动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告Word文档下载推荐.docx

1、DNA对紫外线有吸收作用，利用这一特性，可以对DNA进行含量测定。当核酸变性时，吸光度升高，称为增色效应；当变性核酸重新复性时，吸光度又会恢复到原来的水平。较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性，即DNA双链碱基间的氢键断裂，双螺旋结构解开也称为DNA的解螺旋。在细胞内，DNA能与蛋白质结合形成染色体，整组染色体则统称为染色体组。对于人类而言，正常的体细中含有46条染色体。染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制，细胞分裂间期又可划分为：G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。对于真核生物，如动物、植物及真菌而言，染色体主要存在于细胞核内

2、；而对于原核生物，如细菌而言，则主要存在于细胞质中的拟核内。染色体上的染色质蛋白，如组织蛋白，能够将DNA进行组织并压缩，以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用，进而调节基因的转录。脱氧核糖核酸的结构DNA的结构： DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。DNA是一种长链聚合物，组成单位为四种脱氧核苷酸，即腺嘌呤脱氧核苷酸、胸腺嘧啶脱氧核苷酸、胞嘧啶脱氧核苷酸、鸟嘌呤脱氧核苷酸。而脱氧核糖与磷酸分子借酯键相连，组成其长链骨架，排列在外侧，四种碱基排列在内侧。每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连，这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列，可组成遗传密码，指导蛋白质的

3、合成。读取密码的过程称为转录，是以DNA双链中的一条单链为模板转录出一段称为mRNA的核酸分子。DNA是许多脱氧核苷酸按一定碱基顺序彼此用3， 5-磷酸二酯键相连构成的长链。大多数DNA含有两条这样的长链，也有的DNA为单链，如大肠杆菌噬菌体X174、G4、M13等。DNA有环形DNA和链状DNA之分。在某些类型的DNA中，5-甲基胞嘧啶可在一定限度内取代胞嘧啶，其中小麦胚DNA的5-甲基胞嘧啶特别丰富。在某些噬菌体中，5-羟甲基胞嘧啶取代了胞嘧啶。40年代后期，查加夫发现不同物种DNA的碱基组成不同，但其中的腺嘌呤数等于其胸腺嘧啶数，鸟嘌呤数等于胞嘧啶数，因而嘌呤数之和等于嘧啶数之和，一般用

4、几个层次描绘DNA的结构。浓盐法从动物组织中提取DNA核酸和蛋白质在生物体中常以核蛋白的形式存在，其中DNP能溶于水及高浓度盐溶液，但在 M的盐溶液中溶解度很低，而RNP则可溶于低盐溶液，因此可利用不同浓度的NaCl溶液将其从样品中分别抽提出来。将抽提得到的DNP用SDS处理可将其分离DNA和蛋白质，用氯仿-异戊醇将蛋白质沉淀除去可得DNA上清，加入冷乙醇即可将其呈纤维状析出。肝脏细胞肝脏是肝细胞组成，肝细胞极小，肉眼看不到，必须通过显微镜才能看到。人肝约有25亿个肝细胞，5000个肝细胞组成一个肝小叶，因此人肝的肝小叶总数约有50万个。肝细胞为多角形，直径约为20-30/加（微米），有6-8

5、个面，不同的生理条件下大小有差异，如饥饿时肝细胞体积变大。每个肝细胞表面可分为窦状隙面、肝细胞面和胆小管面三种。肝细胞里面含有许许多多复杂的细微结构:如肝细胞核、肝细胞质、线粒体、内质网、溶酶体、高尔基氏体、微粒体及饮液泡等组成。二、实验目的1.掌握浓盐法从动物组织中提取DNA的原理与技术三、实验原理将抽提得到的DNP用SDS处理可将其分离DNA和蛋白质，用氯仿-异戊醇将蛋白质沉淀除去可得DNA上清，加入冷乙醇即可将其呈纤维状析出。四、实验器材和材料试剂实验器材：匀浆器量筒离心机离心管试管吸管恒温水浴锅 实验材料：猪肝 实验试剂：/L /L 柠檬酸钠溶液95%乙醇NaCl固体5%SDS溶液V（

6、氯仿）：V20：1的混合液五、实验操作1.称量称取一定质量的猪肝，加入2倍肝重的/L /L柠檬酸钠缓冲液并用匀浆器磨碎。2.提取DNA量取肝糜4 ml 于10毫升离心管，在4000r/min下离心10min ，沉淀中再加入8 ml缓冲液于4000r/min离心5 min；弃上清，取沉淀；将沉淀用10 ml柠檬酸钠缓冲液完全洗入干净的小烧杯、加入5 ml 氯仿-异戊醇混合液、1 ml SDS，振荡30min；缓慢加入固体NaCl，使其最终浓度为1mol/L； 将溶液分装到2个10毫升离心管中，在4000r/min离心5 min，取上清水相；在上述水相溶液中分别加等体积冷95%乙醇，边加边用玻棒慢

7、慢朝一个方向搅动，将缠绕在玻棒上的凝胶状物用滤纸吸去多余的乙醇，即得DNA粗品；用8ml蒸馏水溶解DNA粗品于10ml离心管中。在粗提取DNA操作中，频繁地将DNA提取液转移至各个仪器内，可能有极小部分DNA提取液未倒净，残留在仪器壁上损耗掉，导致实验误差；在使用移液枪的过程中，可能因为操作不当或移液枪经常错误使用，出现仪器误差，导致吸取的DNA样液不精确，出现实验误差；在水相中加入乙醇析出DNA时，不是所有DNA均析出，有小部分依旧融在溶液，导致提取出的DNA含量偏低；标准曲线制作过程中出现些许误差；总的来讲，本次试验结果是相对比较成功的，较为粗略地测量出猪肝中DNA的含量，并且较为熟练地掌握了浓盐法从动物组织中提取DNA的原理与技术，基本达到了本次实验的目的。在今后的实验中会着重注意实验操作的严谨性，严格按照实验前拟定完全的实验步骤进行，保证将实验操作过程中可能出现的误差概率降到最低，尽可能达到预期的实验效果，完成自我的学习及锻炼过程。在上述水相溶液中分别加等体积冷95%乙醇，边加边用玻棒慢慢朝一个方向搅动，