现仪器误差，导致吸取的DNA样液不精确，出现实验误差；

　　⑤在水相中加入乙醇析出DNA时，不是所有DNA均析出，有小部分依旧融在溶液，导致提取出的DNA含量偏低；

　　⑥标准曲线制作过程中出现些许误差；

　　总的来讲，本次试验结果是相对比较成功的，较为粗略地测量出猪肝中DNA的含量，并且较为熟练地掌握了浓盐法从动物组织中提取DNA的原理与技术，基本达到了本次实验的目的。

在今后的实验中会着重注意实验操作的严谨性，严格按照实验前拟定完全的实验步骤进行，保证将实验操作过程中可能出现的误差概率降到最低，尽可能达到预期的实验效果，完成自我的学习及锻炼过程。

　　⑥在上述水相溶液中分别加等体积冷95%乙醇，边加边用玻棒慢慢朝一个方向搅动，